本發(fā)明涉及一種肽的分離方法，特別是涉及一種從鱷魚中運(yùn)用生物酶解技術(shù)進(jìn)行小分子活性肽的提取方法。

背景技術(shù)：

鱷魚骨、肉、血、油、內(nèi)臟等全身各部富含蛋白質(zhì)、DHA、卵磷脂、不包含脂肪酸、鐵鋅磷鎂等10種微量元素、18種以上氨基酸及維生素A、維生素E等，是一種科研價(jià)值、經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高的動物。

目前市面上鱷魚的用途最多的多為鱷皮制品，對鱷魚骨、肉、血的應(yīng)用并不廣泛，因其資源的稀缺性，使得鱷魚資源的應(yīng)用更顯珍貴，而對鱷魚系列產(chǎn)品生物學(xué)及營養(yǎng)學(xué)的精細(xì)化深開發(fā)以及研究應(yīng)用在全球更是少之又少。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明是為了解決以上技術(shù)問題而提供了一種鱷魚肽的提取方法，本發(fā)明的方法將人工養(yǎng)殖鱷魚的骨、肉、血運(yùn)用雙蛋白酶定向酶切進(jìn)行小分子肽的轉(zhuǎn)化和提取，鱷魚肽其分子量均在1000道爾頓以下，既保留了鱷魚原有的有效成份又具有極高的消化吸收性和利用率。它可以不經(jīng)胃腸消化，直接被人體利用。

本發(fā)明涉及一種鱷魚肽的提取方法，所述提取方法包括以下步驟：

一、清洗破碎：將新鮮去皮的鱷魚骨肉用70～80℃的水浸泡30～60min后，用水沖洗10～20min，然后將洗凈的鱷魚骨肉用破骨機(jī)鋸成長度為8～10cm的鱷魚骨肉段；

二、高壓蒸煮：向蒸煮罐中加水，邊攪拌邊投入鱷魚骨肉段，升溫至120～150℃，保溫8～9h；然后停止攪拌，靜置0.5～1.5h，上清即為一次湯(靜置結(jié)束立即排湯)；

三、排湯：用真空抽提罐將一次湯抽提入滅菌后的一次湯儲罐；靜置結(jié)束立即排湯(此時(shí)湯溫在60℃左右)；

四、水解：將一次湯由湯儲罐泵入滅菌后的水解罐，升溫至98～100℃保持15min滅菌，降溫至50～60℃并保溫，加入堿液調(diào)整pH值至8.5，加入堿性蛋白酶，酶解1～2h，隨著蛋白質(zhì)的溶解，溶液pH值降低，當(dāng)溶液pH值降至7.5時(shí)，加入胰酶保溫3～5h，當(dāng)pH值降至6.6～7.0時(shí)，加入中性蛋白酶水解2h，然后加入HC1調(diào)節(jié)pH值為5.4～5.5，升溫滅酶活；

