本發明屬于生物醫藥領域，涉及一種遺傳性耳聾基因檢測產品。
背景技術：
：耳聾聽覺功能障礙是人類最常見的感覺功能障礙之一，居各類殘疾人群之首，嚴重影響著患者的交流，對患者的日常生活產生重大影響。近年來，我國耳聾發病率明顯增加，全國每年新出生耳聾患兒3萬左右，新生兒耳聾的發生率為3‰。耳聾的病因復雜多樣，涉及遺傳、感染、外傷、藥物應用不當、免疫性疾病、生理機能退化、噪聲、化學物質中毒及心理因素等諸多因素，其中60％的耳聾是由遺傳因素所導致的，分為綜合癥型耳聾和非綜合征型耳聾兩大類，后者占全部遺傳性耳聾的70％左右。非綜合征型耳聾共同有4種遺傳方式，常染色體顯性遺傳占15％，隱性遺傳占80％，x-連鎖遺傳占1％到3％，線粒體遺傳占1％以下。綜合征型耳聾占遺傳因素所致耳聾的30％，但目前發現400多種。近年來大量的研究證實，絕大多數遺傳性耳聾是由于單個基因的遺傳物質異常導致的，而且單個基因的雙等位基因突變在其中占據主導地位。在我國大多數非綜合征型遺傳性耳聾患者僅由為數不多的幾個基因突變所導致，其中gjb2、gjb3、slc26a4、mtdna12srrna基因為最常見的耳聾致病基因，通過對以上幾個基因進行檢測，對遺傳性耳聾進行篩查，對于人類的文明與進步具有重要的意義。近年來，國內相繼報道了先天性耳聾基因或者易感性耳聾基因的基因診斷試劑盒及其檢測方法，目前監測耳聾基因dna的方法主要基于芯片技術、測序技術和熒光檢測技術，存在操作復雜，耗時長、成本高、不能同時對不同基因的多個突變位點進行檢測。鑒于遺傳性耳聾突變異質性強、涉及的基因多，位點多，以及人群攜帶致病基因比例高等特點，因此有必要建立一種高通量、高效率、低成本的基因突變檢測方法和產品，以實現臨床快速檢測以及全國人群的普遍篩查。技術實現要素：本發明的目的是提供一種遺傳性耳聾基因檢測產品，該產品能夠高通量、高效率、低成本的實現耳聾基因突變位點的檢測。為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：本發明提供了一種遺傳性耳聾基因檢測產品，所述產品包括檢測人耳聾基因20個snp位點的試劑，所述snp位點分別為：1226g>a、1174a>t、1229c>t、1975g>c、2027t>a、235delc、299_300delat、176_191del16、167delt、109g>a、35delg、1555a>g、538c>t、547g>a、2162c>t、2168a>g、919-2a>g、508_511insaacg、1707+5g>a、589g>a。進一步，所述snp位點還包括281c>t、1494c>t。進一步，所述產品包括芯片、核酸膜條、試劑盒；其中，所述芯片包括固相載體以及固定在固相載體上的針對上述snp的寡核苷酸探針；所述核酸膜條包括基底和固定于所述基底上的寡核苷酸探針；所述試劑盒包括針對上述snp的芯片或核酸膜條或pcr擴增引物序列。所述固相載體包括無機載體和有機載體，所述無機載體包括但不限于有硅載體、玻璃載體、陶瓷載體等；所述有機載體包括聚丙烯薄膜、尼龍膜等；所述基底可以是任何適于固定寡核苷酸探針的基底，例如尼龍膜、硝酸纖維素膜、聚丙烯膜、玻璃片、硅膠晶片、微縮磁珠等。進一步，所述產品為試劑盒。進一步，所述試劑盒包括pcr擴增引物，pcr擴增引物為根據所選擇的待檢測的耳聾易感基因設計的特異性針對每種耳聾易感基因的擴增引物，所述擴增引物可擴增包括突變位點在內的一段dna序列，由5’端的tag序列和針對目標區域的特異性引物序列組成，5’端tag序列優選5-15個堿基。優選的，tag序列選用序列acgttggatg。在本發明的具體實施方式中，pcr擴增引物序列如seqidno.1～22所示，其中，針對1226g>a、1174a>t、1229c>t的擴增引物序列對如seqidno.1～2所示；針對1975g>c、2027t>a的擴增引物序列對如seqidno.3～4所示；針對235delc、299_300delat、176_191del16、167delt的擴增引物序列對如seqidno.5～6所示；針對109g>a、35delg的擴增引物序列對如seqidno.7～8所示；針對1555a>g的擴增引物序列對如seqidno.9～10所示；針對538c>t、547g>a的擴增引物序列對如seqidno.11～12所示；針對2162c>t、2168a>g的擴增引物序列對如seqidno.13～14所示；針對919-2a>g的擴增引物序列對如seqidno.15～16所示；針對508_511insaacg的擴增引物序列對如seqidno.17～18所示；針對1707+5g>a的擴增引物序列對如seqidno.19～20所示；針對589g>a的擴增引物序列對如seqidno.21～22所示。