一種林蛙皮凍干粉的制備方法
【專利摘要】本發明提供一種提取制備林蛙皮凍干粉的方法。主要步驟包括，將干燥林蛙皮依次放入蒸餾水、NaCl水溶液、丙酮中浸泡，烘干后研磨制成粗粉；將粗粉加入到乙酸水溶液中進行提取，離心后取上清液進行冷凍干燥。本發明方法簡便易行，成本低，適用于工業化生產；采用本發明制備的林蛙皮凍干粉，其粒徑達到微米級別，可溶于水，蛋白質含量高，因此可作為一種性能優良的添加劑，在紙張、包裝品、紡織衛生用品制造等方面有著良好的應用前景。
【專利說明】一種林娃皮凍干粉的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種林蛙皮凍干粉的制備方法，尤其涉及一種從林蛙皮中提取制備具有生物活性、能溶于水的林蛙皮凍干粉的方法。
【背景技術】
[0002]林蛙是一種藥、食兼用的珍貴經濟動物，林蛙皮作為林蛙的表皮組織，即使在林蛙死亡后，林蛙皮也不霉爛、不變質。現有實驗研究證實，林蛙皮中含有較多的膠原蛋白、多肽、透明質酸等物質，其中膠原蛋白含量高達48%。膠原蛋白是一種纖維蛋白，廣泛存在于肌腱、韌帶、軟骨、皮膚等結締組織中，其基本單元是原膠原分子，膠原蛋白所特有的三重螺旋的氨基酸結構使它具有許多很有用的特性，如高拉伸強度、生物降解性能、低抗原活性、低刺激性和低細胞毒性。
[0003]由于林娃肉可食用，市場中每年都有大量的林娃皮被廢棄,不僅是一種資源浪費，還會造成環境污染，由此迫切需要對廢棄林蛙皮進行回收利用。以現有常規技術而言，林蛙皮粉的制備大多采用單一的物理研磨法、超聲波破碎技術，但由此獲得的粉體顆粒較大，混合雜質較多，不溶于水，使其應用受到很大限制。
[0004]關于以蛙皮為原料制備膠原蛋白的方法，查得現有技術如:在“林蛙皮膠原蛋白的提取及抗氧化性”(作者呂玲玲等，食品研究與開發，2013，34 (10):20~22)—文中記載，通過木瓜蛋白酶在乙酸溶液中從林蛙皮中提取制得膠原蛋白，檢測得到膠原蛋白提取率為24.71%，純度為72.03%,其膠原蛋白對羥自由基具有一定的清除能力，并且隨著濃度的增加抗氧化活性逐漸增強。目前，從林蛙皮中提取高純度膠原蛋白的方法正在進一步研究中，其缺點是制備方法復雜、成本較高。
[0005]因此，如何提取制備顆粒小、可溶于水、蛋白質含量高的林蛙皮粉，同時盡可能降低提取成本，成為亟待解決的課題。

【發明內容】

[0006]為解決上述技術問題，本發明提供一種提取制備林蛙皮凍干粉的方法，該方法簡便易行、成本低，且由此制備的凍干粉粒徑小，可溶于水，蛋白質含量高。
[0007]本發明為解決技術問題而采用如下技術方案:
[0008]一種林蛙皮凍干粉的制備方法，包括如下步驟:
[0009](I )取干燥林蛙皮放入蒸餾水中浸沒靜置6~12小時，再放入NaCl水溶液中浸沒靜置6~12小時，用蒸餾水沖洗，最后放入丙酮中浸沒靜置，且每隔6~12小時更換一次丙酮，共更換2~3次，用蒸餾水沖洗，烘干，研磨制成林蛙皮粗粉；
[0010](2)取上述林蛙皮粗粉加入到乙酸水溶液中提取2.5~3.5天，林蛙皮粗粉與乙酸水溶液的質量體積比為1:30~50 (g/ml)，得提取液；
[0011](3)對上述提取液進行離心處理，取上清液進行冷凍干燥，得林蛙皮凍干粉。
[0012]作為優選，所述NaCl水溶液的濃度為0.1~0.15mol/L。[0013]作為優選，所述乙酸水溶液的體積百分濃度為3~5%。
[0014]作為優選,所述研磨，使用球形研磨儀，且球形研磨儀的工作頻率為30Hz~40Hz。
[0015]本發明與現有技術相比具有如下有益效果:
[0016]本發明所述林蛙皮凍干粉提取制備方法簡便，成本低，適用于工業化生產，易于實現對廢棄林蛙皮的有效回收利用，變廢為寶。采用本發明制備的林蛙皮凍干粉的顆粒達到微米級別，經電鏡掃描測得粒徑范圍為40 μ m~80 μ m，可溶于水，且經檢測得到其中蛋白質的含量為72.14%~74.40%,因此克服了現有技術制備的林蛙皮粉顆粒大、不溶于水，雜質含量高的缺點。本發明制備的林蛙皮凍干粉可作為一種性能優良的添加劑，在紙張、包裝品、紡織衛生用品制造等方面有著良好的應用前景。
【專利附圖】

【附圖說明】[0017]圖1是采用本申請實施例1制備的林蛙皮凍干粉照片；
[0018]圖2是采用本申請實施例1制備的林蛙皮凍干粉電鏡掃描照片；
[0019]圖3是采用本申請實施例1制備的林蛙皮凍干粉220nm-360nm紫外吸收光譜圖；
[0020]圖4是采用本申請實施例2制備的林蛙皮凍干粉照片；
[0021]圖5是采用本申請實施例2制備的林蛙皮凍干粉的電鏡掃描照片；
[0022]圖6是采用本申請實施例2制備的林蛙皮凍干粉220nm-360nm紫外吸收光譜圖；
[0023]圖7是采用本申請實施例3制備的林蛙皮凍干粉照片；
[0024]圖8是采用本申請實施例3制備的林蛙皮凍干粉電鏡掃描照片；
[0025]圖9是采用本申請實施例3制備的林蛙皮凍干粉220nm-360nm紫外吸收光譜圖
【具體實施方式】
[0026]下面結合附圖給出的實施例，對本發明作進一步的描述；但這些實施例僅用于解釋本發明，對本發明的范圍并不構成限制。
[0027]實施例1
[0028]稱取干燥林蛙皮20g，在蒸餾水中浸沒靜置8小時至完全舒展，然后將林蛙皮放入
0.12mol/LNaCl水溶液中浸沒靜置8小時，用蒸餾水反復沖洗5次后，再放入丙酮中浸沒靜置，每隔8小時更換一次丙酮，共更換3次，隨后用蒸餾水反復沖洗5次，置于烘箱中烘干。將烘干后的林蛙皮裝入行星式球磨儀(QM — 3SP2)研磨罐中，將研磨頻率設定為35Hz，研磨時間設定為lh，研磨得到林蛙皮粗粉。
[0029]取IOg上述研磨好的林蛙皮粗粉，放入500ml5%v/v的乙酸水溶液中，置于常溫狀態下3天，同時低速攪拌。將上述混合液置于離心機中離心，設定轉速為5000r/min,離心時間為30min。
[0030]取離心后的上清液置于冷凍干燥機中，冷凍干燥24h，得到如圖1所示的淡黃色林蛙皮凍干粉；其電鏡掃描結果如圖2所示，粒徑約為40μπι。
[0031]使用微量紫外分光光度計(QuawelI Q5000，US)測定林蛙皮凍干粉中蛋白質的含量。具體測定方法為:精密稱取上述制備的林蛙皮凍干粉，以體積比5%的乙酸水溶液為溶劑，配置成濃度為50mg/ml的凍干粉溶液。設置檢測波長范圍為220nm至360nm，精密吸取凍干粉溶液2 μ 1，滴加在微量紫外分光光度計的測試孔上，測得溶液中蛋白質的含量為37.20mg/ml,如圖3所示，再依據公式(37.20/50) X 100%，計算出林蛙皮凍干粉中蛋白質的質量百分含量為74.40%。
[0032]實施例2
[0033]稱取干燥林蛙皮20g，在蒸餾水中浸沒靜置6小時，然后將林蛙皮再放入0.1mol/LNaCl溶液中浸沒靜置6小時，用蒸餾水反復沖洗5次后，再放入丙酮中浸沒靜置，每隔6小時更換一次丙酮，共更換2次，然后將浸泡后的林蛙皮用蒸餾水沖洗5次，置于烘箱中烘干。將烘干后的林蛙皮裝入行星式球磨儀(QM — 3SP2)研磨罐中，將研磨頻率設定為30Hz，研磨時間設定為lh，研磨得到林蛙皮粗粉。
[0034]取IOg上述研磨好的林蛙皮粗粉，放入300ml3%v/v的乙酸水溶液中，置于常溫狀態下2.5天，同時低速攪拌。將上述混合液置于離心機中離心，設定轉速為5000r/min,離心時間為30min。