五、過濾：投入硅藻土、活性炭攪拌，靜置，粗過濾后，利用板框過濾器循環(huán)過濾1.5～2.5h，得到清液；

六、濃縮：利用真空濃縮器將清液濃縮至濃度18～22°Bé，得到濃縮液；

七、噴霧干燥：當(dāng)濃縮液澄清時(shí)，進(jìn)行噴霧干燥，即制得鱷魚肽；

當(dāng)濃縮液渾濁時(shí)，先將濃縮液進(jìn)行板框過濾或用管式離心機(jī)分離，然后再進(jìn)行噴霧干燥，即制得鱷魚肽。

優(yōu)選地，所述步驟一中浸泡時(shí)，新鮮去皮鱷魚骨肉與水的質(zhì)量比為1:1～3。

優(yōu)選地，所述步驟三中去除一次湯后剩余的骨肉擠壓出湯，擠壓出湯后的骨肉可用作飼料原料。

優(yōu)選地，所述步驟四中的堿液為NaOH溶液。

優(yōu)選地，所述步驟四中升溫滅酶活的參數(shù)為90℃，30min。

優(yōu)選地，所述步驟五中粗過濾為依次采用桶式過濾器、兩級板框過濾器過濾。

優(yōu)選地，所述步驟六中噴霧干燥的參數(shù)為：進(jìn)風(fēng)溫度200℃，出風(fēng)溫度95℃。

本發(fā)明鱷魚肽的提取方法與現(xiàn)有技術(shù)不同之處在于：

1.本發(fā)明的方法制得的鱷魚肽含有從鱷體內(nèi)提取的高效抗體和奇特構(gòu)造的血紅蛋白，可以極快地提高人體免疫力和血液攝氧能力，可極大地提高人體的健康質(zhì)量；本發(fā)明制得鱷魚肽含有強(qiáng)有力的抗癌物質(zhì)和防止癌腫瘤新生細(xì)胞的生長因子，含有強(qiáng)有力的抗菌物質(zhì)，含有可優(yōu)化核酸的物質(zhì)，這種物質(zhì)使核酸充滿活力，抗病能力加強(qiáng)，同時(shí)激活體內(nèi)的觸酶和SOD的活性，有效地清除體內(nèi)垃圾，從而延緩生命衰老，含有大量的活性鈣和磷、鎂等，可用于治療老年骨質(zhì)疏松、促進(jìn)兒童生長發(fā)育等特殊功效。

2.采用本發(fā)明的方法制得的鱷魚肽無需攪拌即可迅速溶于水，水溶液清亮透明，為淡黃色透明液體，不會析出任何雜質(zhì)和沉淀物。

具體實(shí)施方式

通過以下實(shí)施例對本發(fā)明的鱷魚肽的提取方法作進(jìn)一步的說明。

實(shí)施例1

本實(shí)施例的鱷魚肽的提取方法按以下步驟進(jìn)行：

一、清洗破碎：將新鮮去皮的鱷魚骨肉用70℃的水浸泡40min后，用水沖洗15min，然后將洗凈的鱷魚骨肉用破骨機(jī)鋸成長度為9cm的鱷魚骨肉段；

二、高壓蒸煮：向蒸煮罐中加水，邊攪拌邊投入鱷魚骨肉段，升溫至120℃，保溫9h；然后停止攪拌，靜置0.5h，上清即為一次湯(靜置結(jié)束立即排湯)；

三、排湯：用真空抽提罐將一次湯抽提入滅菌后的一次湯儲罐；靜置結(jié)束立即排湯(此時(shí)湯溫在62℃)；去除一次湯后剩余的骨肉擠壓出湯，擠壓出湯后的骨肉可用作飼料原料。

四、水解：將一次湯由湯儲罐泵入滅菌后的水解罐，升溫至100℃保持15min滅菌，降溫至55℃并保溫，加入NaOH溶液調(diào)整pH值至8.5，加入堿性蛋白酶，酶解1h，隨著蛋白質(zhì)的溶解，溶液pH值降低，當(dāng)溶液pH值降至7.5時(shí)，加入胰酶保溫4h，當(dāng)pH值降至6.8時(shí)，加入中性蛋白酶水解2h，然后加入HC1調(diào)節(jié)pH值為5.5，升溫滅酶活，升溫滅酶活的參數(shù)為90℃，30min；

五、過濾：投入硅藻土、活性炭攪拌，靜置，依次采用桶式過濾器、兩級板框過濾器過濾后，利用板框過濾器循環(huán)過濾1.5h，得到清液；

六、濃縮：利用真空濃縮器將清液濃縮至濃度18°Bé，得到濃縮液；

七、噴霧干燥：此時(shí)濃縮液澄清，進(jìn)行噴霧干燥，即制得鱷魚肽；

噴霧干燥的參數(shù)為：進(jìn)風(fēng)溫度200℃，出風(fēng)溫度95℃；

其中，步驟一中浸泡時(shí)，新鮮去皮鱷魚骨肉與水的質(zhì)量比為1:1。

實(shí)施例2

本實(shí)施例的鱷魚肽的提取方法按以下步驟進(jìn)行：

一、清洗破碎：將新鮮去皮的鱷魚骨肉用80℃的水浸泡50min后，用水沖洗15min，然后將洗凈的鱷魚骨肉用破骨機(jī)鋸成長度為8cm的鱷魚骨肉段；

二、高壓蒸煮：向蒸煮罐中加水，邊攪拌邊投入鱷魚骨肉段，升溫至150℃，保溫8h；然后停止攪拌，靜置1.5h，上清即為一次湯(靜置結(jié)束立即排湯)；

三、排湯：用真空抽提罐將一次湯抽提入滅菌后的一次湯儲罐；靜置結(jié)束立即排湯(此時(shí)湯溫在60℃)；

四、水解：將一次湯由湯儲罐泵入滅菌后的水解罐，升溫至98℃保持15min滅菌，降溫至55℃并保溫，加入KOH溶液調(diào)整pH值至8.5，加入堿性蛋白酶，酶解1h，隨著蛋白質(zhì)的溶解，溶液pH值降低，當(dāng)溶液pH值降至7.5時(shí)，加入胰酶保溫4h，當(dāng)pH值降至6.7時(shí)，加入中性蛋白酶水解2h，然后加入HC1調(diào)節(jié)pH值為5.4，升溫滅酶活，升溫滅酶活的參數(shù)為90℃，30min；