進一步，所述試劑盒還包括擴增281c>t、1494c>t的擴增引物，引物序列如seqidno.23～26所示，其中，針對281c>t的擴增引物序列對如seqidno.23～24所示；針對1494c>t擴增引物序列對如seqidno.25～26所示。進一步，所述試劑盒還包括單堿基延伸引物，引物序列如seqidno.27～46所示，其中，針對1226g>a的單堿基延伸引物序列如seqidno.27所示；針對1174a>t的單堿基延伸引物序列如seqidno.28所示；針對1229c>t的單堿基延伸引物序列如seqidno.29所示；針對1975g>c的單堿基延伸引物序列如seqidno.30所示；針對2027t>a的單堿基延伸引物序列如seqidno.31所示；針對235delc的單堿基延伸引物序列如seqidno.32所示；針對299_300delat的單堿基延伸引物序列如seqidno.33所示；針對176_191del16的單堿基延伸引物序列如seqidno.34所示；針對167delt的單堿基延伸引物序列如seqidno.35所示；針對109g>a的單堿基延伸引物序列如seqidno.36所示；針對35delg的單堿基延伸引物序列如seqidno.37所示；針對1555a>g的單堿基延伸引物序列如seqidno.38所示；針對538c>t的單堿基延伸引物序列如seqidno.39所示；針對547g>a的單堿基延伸引物序列如seqidno.40所示；針對2162c>t的單堿基延伸引物序列如seqidno.41所示；針對2168a>g的單堿基延伸引物序列如seqidno.42所示；針對919-2a>g的單堿基延伸引物序列如seqidno.43所示；針對508_511insaacg的單堿基延伸引物序列如seqidno.44所示；針對1707+5g>a的單堿基延伸引物序列如seqidno.45所示；針對589g>a的單堿基延伸引物序列如seqidno.46所示。進一步，所述試劑盒還包括針對281c>t、1494c>t的單堿基延伸引物，引物序列如seqidno.47～48所示，其中，針對281c>t的單堿基延伸引物序列如seqidno.47所示；針對1494c>t的單堿基延伸引物序列如seqidno.48所示。進一步，所述試劑盒還包括pcr緩沖液、25mmdntps、25mmmgcl2、5u/μlpcr酶。進一步，所述試劑盒還包括試劑盒還包括iplex緩沖液、iplex終止混合物、iplex酶。進一步，所述試劑盒還可包括：陰性質控品，陽性質控品，純化樹脂，質譜檢測芯片，人基因組dna提取試劑等試劑以及使用說明書或標簽。本發明提供了一種遺傳性耳聾基因的檢測方法，檢測權利上面所述的snp位點，該方法包括以下步驟：(1)提取樣本中的基因組dna；(2)多重pcr：設計pcr擴增引物，以步驟(1)中所得基因組dna為模板，通過一個多重擴增體系對所有的位點同時擴增，得到包含snp位點的pcr產物；(3)pcr產物處理：使用堿性磷酸酶對步驟(2)的pcr產物處理；(4)單堿基延伸：設計延伸引物，在一個反應體系中對步驟(3)得到的pcr產物進行多重單堿基延伸；(5)延伸產物純化：將步驟(4)得到的延伸產物進行樹脂脫鹽處理；(6)質譜儀檢測：將步驟(5)得到的純化后的延伸產物轉移到含有基質的檢測芯片上，放入質譜儀檢測，檢測數據并分析各突變位點的基因型。進一步，所述檢測方法步驟(2)中pcr擴增的反應條件為：95℃2min；95℃30s，60℃30s，72℃1min，72℃5min，45個循環；4℃保存。進一步，所述檢測方法步驟(4)中單堿基延伸的反應條件為：94℃30s；[94℃5s，(52℃5s，80℃5s)×5]×40個循環，72℃3min；4℃保存。本方法中的多重pcr即是在同一pcr反應體系中加入2對或2對以上引物，同時擴增出多個核酸片段的pcr反應，其反應原理、反應試劑和操作過程與一般pcr相同。自1988年將多重pcr技術首先用以診斷杜氏肌營養不良征(dmd)以來，在許多相關領域尤其是核酸診斷方面，得到了廣泛深入的研究及應用。在此基礎上，進一步發展了諸如巢式多重pcr、熒光定量多重pcr、差異顯示多重pcr等系列相關技術。由于多重pcr實驗設計較單一pcr要復雜得多，技術難度大，因而在建立多重pcr反應體系時，必須對其中的主要成分和反應條件進行繁瑣的優化。影響多重pcr擴增效果的因素主要可分反應體系和反應條件二大類，其中反應體系包括引物、緩沖液、模板和taqdna聚合酶、dntp和mg2+等，反應條件包括退火溫度、循環數、輔助劑等。多重pcr反應的優化要比常規pcr復雜，通常情況是先進行單一的pcr反應，分別設定各引物對的最佳反應條件，然后選擇公共的反應條件進行2重、3重……設定，在此過程中不斷調整反應條件，直至所有的引物都能同時在這一條件下正確擴增。