本發明涉及植物抗性鑒定，具體而言，涉及一種小麥赤霉病抗性鑒定方法。

背景技術：

1、小麥是我國三大糧食作物之一，具有品種(系)多，分布范圍廣，播種面積大等特點。在長江中下游小麥安全生產中受赤霉病影響較為嚴重，且逐漸向黃淮麥區蔓延。

2、赤霉病是世界范圍內一種破壞性很強的真菌病害，對小麥的產量和品質造成嚴重影響。生產上主要以化學藥劑(如：50％多菌靈可濕性粉劑、25％氰烯菌酯懸浮劑、43％戊唑醇懸浮劑等)防治為主，有研究表明，小麥施用多菌靈，不同用藥次數和用藥劑量處理后，在其籽粒中均能檢測出多菌靈殘留。化學農藥的大面積使用，造成生態環境污染、空氣污染、農藥殘留等問題，嚴重威脅人、畜健康，而種植抗性品種被認為是防控小麥赤霉病最安全、有效的方法。

3、在小麥赤霉病抗性育種過程中需經過抗病性鑒定，進行有目的的篩選。目前，赤霉病抗性鑒定常用的方法有自然發病鑒定法、單花滴注法、孢子懸浮液噴霧法和土表病麥粒接種法等。但是，現有技術中的這些方法中存在以下缺陷：1、過程繁瑣；2、個體間發病差異大；3、準確度低。

4、為此，本申請經過研究，提供一種小麥赤霉病抗性鑒定方法，以解決上述問題。

技術實現思路

1、本發明的目的在于解決上述背景技術中提出的技術問題，提供一種小麥赤霉病抗性鑒定方法。

2、本發明的上述目的是這樣實現的：

3、一種小麥赤霉病抗性鑒定方法，包括以下步驟：

4、s1、在田間鑒定圃播種小麥品種，將其分別作為高抗、中抗、中感和高感差異品種，并在其整個生育期內做好田間水肥管理，以小麥赤霉病單花滴注接種法作為對照；

5、s2、配制pda培養基；

6、s3、pda平板制作；

7、s4、赤霉病菌的繁殖和活化；

8、s5、配制小麥赤霉病病菌孢子懸浮液；

9、s6、制備秸稈；

10、s7、制備帶菌短稈；

11、s8、小麥赤霉病病菌接種；

12、s9、調查接種麥穗的發病情況，統計發病小穗數和總小穗數，并計算病小穗率和平均嚴重度。

13、進一步的，步驟s2的具體方法為：

14、將新鮮馬鈴薯去皮稱取200g，切成小片狀，加1000ml蒸餾水煮沸，待馬鈴薯軟爛后，用6層紗布過濾去渣，然后將濾液倒入煮鍋，再依次加入20g葡萄糖、10g瓊脂粉，攪拌，待完全溶解后，將濾液定容至1000ml，分裝至250ml容量的錐形瓶中，每瓶大約100ml，121℃高壓滅菌鍋滅菌25min，之后置于室溫下備用。

15、進一步的，步驟s3中pda平板制作的方法為：

16、在超凈工作室中，將滅菌后的pda置于微波爐加熱融化，在無菌超凈工作臺上，將液體pda倒入無菌培養皿中，每個皿內倒15-20ml，制成pda平板，凝固，備用。

17、進一步的，步驟s4具體包括：

18、(1)在無菌超凈工作臺上，將接種針燒紅放涼后，在小麥赤霉病菌株ph-1、f0980、f1213的邊緣依次挑取菌絲，分別接種于pda平板正中間位置，并做好標記，封口膜密封，置于培養箱25℃，黑暗培養3-5天；

19、(2)觀察上述三種赤霉病菌株有無污染，菌絲是否正常生長；

20、(3)將正常生長的三種赤霉病菌株分別再轉接活化一次；采用0.5cm打孔器在小麥赤霉病菌株ph-1、f0980、f1213菌絲邊緣依次打上菌餅，每種赤霉病菌株各挑一個菌餅分別接種于pda平板正中間位置，做好標記，封口膜密封，置于培養箱25℃，黑暗培養3-5天。

21、進一步的，步驟s5具體包括：

22、(1)挑選新鮮綠豆30g，加蒸餾水煮15min，用雙層紗布過濾去渣，后將濾液定容至1000ml，分裝至250ml容量的錐形瓶中，每瓶量取150ml，121℃滅菌15min，晾涼備用；

23、(2)在無菌超凈工作臺中，用直徑為0.5cm的打孔器依次在三種赤霉病菌株pda平板菌絲邊緣打制菌餅，做好標記，每個錐形瓶中接5個菌餅，每個赤霉病菌株分別接種2瓶，做好標記，然后將其于25℃、180rpm搖培72小時，然后用雙層紗布過濾去渣，獲得小麥赤霉病病菌孢子懸浮液；