五、過濾：投入硅藻土、活性炭攪拌，靜置，依次采用桶式過濾器、兩級板框過濾器過濾后，利用板框過濾器循環(huán)過濾2.5h，得到清液；

六、濃縮：利用真空濃縮器將清液濃縮至濃度20°Bé，得到濃縮液；

七、噴霧干燥：此時(shí)濃縮液澄清，進(jìn)行噴霧干燥，即制得鱷魚肽；

噴霧干燥的參數(shù)為：進(jìn)風(fēng)溫度200℃，出風(fēng)溫度95℃；

其中，步驟一中浸泡時(shí)，新鮮去皮鱷魚骨肉與水的質(zhì)量比為1:3。

實(shí)施例3

本實(shí)施例的鱷魚肽的提取方法按以下步驟進(jìn)行：

一、清洗破碎：將新鮮去皮的鱷魚骨肉用75℃的水浸泡35min后，用水沖洗20min，然后將洗凈的鱷魚骨肉用破骨機(jī)鋸成長度為9cm的鱷魚骨肉段；

二、高壓蒸煮：向蒸煮罐中加水，邊攪拌邊投入鱷魚骨肉段，升溫至130℃，保溫9h；然后停止攪拌，靜置1h，上清即為一次湯(靜置結(jié)束立即排湯)；

三、排湯：用真空抽提罐將一次湯抽提入滅菌后的一次湯儲罐；靜置結(jié)束立即排湯(此時(shí)湯溫在59℃)；

四、水解：將一次湯由湯儲罐泵入滅菌后的水解罐，升溫至99℃保持15min滅菌，降溫至60℃并保溫，加入NaOH溶液調(diào)整pH值至8.5，加入堿性蛋白酶，酶解1.5h，隨著蛋白質(zhì)的溶解，溶液pH值降低，當(dāng)溶液pH值降至7.5時(shí)，加入胰酶保溫3h，當(dāng)pH值降至7.0時(shí)，加入中性蛋白酶水解2h，然后加入HC1調(diào)節(jié)pH值為5.4，升溫滅酶活，升溫滅酶活的參數(shù)為90℃，30min；

五、過濾：投入硅藻土、活性炭攪拌，靜置，依次采用桶式過濾器、兩級板框過濾器過濾后，利用板框過濾器循環(huán)過濾1.5h，得到清液；

六、濃縮：利用真空濃縮器將清液濃縮至濃度21°Bé，得到濃縮液；

七、噴霧干燥：此時(shí)濃縮液渾濁，先將濃縮液進(jìn)行板框過濾或用管式離心機(jī)分離，然后再進(jìn)行噴霧干燥，即制得鱷魚肽；

噴霧干燥的參數(shù)為：進(jìn)風(fēng)溫度200℃，出風(fēng)溫度95℃；

其中，步驟一中浸泡時(shí)，新鮮去皮鱷魚骨肉與水的質(zhì)量比為1:2。

實(shí)施例4

本實(shí)施例的鱷魚肽的提取方法按以下步驟進(jìn)行：

一、清洗破碎：將新鮮去皮的鱷魚骨肉用80℃的水浸泡30min后，用水沖洗20min，然后將洗凈的鱷魚骨肉用破骨機(jī)鋸成長度為8cm的鱷魚骨肉段；

二、高壓蒸煮：向蒸煮罐中加水，邊攪拌邊投入鱷魚骨肉段，升溫至140℃，保溫8h；然后停止攪拌，靜置1.5h，上清即為一次湯(靜置結(jié)束立即排湯)；

三、排湯：用真空抽提罐將一次湯抽提入滅菌后的一次湯儲罐；靜置結(jié)束立即排湯(此時(shí)湯溫在60℃)；去除一次湯后剩余的骨肉擠壓出湯，擠壓出湯后的骨肉可用作飼料原料。

四、水解：將一次湯由湯儲罐泵入滅菌后的水解罐，升溫至100℃保持15min滅菌，降溫至60℃并保溫，加入NaOH溶液調(diào)整pH值至8.5，加入堿性蛋白酶，酶解2h，隨著蛋白質(zhì)的溶解，溶液pH值降低，當(dāng)溶液pH值降至7.5時(shí)，加入胰酶保溫5h，當(dāng)pH值降至6.6時(shí)，加入中性蛋白酶水解2h，然后加入HC1調(diào)節(jié)pH值為5.4，升溫滅酶活，升溫滅酶活的參數(shù)為90℃，30min；