本方法根據延伸產物在真空小管中飛行時間的長短來分析染色體特異性的snp位點的基因型。本方法選用的snp位點是存在于人體細胞中的遺傳物質，應用基質輔助激光解吸附/電離飛行時間質譜技術對snp位點進行檢測，檢測延伸產物在真空小管中的飛行時間，為特異性snp位點基因型的分析提供依據。本發明中所選擇的20個或22個snp位點突變，是選用大量文獻的研究以及實驗室大規模的研究發現的在中國患者體細胞中常出現的耳聾基因，并且相比文獻報道的其他snp位點的組合具有較高的檢出率。在本發明中，遺傳性耳聾基因檢測產品的樣本包括(但不限于)胎兒羊水、人外周血樣本、臍血、口腔拭子等。本發明的優點和有益效果：本發明提供了一種檢測遺傳性耳聾基因的試劑盒，包括高效特異性的擴增引物和單堿基延伸引物，這些擴增引物和延伸引物經過精心設計，檢測準確性和靈敏度高；在位置比較接近的snp位點，設計一對引物，提高了擴增效率，降低了成本；在高gc含量的區域通過改變gc堿基從而降低gc含量，避免引物的非特異性結合。本發明的試劑盒可以一次性檢測遺傳性耳聾基因上的多個snp位點，多個snp位點的檢測在同一管中完成，檢測時間短，操作簡單，成本低，便于耳聾基因篩查的推廣。具體實施方式下面結合實施例對本發明作進一步詳細的說明。以下實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍。實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，例如sambrook等人，分子克隆：實驗室手冊(newyork:coldspringharborlaboratorypress,1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。實施例1檢測方法的驗證1、多態位點的確定本發明選擇的多態性位點均具有很高的多態性信息含量，包含中國人群中耳聾基因熱點突變位點，整體上使單倍型多樣性大大提升。通過大規模的測序篩查，以及現有技術中報道的耳聾致病基因在中國人群中的多態性調查和文獻研究，入選本發明的20個位點見表1，22個位點如表2。表1本發明涉及的所有20個多態性位點序號位點信息1slc26a4c.1226g>a2slc26a4c.1174a>t3slc26a4c.1229c>t4slc26a4c.1975g>c5slc26a4c.2027t>a6gjb2c.235delc7gjb2c.299_300delat8gjb2c.176_191del169gjb2c.167delt10gjb2c.109g>a11gjb2c.35delg12mtdnam.1555a>g13gjb3c.538c>t14gjb3c.547g>a15slc26a4c.2162c>t16slc26a4c.2168a>g17slc26a4c.919-2a>g18gjb2c.508_511insaacg19slc26a4c.1707+5g>a20slc26a4c.589g>a表2本發明涉及的所有22個多態性位點2、樣本的采集在被檢測者知情同意的情況下，使用血斑采集卡收集樣本3例，晾干備用。3、樣本的檢測(1)針對選定的耳聾基因的snp位點，通過引物的設計原則與實際情況結合，設計對應區域特異性的擴增引物和位點特異性的單堿基延伸引物，并在擴增引物5’端增加通用tag序列。本發明設計了大量檢測遺傳性耳聾基因突變的相關位點的引物，然后通過大量的實驗篩選出特異性強、靈敏度高的引物，最終篩選出相關dna突變效果最佳的引物，如表3和表4所示；相關引物在上海生工進行合成。表3pcr擴增引物表4延伸引物表序號位點信息延伸引物seqidno.27slc26a4c.1226g>acaccactgctctttcccseqidno.28slc26a4c.1174a>tttgcctttgggatcagcseqidno.29slc26a4c.1229c>tctcctggacggccseqidno.30slc26a4c.1975g>cgtgccaatccatagccttseqidno.31slc26a4c.2027t>aagaaccttaccacccgcseqidno.32gjb2c.235delccgaagatcagctgcaggseqidno.33gjb2c.299_300delattgatgaacttcctcttcttctcseqidno.34gjb2c.176_191del16gggaagtagtgatcgtagcseqidno.35gjb2c.167deltcgactttgtctgcaacacccseqidno.36gjb2c.109g>aacaactcctttgcagccacaaseqidno.37gjb2c.35