專利名稱：一種乳酸桿菌菌株及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種乳酸桿菌菌株，特別是涉及一種環(huán)境生物技術(shù)領(lǐng)域中的乳酸桿菌菌株及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
城鎮(zhèn)公廁與景區(qū)公廁數(shù)量不斷增多已成為體現(xiàn)城鎮(zhèn)與景區(qū)管理水平與文明程度的重要標(biāo)志，但由其引起的惡臭污染已成為城市與景區(qū)環(huán)境保護(hù)的重要議題。糞便惡臭含有多種有毒成分，其中氨氣、硫化氫、硫醇、甲硫醇是主要有害氣體成分，人們長(zhǎng)期吸入后對(duì)身體健康造成嚴(yán)重傷害。公廁除臭水平既關(guān)系環(huán)境衛(wèi)生、民眾健康、大氣污染，也關(guān)系到城鎮(zhèn)與景區(qū)的聲譽(yù)與外在形象。目前，針對(duì)公廁糞便惡臭脫除方法有化學(xué)除臭與生物除臭，化學(xué)除臭劑雖然針對(duì)性強(qiáng)，見(jiàn)效快，但其應(yīng)用范圍小，遇到復(fù)雜惡臭氣體成份時(shí)，除臭效能將失效，并且使用成本高，并且容易造成二次污染。生物除臭劑能持久消除惡臭，無(wú)二次污染，使用方便，成本低廉等特點(diǎn)。生物除臭的核心是聞效除臭功能微生物菌株，通過(guò)分尚篩選聞效除臭功能菌株再接種于糞便中可以有效降低其釋放的惡臭強(qiáng)度，達(dá)到糞便惡臭原位控制目的。公開(kāi)號(hào)為CN1389410的中國(guó)發(fā)明專利公開(kāi)了一種處理人糞尿的菌劑，包括奧氏梭菌:乳酸桿菌屬:枝桿菌屬:脫硫弧菌:乙酸梭菌:產(chǎn)甲烷細(xì)菌=1:0.25 4:0.25 4:0.25 4:0.25 4:0.25 4。公開(kāi)號(hào)為CN102732452A的中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)公開(kāi)了一種生物除臭劑，包括了包括糖蜜、水和復(fù)合菌種，所述復(fù)合菌種由枯草芽孢桿菌、涇陽(yáng)鏈霉菌、釀酒酵母菌、保加利亞乳酸桿菌和沼澤紅假單胞菌按2:2:1:3:2的重量比組成。公開(kāi)號(hào)為CN102813949A的中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)公開(kāi)了一種微生物環(huán)保劑，包括沼澤紅假單孢菌、枯草芽孢菌、德氏乳酸桿菌混合后和中藥提取液。上述三種產(chǎn)品都采用了復(fù)合菌劑用于糞便除臭。混合菌株在除 臭穩(wěn)定方面一般高于單菌株，但混合菌株制備除臭劑的方法比較復(fù)雜，一般多為先單菌株發(fā)酵，再按一定比例混合配伍成微生物除臭劑。由于混合菌株各單菌株的生理生化特性、呼吸代謝類型以及功能差別較大，各單菌株必須有自己的培養(yǎng)方法，因此造成混合菌株制備微生物除臭劑工藝方法比較復(fù)雜，成本較高。而單一菌株用于除臭則具有除臭效果不佳的缺陷，應(yīng)用有限。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種能夠用于糞便除臭的乳酸桿菌菌株。該菌株可以作為除臭微生物單獨(dú)接種于糞便并有良好的除臭效果。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供乳酸桿菌屬(Lactobacillus sp.)菌株保藏信息:乳酸桿菌CGMCC6495已保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(地址:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵編100101)，保藏日期2012年9月3日，保藏編號(hào)CGMCC N0.6495，建議的分類命名:乳桿菌Lactobacillus sp.。乳酸桿菌CGMCC6495采集自四川大邑縣某泡菜廠排放出的泡菜污水。將采集的泡菜污水進(jìn)行梯度稀釋，從10_2、10_4、10' 10_8、10,稀釋度下吸取0.1ml于MRS分離培養(yǎng)基平板涂布，30°C恒溫培養(yǎng)。經(jīng)多次分離后獲得的該菌株。MRS分離培養(yǎng)基:蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、葡萄糖5g、乙酸鈉5g、朽1檬酸二銨2g、吐溫801ml、硫酸鎂0.58g、硫酸猛