[0035]取離心后的上清液置于冷凍干燥機中，冷凍干燥24h，得到如圖4所示的林蛙皮凍干粉；其電鏡掃描結果如圖5所示，粒徑約為80 μ m。
[0036]使用微量紫外分光光度計(QuawelI Q5000，US)測定林蛙皮凍干粉中蛋白質的含量。具體測定方法為:精密稱取上述制備的林蛙皮凍干粉，以體積比5%的乙酸水溶液為溶劑，配置成濃度為50mg/ml的凍干粉溶液。設置檢測波長范圍為220nm至360nm，精密吸取凍干粉溶液2μ 1，滴加在微量紫外分光光度計的測試孔上，測得溶液中蛋白質的含量為36.07mg/ml,如圖6所示，再依據公式(36.07/50) X 100%，計算出林蛙皮凍干粉中蛋白質的質量百分含量為72.14%。 [0037]實施例3
[0038]稱取干燥林蛙皮20g，在蒸餾水中浸沒靜置12小時至完全舒展，然后將林蛙皮放入0.15mol/LNaCl水溶液中浸沒靜置12小時，用蒸餾水反復沖洗5次后，再放入丙酮中浸沒靜置，每隔12小時更換一次丙酮，共更換3次，用蒸餾水沖洗5次，置于烘箱中烘干。將烘干后的林蛙皮裝入行星式球磨儀(QM — 3SP2)研磨罐中，將研磨頻率設定為40Hz，研磨時間設定為lh，研磨得到林蛙皮粗粉。
[0039]取IOg上述研磨好的林蛙皮粗粉，放入400ml4%v/v的乙酸水溶液中，置于常溫狀態下3.5天，同時低速攪拌。將上述混合液置于離心機中離心，設定轉速為5000r/min,離心時間為30min。
[0040]取離心后的上清液置于冷凍干燥機中，冷凍干燥24h，得到如圖7所示的淡黃色林蛙皮凍干粉；其電鏡掃描結果如圖6所示，粒徑約為60 μ m。
[0041]使用微量紫外分光光度計(QuawelI Q5000，US)測定林蛙皮凍干粉中蛋白質的含量。具體測定方法為:精密稱取上述制備的林蛙皮凍干粉，以體積比5%的乙酸水溶液為溶劑，配置成濃度為50mg/ml的凍干粉溶液。設置檢測波長范圍為220nm至360nm，精密吸取凍干粉溶液2 μ 1，滴加在微量紫外分光光度計的測試孔上，測得溶液中蛋白質的含量為36.57mg/ml,如圖6所示，再依據公式(36.57/50) X 100%，計算出林蛙皮凍干粉中蛋白質的質量百分含量為73.14%。
【權利要求】
1.一種林蛙皮凍干粉的制備方法，其特征為包括如下步驟: (1)取干燥林蛙皮放入蒸餾水中浸沒靜置6~12小時，再放入NaCl水溶液中浸沒靜置6~12小時，用蒸餾水沖洗，最后放入丙酮中浸沒靜置，且每隔6~12小時更換一次丙酮，共更換2~3次，用蒸餾水沖洗，烘干，研磨制成林蛙皮粗粉； (2)取上述林蛙皮粗粉加入到乙酸水溶液中提取2.5~3.5天，林蛙皮粗粉與乙酸水溶液的質量體積比為1:30~50 (g/ml)，得提取液； (3)對上述提取液進行離心處理，取上清液進行冷凍干燥，得林蛙皮凍干粉。
2.根據權利要求1所述的一種林蛙皮凍干粉的制備方法，其特征為，所述NaCl水溶液的濃度為0.1~0.15mol/L。
3.根據權利要求1所述的一種林蛙皮凍干粉的制備方法，其特征為，所述乙酸水溶液的體積百分濃度為3~5%。
4.根據權利要求1、2、3任一所述的一種林蛙皮凍干粉的制備方法，其特征為，所述研磨，使用球形研磨儀，且球形研磨儀的工作頻率為30Hz~40Hz。
【文檔編號】C09K15/34GK103881725SQ201410138363
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2014年4月8日 優先權日:2014年4月8日
【發明者】張梅, 徐文宇, 鄧旭明, 王佳冕, 張俞靜 申請人:吉林大學