delgtgcagacgatcctgagggseqidno.38mtdnam.1555a>gaacccctacgcatttatatagaggagseqidno.39gjb3c.538c>tcgtggactgctacattgccseqidno.40gjb3c.547g>aggtaggtgaagattttcttctseqidno.41slc26a4c.2162c>taaggacacattctttttgaseqidno.42slc26a4c.2168a>gctgtagatagagtatagcatcaseqidno.43slc26a4c.919-2a>gggcagtagcaattatcgtcseqidno.44gjb2.508_511insaacgagtgttgggacaaggccaggcgttseqidno.45slc26a4c.1707+5g>aaatgtatcaagtccacagtaaseqidno.46slc26a4c.589g>agtaagttcattacctgtataattcseqidno.47slc26a4c.281c>tgaagtcatttcgggagttagtaseqidno.48mtdnam.1494c>tctactttgaagtatacttgaggag(2)實驗步驟a.樣品dna的提取1)向樣品中分別加入200μl緩沖液ga和20μl蛋白酶k，渦旋震蕩10s混勻后，放入預熱至56℃的恒溫震蕩器中，900rpm恒溫震蕩1h。2)短暫離心后，加入200μl緩沖液gb，震蕩10s充分混勻。將離心管放入預熱至70℃的恒溫震蕩器中，900rpm恒溫震蕩10min。3)短暫離心后，加入100μl無水乙醇，充分顛倒混勻。4)將盡可能多的裂解液轉移到對應放置的離心柱中(已標記樣本編號)。轉移后的原離心管蓋好蓋子暫放回原位，不可立即丟棄。全部樣本轉移完畢，核對對應位置的離心柱和原離心管編號是否一致，確保分柱準確無誤。5)短暫離心后，將離心管中的所得溶液和絮狀沉淀全部加入吸附柱中，12,000rpm離心30s。棄廢液，將吸附柱放回收集管中。6)向吸附柱中加入500μl緩沖液gd，12,000rpm離心30s，棄廢液，將吸附柱放回收集管中。7)加入700μl漂洗液pw，12,000rpm離心30s，棄廢液，將吸附柱放回收集管中。8)加入500μl漂洗液pw，12,000rpm離心30s，棄廢液，最后12,000rpm離心2min。9)將吸附柱置于新的1.5ml離心管(標記樣品編號)中，室溫放置5min，向膜中央加入50μltb緩沖液。室溫放置5min，之后12,000rpm離心2min，收集dna溶液，-20℃保存dna備用。b.多重pcr反應1)pcr反應體系配制pcr反應體系按照表5進行配制，然后每孔加入3μl，將pcr反應mix分加到384孔板的樣本孔中。表5多重pcr擴增反應體系2)將配制好的pcr反應體系上pcr儀進行擴增，反應條件如表6所示。表6多重pcr擴增反應條件c.pcr產物處理通過sap酶處理pcr產物，sap酶處理體系按照表7進行配制，然后按照每孔2μl，將反應體系加到pcr產物中(注意：pcr產物使用前請輕微震蕩離心)，然后瞬時離心并按照表7中的反應程序進行反應。表7sap反應體系及反應條件d.延伸反應延伸反應體系按照表8進行配制，然后按照每孔2μl，將延伸反應體系加到經sap處理的產物中(注意：處理產物使用前請輕微震蕩離心)，然后瞬時離心并按照表9中的反應程序進行反應。表8延伸反應體系表9延伸反應條件e.延伸產物純化1)每反應孔添加潔凈樹脂(resin)6mg和16μlddh2o。2)用膜把板封好，放在旋轉器上顛倒搖勻15min，以3200g(標準板離心機的2000rpm)將板離心5min。f.上機檢測1)使用基納公司massarraytmrs1000點樣儀轉移至檢測芯片。2)使用基納公司massarraytm分析儀進行檢測。4、結果根據質譜結果進行分析，各樣本的檢測結果如表10所示。表10三個樣本的檢測結果5.使用基因檢測金標準一代測序法對樣本1進行檢測，實驗結果和使用上述方法檢測的結果一致。實施例2對選定的snp位點進行大樣本驗證1、樣本的采集按照實施例1中的方式采集遺傳性耳聾患者的樣本50例，樣本的采集及應用均獲得患者的知情同意。2、樣本的檢測采用實施例1中的步驟3采用的方法，對表1中所列的20個位點以及文獻中報道的20個snp位點235delc、176_191del、299_300delat、35delg、167delt、547g>a、538c>t、1229c>t、1174a>t、1226g>a、ivs15+5g>a、2027t>a、1975g>c、589g>a、2162c>t、281c>t、ivs7-2a>g、2168a>g、1555a>g和1494c>t進行位點檢測。