五、過濾：投入硅藻土、活性炭攪拌，靜置，依次采用桶式過濾器、兩級板框過濾器過濾后，利用板框過濾器循環(huán)過濾2h，得到清液；

六、濃縮：利用真空濃縮器將清液濃縮至濃度22°Bé，得到濃縮液；

七、噴霧干燥：此時(shí)濃縮液澄清，進(jìn)行噴霧干燥，即制得鱷魚肽；

噴霧干燥的參數(shù)為：進(jìn)風(fēng)溫度200℃，出風(fēng)溫度95℃；

其中，步驟一中浸泡時(shí)，新鮮去皮鱷魚骨肉與水的質(zhì)量比為1:1。

實(shí)施例5

本實(shí)施例的鱷魚肽的提取方法按以下步驟進(jìn)行：

一、清洗破碎：將新鮮去皮的鱷魚骨肉用70℃的水浸泡60min后，用水沖洗10min，然后將洗凈的鱷魚骨肉用破骨機(jī)鋸成長度為10cm的鱷魚骨肉段；

二、高壓蒸煮：向蒸煮罐中加水，邊攪拌邊投入鱷魚骨肉段，升溫至125℃，保溫9h；然后停止攪拌，靜置0.5h，上清即為一次湯(靜置結(jié)束立即排湯)；

三、排湯：用真空抽提罐將一次湯抽提入滅菌后的一次湯儲罐；靜置結(jié)束立即排湯(此時(shí)湯溫在61℃)；去除一次湯后剩余的骨肉擠壓出湯，擠壓出湯后的骨肉可用作飼料原料。

四、水解：將一次湯由湯儲罐泵入滅菌后的水解罐，升溫至98℃保持15min滅菌，降溫至50℃并保溫，加入NaOH溶液調(diào)整pH值至8.5，加入堿性蛋白酶，酶解1h，隨著蛋白質(zhì)的溶解，溶液pH值降低，當(dāng)溶液pH值降至7.5時(shí)，加入胰酶保溫5h，當(dāng)pH值降至6.9時(shí)，加入中性蛋白酶水解2h，然后加入HC1調(diào)節(jié)pH值為5.5，升溫滅酶活，升溫滅酶活的參數(shù)為90℃，30min；

五、過濾：投入硅藻土、活性炭攪拌，靜置，依次采用桶式過濾器、兩級板框過濾器過濾后，利用板框過濾器循環(huán)過濾2.5h，得到清液；

六、濃縮：利用真空濃縮器將清液濃縮至濃度18°Bé，得到濃縮液；

七、噴霧干燥：此時(shí)濃縮液渾濁，先將濃縮液進(jìn)行板框過濾或用管式離心機(jī)分離，然后再進(jìn)行噴霧干燥，即制得鱷魚肽；

噴霧干燥的參數(shù)為：進(jìn)風(fēng)溫度200℃，出風(fēng)溫度95℃；

其中，步驟一中浸泡時(shí)，新鮮去皮鱷魚骨肉與水的質(zhì)量比為1:2。

實(shí)施例1-5中將鱷魚骨肉進(jìn)行生物酶解提取而成小分子肽類物質(zhì)，鱷魚肽中的精華成分活性超強(qiáng)，極易被人體吸收，可全面調(diào)節(jié)人體免疫力。

本發(fā)明方法制得的產(chǎn)品不含任何化學(xué)成分與激素，對人體沒有任何毒副作用，是十分純凈的營養(yǎng)物質(zhì)。采用本發(fā)明的方法制得的鱷魚肽無需攪拌即可迅速溶于水，水溶液清亮透明，為淡黃色透明液體，不會析出任何雜質(zhì)和沉淀物。對人體的生長、發(fā)育、代謝、繁衍等生理活動有至關(guān)重要的作用。

雖然以上描述了本發(fā)明的具體實(shí)施方式，但是本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，這些僅是舉例說明，本發(fā)明的保護(hù)范圍是由所附權(quán)利要求書限定的。本領(lǐng)域的技術(shù)人員在不背離本發(fā)明的原理和實(shí)質(zhì)的前提下，可以對這些實(shí)施方式作出多種變更或修改，但這些變更和修改均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。