1.一種LAMP引物組,其特征在于,所述的引物組包含有:
F3,序列為GCTCAAATGCAATTGGAGTA、
B3,序列為TCCTATTGGATACACTACGAAT、
FIP,序列為TGCCAAGAAGTGTAGTACTACGAATCAGTATGGGAAGCTATTAGCAA、
BIP,序列為GGTTAGGTAGGGAATACGAGTACATACAGGTGCAGAGAAAGC、
LF,序列為GATATGTTCCTCCATTGTATAGCCA、
LB,序列為GCTTCCGTCTAGGCATGCGT。
2.如權利要求1所述的引物組,其特征在于,所述的FIP的序列為TGCCAAGAAGTGTAGTACTACGAATCAGTATGGGAAGCTATTAGCAA。
3.如權利要求1所述的引物組,其特征在于,所述的BIP的序列為GGTTAGGTAGGGAATACGAGTACATACAGGTGCAGAGAAAGC。
4.如權利要求1或2所述的引物組,其特征在于,所述的FIP的5′端用生物素標記。
5.如權利要求1或3所述的引物組,其特征在于,所述的LF的5′端用FITC標記。
6.權利要求1所述的引物組在檢測海洋原甲藻中的應用。
7.一種檢測海洋原甲藻的試劑盒,其特征在于,所述的試劑盒包含有權利要求1-5任一項所述的引物組。
8.一種檢測有害藻類海洋原甲藻的方法,其特征在于,所述的方法包括如下步驟
1)配制LAMP反應體系:
各引物的終濃度為:內引物PM-FIP和PM-BIP各1.6μmol/L,外引物PM-F3和PM-B3各0.2μmol/L,環引物PM-LF和PM-LB各0.8μmol/L;緩沖液組成及濃度為:Tris-HCl(pH 8.8)20mmol/L、KCl 10mmol/L,MgSO4 8mmol/L,(NH4)2SO4 10mmol/L,0.1%的Tween20,Betaine 0.8mol/L,dNTPs 1.4mmol/L;8U Bst DNA聚合酶和2μL樣品DNA模板,加雙蒸水使反應體系總體積為25μL;
2)LAMP反應體系擴增:將上述反應體系進行核酸擴增反應,擴增反應所需溫度為61℃-65℃,擴增反應所需時間為30min-60min;
3)LFD檢測:取8μL核酸擴增產物將產物加入到100μL Buffer中混勻,然后將LFD試紙條垂直浸入混合溶液中顯色檢測,通過試紙條判斷擴增結果。