3、結果對20個不同snp位點的檢測結果顯示，檢測出表1中所列的snp位點的的耳聾患者為39人，綜合檢出率為78％；檢出對比文獻中報道的20個snp位點的耳聾患者為35人，檢出率為70％。實施例3一種遺傳性耳聾基因檢測試劑盒根據snp位點與遺傳性耳聾的相關性，本發明提供了一種基于檢測snp位點的基因型來診斷耳聾的試劑盒，試劑盒組分包括多重pcr反應體系、sap酶處理體系、單堿基延伸反應體系、dna提取試劑、陰性質控品，陽性質控品，純化樹脂，質譜檢測芯片、使用說明書或標簽。多重pcr體系包括pcr擴增引物、pcr緩沖液、25mmdntps、25mmmgcl2、5u/μlpcr酶，pcr擴增引物序列如seqidno.1～22所示；sap酶處理體系包括sap緩沖液、sap酶；單堿基延伸反應體系包括單堿基延伸引物、iplex緩沖液、iplex終止混合物、iplex酶，單堿基延伸引物序列如seqidno.27～46所示；dna提取試劑包括提取緩沖液、蛋白酶、漂洗液。實施例4一種遺傳性耳聾基因檢測試劑盒根據snp位點與遺傳性耳聾的相關性，本發明提供了一種基于檢測snp位點的基因型來診斷耳聾的試劑盒，試劑盒組分包括多重pcr反應體系、sap酶處理體系、單堿基延伸反應體系。多重pcr體系包括pcr擴增引物、pcr緩沖液、25mmdntps、25mmmgcl2、5u/μlpcr酶，pcr擴增引物序列如seqidno.1～26所示；sap酶處理體系包括sap緩沖液、sap酶；單堿基延伸反應體系包括單堿基延伸引物、iplex緩沖液、iplex終止混合物、iplex酶，單堿基延伸引物序列如seqidno.27～48所示。上述實施例的說明只是用于理解本發明的方法及其核心思想。應當指出，對于本領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明原理的前提下，還可以對本發明進行若干改進和修飾，這些改進和修飾也將落入本發明權利要求的保護范圍內。sequencelisting<110>北京博奧醫學檢驗所有限公司<120>一種遺傳性耳聾基因檢測產品<160>48<170>patentinversion3.5<210>1<211>30<212>dna<213>人工序列<400>1acgttggatgctgttgttcctacctgtgtc30<210>2<211>30<212>dna<213>人工序列<400>2acgttggatggtaggatcgttgtcatccag30<210>3<211>30<212>dna<213>人工序列<400>3acgttggatgcagaaaaccagaaccttacc30<210>4<211>30<212>dna<213>人工序列<400>4acgttggatgacgttcccaaagtgccaatc30<210>5<211>30<212>dna<213>人工序列<400>5acgttggatgtgatctcctcgatgtcctta30<210>6<211>30<212>dna<213>人工序列<400>6acgttggatgaggccgactttgtctgcaac30<210>7<211>30<212>dna<213>人工序列<400>7acgttggatgtcttttccagagcaaaccgc30<210>8<211>30<212>dna<213>人工序列<400>8acgttggatgacaaagtcggcctgctcatc30<210>9<211>30<212>dna<213>人工序列<400>9acgttggatgcactttccagtacacttacc30<210>10<211>30<212>dna<213>人工序列<400>10acgttggatgaccctcctcaagtatacttc30<210>11<211>30<212>dna<213>人工序列<400>11acgttggatgatggtgagtacgatgcagac30<210>12<211>30<212>dna<213>人工序列<400>12acgttggatgctggtgcagtgtgccaacgt30<210>13<211>30<212>dna<213>人工序列<400>13acgttggatgccctcttgagatttcacttg30<210>14<211>30<212>dna<213>人工序列<400>14acgttggatgaatgcgggttctttgacgac30<210>15<211>29<212>dna<213>人工序列<400>15acgttggatgatttggttgacaaacaagg29<210>16<211>30<212>dna<213>人工序列<400>16acgttggatgggctccatatgaaatggcag30<210>17<211>30<212>dna<213>人工序列<400>17acgttggatgatgtcatgtacgacggcttc30<210>18<211>30<212>dna<213>人工序列<400>18acgttggatgaagcagtccacagtgttggg30<210>19<211>30<212>dna<213>人工序列<400>19acgttggatggaagtctcaaaagaggttag30<210>20<211>30<212>dna<213>人工序列<400>20acgttggatgttctatggcaatgtcgatgg30<210>21<211>30<212>dna<213>人工序列<400>21acgttggatgacagctagagtcctgattgc30<210>22<211>29<212>dna<213>人工序列<400>22acgttggatgcttgtaagttcattacctg29<210>23<211>30<212>dna<213>人工序列<400>23acgttggatgcaacatcttaccttgcagcg30<210>24<211>30<212>dna<213>人工序列<400>24acgttggatgataccgagtcaaggaatggc30<210>25<211>30<212>dna<213>人工序列<400>25acgttggatgagttgaacagggccctgaag30<210>26<211>31<212>dna<213>人工序列<400>26acgttggatgcctctatataaatgcgtaggg31<210>27<211>17<212>dna<213>人工序列<400>27caccactgctctttccc17<210>28<211>17<212>dna<213>人工序列<400>28ttgcctttgggatcagc17<210>29<211>13<212>dna<213>人工序列<400>29ctcctggacggcc13<210>30<211>18<212>dna<213>人工序列<400>30gtgccaatccatagcctt18<210>31<211>17<212>dna<213>人工序列<400>31agaaccttaccacccgc17<210>32<211>17<212>dna<213>人工序列<400>32cgaagatcagctgcagg17<210>33<211>22<212>dna<213>人工序列<400>33tgatgaacttcctcttcttctc22<210>34<211>19<212>dna<213>人工序列<400>34gggaagtagtgatcgtagc19<210>35<211>20<212>dna<213>人工序列<400>35cgactttgtctgcaacaccc20<210>36<211>21<212>dna<213>人工序列<400>36acaactcctttgcagccacaa21<210>37<211>18<212>dna<213>人工序列<400>37tgcagacgatcctgaggg18<210>38<211>26<212>dna<213>人工序列<400>38aacccctacgcatttatatagaggag26<210>39<211>19<212>dna<213>人工序列<400>39cgtggactgctacattgcc19<210>40<211>21<212>dna<213>人工序列<400>40ggtaggtgaagattttcttct21<210>41<211>19<212>dna<213>人工序列<400>41aaggacacattctttttga19<210>42<211>22<212>dna<213>人工序列<400>42ctgtagatagagtatagcatca22<210>43<211>19<212>dna<213>人工序列<400>43ggcagtagcaattatcgtc19<210>44<211>24<212>dna<213>人工序列<400>44agtgttgggacaaggccaggcgtt24<210>45<211>21<212>dna<213>人工序列<400>45aatgtatcaagtccacagtaa21<210>46<211>24<212>dna<213>人工序列<400>46gtaagttcattacctgtataattc24<210>47<211>22<212>dna<213>人工序列<400>47gaagtcatttcgggagttagta22<210>48<211>24<212>dna<213>人工序列<400>48ctactttgaagtatacttgaggag24當前第1頁12