本發明涉及酶制品技術領域，具體涉及一種鮮豬血中超氧化物歧化酶的提取方法。
背景技術：
超氧化物歧化酶(sod)是一種在體內以超氧化陰離子自由基為底物的金屬酶，能清除超氧陰離子自由基等中間物的毒性，有效地預防活性氧對生物體的毒害作用，sod應用于臨床治療，具有抗老化，抗輻射，抗炎癥等效果，甚至對自身免疫病都有一定的療效，也被用于高級化妝品、食品、飲料等領域。
超氧化物歧化酶廣泛存在于自然界各種生物體內，而且目前動物血液是生產超氧化物歧化酶的主要原料，而豬血來源豐富且價格低廉，用于提取超氧化物歧化酶具有很好的市場前景。目前，從豬血中提取氧化物歧化酶大多用傳統工藝：乙醇氯仿提取，熱變性、硫酸銨鹽析和丙酮沉淀等方法獲得sod，工藝流程復雜，生產成本高，酶活性損失大，并且使用了大量有毒有機溶劑，對環境有一定的影響。因此有必要對鮮豬血中超氧化物歧化酶提取工藝進行改造，為企業規模化生產降低成本，提高市場競爭力。
技術實現要素：
本發明提供一種種鮮豬血中超氧化物歧化酶的提取方法，采用先進分離純化技術，達到工藝簡單，提取效率高，酶活損失小，對環境無污染的目的。
為解決上述問題，本發明采用的技術方案如下：以鮮豬血為材料，經離心分離，收集豬血球，加入2-3倍飽和nacl溶液，高速攪拌30min，然后浸泡10-16h，離心分離，棄沉淀，取上清液，加入上清液體積比0.3％的2％鞣酸，用hcl溶液調劑ph6-7，在50-60rpm下，絮凝沉淀1-2h，離心分離，去沉淀，取上清液；在清液中加入一定量醋酸鈉，用醋酸調節ph至3.0-6.0，在2℃下靜置30min，5000rpm離心10min，去除沉淀，取上清液，然后超濾濃縮，冷凍干燥，即得sod成品。
具體步驟：
步驟一：鮮豬血中加入一定抗凝血劑，充分攪拌后以3000rpm離心20-30min，收集血球；
步驟二：將豬血球與飽和nacl溶液按體積比1：1～3比例混合，高速攪拌30min，室溫靜置10-16h，然后5000rpm離心分離，收集上清液；
步驟三：將上述上清液與2％鞣酸按1000：3比例混合，在50-60rpm下，絮凝沉淀1-2h，離心分離，去沉淀，收集上清液；
步驟四：上述上清液中加入飽和醋酸鈉溶液至終濃度為30％，用醋酸調節ph至3.0-6.0，在2℃下靜置30min，8000rpm離心10min，去除沉淀，取上清液；
步驟五：超濾器將上述上清液濃縮，然后冷凍干燥，即得sod產品。
綜上所述，由于采用了上述技術方案，本發明的有益效果是：
本發明采用飽和nacl溶液提取，鞣酸絮凝沉淀與醋酸鈉沉淀結合，再結合超濾濃縮純化，不需要任何有機溶劑，安全環保，并且工藝路線簡單，成本低，所得sod產品提取率高，酶活性損失小。可用于企業大規模化生產，提高市場競爭力。
本發明采用飽和nacl溶液提取，并且采用高速攪拌，使得豬血球破膜，釋放出血紅蛋白，經離心分離除去血紅蛋白，此技術避免了使用有機溶劑，并且除去了血紅蛋白，且酶活性不損失；采用鞣酸絮凝沉淀與醋酸鈉沉淀相結合的方法，使得sod酶活性損失小，且方法簡單操作；最后在結合超濾濃縮，保證了產品的高純度，使得純度能達到96％。
具體實施方式
為了更好的對本發明的技術方案進行理解，下面通過具體的實施例進行闡述和說明。
實施例1
步驟一：鮮豬血中加入一定抗凝血劑，充分攪拌后以3000rpm離心20-30min，收集血球；
步驟二：將豬血球與飽和nacl溶液按體積比1：1比例混合，高速攪拌30min，室溫靜置10-16h，然后5000rpm離心分離，收集上清液；
步驟三：將上述上清液與2％鞣酸按1000：3比例混合，在50-60rpm下絮凝沉淀1-2h，離心分離，去沉淀，收集上清液；
步驟四：上述上清液中加入飽和醋酸鈉溶液至終濃度為30％，用醋酸調節ph至3.0，在2℃下靜置30min，8000rpm離心10min，去除沉淀，取上清液；
步驟五：用超濾器將上述上清液濃縮至原來的1/3，然后冷凍干燥，即得sod產品。
實施例2
步驟一：鮮豬血中加入一定抗凝血劑，充分攪拌后以3000rpm離心20-30min，收集血球；
步驟二：將豬血球與飽和nacl溶液按體積比1：3比例混合，高速攪拌30min，室溫靜置10-16h，然后5000rpm離心分離，收集上清液；
步驟三：將上述上清液與2％鞣酸按1000：3比例混合，在50-60rpm下絮凝沉淀1-2h，離心分離，去沉淀，收集上清液；
步驟四：上述上清液中加入飽和醋酸鈉溶液至終濃度為30％，用醋酸調節ph至6.0，在2℃下靜置30min，8000rpm離心10min，去除沉淀，取上清液；
步驟五：用超濾器將上述上清液濃縮至原來的1/3，然后冷凍干燥，即得sod產品。
實施例3
步驟一：鮮豬血中加入一定抗凝血劑，充分攪拌后以3000rpm離心20-30min，收集血球；
步驟二：將豬血球與飽和nacl溶液按體積比1：2比例混合，高速攪拌30min，室溫靜置10-16h，然后5000rpm離心分離，收集上清液；
步驟三：將上述上清液與2％鞣酸按1000：3比例混合，在50-60rpm下絮凝沉淀1-2h，離心分離，去沉淀，收集上清液；
步驟四：上述上清液中加入飽和醋酸鈉溶液至終濃度為30％，用醋酸調節ph至4.5，在2℃下靜置30min，8000rpm離心10min，去除沉淀，取上清液；
步驟五：用超濾器將上述上清液濃縮至原來的1/3，然后冷凍干燥，即得sod產品。
盡管這里參照本發明的解釋性實施例對本發明進行了描述，上述實施例僅為本發明較佳的實施方式，本發明的實施并不受上述實施例的限制，應該理解，本領域技術人員可以設計出很多其他的修改和實施方式，凡在本發明的精神和原則之內所作的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。