1.一種基于分子印跡技術的殼四糖單體分離提取方法,其特征在于,該分離提取方法步驟如下:
1)布袋式過濾:將殼聚糖酶解液用布袋式過濾機進行過濾,并靜置澄清20min,除去殼聚糖酶解液中的顆粒雜質和不溶物;
2)納濾膜過濾:將布袋式過濾機過濾后的液體用納濾膜G5進行過濾,獲得平均分子量小于1000DA的殼寡糖混合組分透過液;
3)殼四糖分子印跡樹脂吸附:將殼寡糖混合組分透過液流過裝有殼四糖分子印跡樹脂的樹脂柱,利用殼四糖分子印跡樹脂選擇性吸附透過液中的殼四糖,實現殼四糖單體與其它殼寡糖組分的分離;
4)殼四糖分子印跡樹脂洗脫:殼四糖分子印跡樹脂吸附飽和后,用洗脫劑進行洗脫;
5)脫除鋅離子:將洗脫液用活性炭G-60處理后過濾,使得殼四糖和鋅離子分離,殼四糖被活性炭吸附;收集活性炭,然后用乙醇與去離子水的混合液將殼四糖洗脫下來,并用鹽酸溶液調節溶液pH值至2-4;
6)冷凍干燥:收集殼四糖洗脫液,經真空濃縮凍干后,得到殼四糖單體產品。
2.根據權利要求1所述的一種基于分子印跡技術的殼四糖單體分離提取方法,其特征在于,所述的步驟2)中殼四糖分子印跡樹脂的合成方法如下:
殼四糖分子印跡樹脂中各原料的重量配比為:主單體65-95份;配位單體5-15份;致孔劑5-9份;分散劑0.5-1.5份;引發劑0.05-0.3份;
將配位單體和引發劑按重量份配比溶于無水乙醇中,使得配位單體和引發劑在無水乙醇中的質量百分比濃度為10-20%,然后將混合液與主單體,致孔劑混合均勻;在強力攪拌下,將此混合體系緩慢加到含有分散劑的三口燒瓶中,通入氮除氧30 min;用恒溫水浴加熱至72-78℃,調控攪拌速度,聚合反應6h,然后升溫至80-90℃再繼續反應3h;冷至20-30℃后,將聚合物微球過濾、洗滌得到分子印跡樹脂微球;將制備的分子印跡樹脂微球裝入萃取器中,用無水乙醇萃取處理6h,除去致孔劑、引發劑和未反應的少量殘留單體,室溫涼干后,用洗脫劑溶液攪拌浸泡處理,洗脫掉印跡模板分子和鋅離子,再用去離子水洗至pH值至6-8,然后用0.01mol/L的鋅離子溶液配位平衡后,并在50-70℃真空干燥,制得殼四糖分子印跡樹脂微球。
3.根據權利要求2所述的一種基于分子印跡技術的殼四糖單體分離提取方法,其特征在于,所述的配位單體為N-[2-(二甲氨基)乙基]-N'-[(2-羥基-4-乙烯基苯基)]草酰胺雙核鋅-殼四糖,主單體為乙二醇二甲基丙烯酸酯,致孔劑為石油醚90-120,引發劑為偶氮二異丁腈,分散劑為聚乙烯醇。
4.根據權利要求1或2所述的一種基于分子印跡技術的殼四糖單體分離提取方法,其特征在于,所述的洗脫劑為0.1 mol/L的鹽酸溶液。
5.根據權利要求1所述的一種基于分子印跡技術的殼四糖單體分離提取方法,其特征在于,所述的乙醇和去離子水的混合液中乙醇與去離子水的質量比為1:1。