24、(3)用血球計數板分別觀察三種赤霉病病菌孢子懸浮液中的分生孢子數，重復3次；

25、(4)將三種小麥赤霉病病菌孢子懸浮液分別稀釋，調節孢子懸浮液濃度至1×105cfu·ml－1，將三種赤霉病病菌孢子懸浮液等比例混勻，制成混合孢子懸浮液，備用。

26、進一步的，步驟s6中制備秸稈的方法為：

27、將前一年成熟后的小麥秸稈收集起來，去掉葉片、穗部和根，只留莖稈，置于陰涼干燥處儲藏；將儲藏的秸稈取出，豎向劃開，并剪成1cm長的短稈，121℃滅菌20min，然后置于超凈工作臺上，晾涼干燥，備用。

28、進一步的，步驟s7中制備帶菌短稈的具體方法為：

29、(1)在無菌超凈工作臺中，將短稈置于混合孢子懸浮液中，25℃、180rpm搖培24h，制成菌孢子小短稈，備用；

30、(2)將0.5cm菌株為f1213的菌餅放置在pda培養基中間，取適量小短稈均勻平鋪在培養基上，用封口膜密封，置于培養箱25℃，黑暗培養3-5天，待菌絲鋪滿培養皿，即制成菌絲小短稈，備用。

31、進一步的，步驟s8中小麥赤霉病病菌接種的具體方法為：

32、(1)當各差異品種小麥揚花時，選取長勢良好且麥穗中間出現4-6個小穗揚花的小麥植株用不同顏色彩色膠紙標記，標記在穗下頸基部下方3cm處；

33、(2)選擇在傍晚時間接種，并在接種前對標記麥穗噴水保濕；

34、(3)將菌孢子小短稈和菌絲小短稈分別接種于麥穗中間小穗穎殼內；在標記的麥穗選取最低側向上數第5個小穗，用左手輕輕拉開一側穎殼，右手用鑷子夾一支帶菌短稈，輕輕放入穎殼內，松開左手，利用其自身的彈力將帶菌短稈夾緊，即完成接種，用塑封袋套袋3天，取袋后彌霧保濕一周。

35、與現有技術相比，本發明具有以下有益效果：

36、1、本發明的方法過程簡單，克服了采用現有技術方法時個體間發病差異大的缺陷，且準確度高；

37、2、本發明的方法在田間接種鑒定大量小麥新品種(系)時，通過小短稈接種法和菌絲接種法模擬田間自然發病過程，無傷口定量接種，效率更高，有利于精準鑒定小麥抗侵染和抗擴展的綜合能力，且鑒定結果更為可靠、便捷。

技術特征：

1.一種小麥赤霉病抗性鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據權利要求1所述的一種小麥赤霉病抗性鑒定方法，其特征在于，步驟s2的具體方法為：

3.根據權利要求1所述的一種小麥赤霉病抗性鑒定方法，其特征在于，步驟s3中pda平板制作的方法為：

4.根據權利要求1所述的一種小麥赤霉病抗性鑒定方法，其特征在于，步驟s4具體包括：

5.根據權利要求4所述的一種小麥赤霉病抗性鑒定方法，其特征在于，步驟s5具體包括：

6.根據權利要求1所述的一種小麥赤霉病抗性鑒定方法，其特征在于，步驟s6中制備秸稈的方法為：

7.根據權利要求1所述的一種小麥赤霉病抗性鑒定方法，其特征在于，步驟s7中制備帶菌短稈的具體方法為：

8.根據權利要求1所述的一種小麥赤霉病抗性鑒定方法，其特征在于，步驟s8中小麥赤霉病病菌接種的具體方法為：

技術總結
本發明涉及植物抗性鑒定技術領域，具體公開了一種小麥赤霉病抗性鑒定方法，其技術要點為：包括以下步驟：S1、在田間鑒定圃播種小麥品種，將其分別作為高抗、中抗、中感和高感差異品種，并在其整個生育期內做好田間水肥管理，以小麥赤霉病單花滴注接種法作為對照；S2、配制PDA培養基；S3、PDA平板制作；S4、赤霉病菌的繁殖和活化；S5、配制小麥赤霉病病菌孢子懸浮液；S6、制備秸稈；S7、制備帶菌短稈；S8、小麥赤霉病病菌接種；S9、調查接種麥穗的發病情況，統計發病小穗數和總小穗數，并計算病小穗率和平均嚴重度。本發明的方法過程簡單，克服了采用現有技術方法時個體間發病差異大的缺陷，且準確度高。

技術研發人員：張小娟,張鵬飛,王立峰,劉倩倩,湯清益,凌冬,王盾,姜麗虹
受保護的技術使用者：襄陽市農業科學院
技術研發日：
技術公布日：2025/4/24