0.05g、磷酸氫二鉀2g、碳酸 丐20.0g、加水至1000ml、ρΗ6.0,121°C、30min高溫滅菌處理。本發(fā)明菌株在顯微鏡下觀察，菌株細(xì)胞短桿狀，菌落表面凸起，乳白色，表面粗糙，邊緣不整齊。菌落隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加變?yōu)辄S色。革蘭氏陽(yáng)性。菌株最佳生長(zhǎng)溫度為30°C，在45°C下不能生長(zhǎng)，最佳生長(zhǎng)pH6.5 7，在6.5%NaCl中不能生長(zhǎng)。菌株不產(chǎn)生吲哚，不水解淀粉，不利用檸檬酸鹽，不還原硝酸鹽，不產(chǎn)生H2S，VP試驗(yàn)陰性。利用葡萄糖、果糖、蔗糖，不利用木糖、阿拉伯糖、甘露醇、乳糖、麥芽糖。乳酸桿菌CGMCC6495的活化液體培養(yǎng)基為組分為:蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、葡萄糖5g、乙酸鈉5g、朽1檬酸二銨2g、吐溫801ml、硫酸鎂0.58g、硫酸猛0.05g、磷酸氫二鉀2g，加水至1000ml，pH6.2。乳酸桿菌CGMCC6495擴(kuò)大發(fā)酵液體培養(yǎng)基組分為:蛋白胨5g、牛肉膏5g、酵母膏5g、葡萄糖10g、乙酸鈉5g、朽1檬酸二銨2g、吐溫801ml、硫酸鎂0.58g、硫酸錳0.05g、磷酸氫二鉀2g，加水至1000ml，pH6.0。若采用固體培養(yǎng)則分別在兩種液體培養(yǎng)基配方基礎(chǔ)上增加瓊脂1.0% 2.0% (W/V)。本發(fā)明還提供乳酸桿菌CGMCC6495在糞便除臭中的應(yīng)用方法。在試驗(yàn)室條件下將活化培養(yǎng)與擴(kuò)大培養(yǎng)后的乳酸桿菌CGMCC6495菌液接種到人糞便中，20°C 30°C條件下處理5d,能夠顯著降低糞便的臭氣強(qiáng)度(0U)、氨氣濃度(mg/m3)、硫化氫濃度(mg/m3)等多項(xiàng)臭味指標(biāo)。在公共旱廁的現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)中，將乳酸桿菌CGMCC6495菌液噴灑在糞便上，常溫條件下處理5d,能夠有效降低臭氣強(qiáng)度(0U)、氨氣濃度(mg/m3)、硫化氫濃度(mg/m3)等多項(xiàng)臭味指標(biāo)，且除臭效果可達(dá)到試驗(yàn)室操作條件下除臭效果。乳酸桿菌CGMCC6495應(yīng)用于糞便除臭可以采用直接接種(如噴灑到糞便)的方法，實(shí)現(xiàn)臭氣原位控制，操作簡(jiǎn)單、投入小。乳酸桿菌CGMCC6495 菌株應(yīng)用于糞便除臭的技術(shù)原理在于乳酸桿菌CGMCC6495菌株接種至糞便中后，以攝取光合細(xì)菌、酵母菌產(chǎn)生的糖類等物質(zhì)為基礎(chǔ)，制作乳酸。乳酸具有很強(qiáng)的殺菌能力，能有效抑制有害微生物的活動(dòng)，以及有機(jī)物的急劇腐敗分解，可以在糞便中良好生長(zhǎng)，占據(jù)有利生態(tài)位，抑制產(chǎn)惡臭微生物生長(zhǎng)繁殖，降低糞便惡臭釋放強(qiáng)度，實(shí)現(xiàn)了惡臭原位源頭控制。本發(fā)明提供的乳酸桿菌CGMCC6495可以進(jìn)一步依照常規(guī)加工工藝加工成除臭菌齊U。例如以麩皮為填充劑的除臭菌劑制備:將乳酸桿菌CGMCC6495菌株在擴(kuò)大發(fā)酵液體培養(yǎng)基中在30°C，120rpm振蕩培養(yǎng)48h制得液體除臭菌劑，將液體除臭菌劑與滅菌麩皮按質(zhì)量比1:1 (W/W)混合后，置于40°C恒溫培養(yǎng)箱中烘干培養(yǎng)20h 24h，至含水量為15% 20%,即為固體除臭菌劑。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是:(1)提供了新的乳酸桿菌屬菌株:乳酸桿菌CGMCC6495 ;(2)乳酸桿菌CGMCC6495能夠應(yīng)用于糞便的生物除臭；(3)乳酸桿菌CGMCC6495從泡菜廢水中篩選得到，不會(huì)對(duì)周圍環(huán)境與生態(tài)平衡造成危害，符合生物安全法規(guī)；(4)乳酸桿菌CGMCC6495除臭效果穩(wěn)定，受溫度影響小，在常溫條件下仍具有較好的現(xiàn)場(chǎng)除臭效果；(5)乳酸桿菌CGMCC6495僅須單一菌株即可應(yīng)用于糞便除臭，除臭效果與現(xiàn)有混合菌株制劑接近，但具有使用方便，包裝、運(yùn)輸便利，易形成商品化的明顯的技術(shù)優(yōu)勢(shì)；
(6)乳酸桿菌CGMCC6495可以通過(guò)原位除臭方法有效除臭，相較于異位除臭方法(如土壤除臭法、珍珠巖棉除臭法、堆肥除臭法、活性污泥除臭法、泥炭土除臭法和鋸末除臭法等)除臭操作簡(jiǎn)單易行、無(wú)需配套設(shè)備與技術(shù)、投資規(guī)模小。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容作進(jìn)一步描述實(shí)施例一本發(fā)明乳酸桿菌CGMCC6495應(yīng)用于糞便除臭。1、培養(yǎng)基及接種菌液制備固體活化培養(yǎng)基:蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，葡萄糖5g，乙酸鈉5g，檸檬酸二銨2g，吐溫801ml，硫酸鎂0.58g，硫酸錳0.05g,磷酸氫二鉀2g，瓊脂15g 20g,補(bǔ)水至 1000ml, pH6.2。121°C、30min 高溫滅菌處理。液體擴(kuò)大發(fā)酵培養(yǎng)基:蛋白胨5g，牛肉膏5g，酵母膏5g，葡萄糖10g，乙酸鈉5g，檸檬酸二銨2g，吐溫801ml，硫酸鎂0.58g，硫酸錳0.05g，磷酸氫二鉀2g，補(bǔ)水至1000ml，pH6.00 121°C、30min高溫滅菌處理。 將乳酸桿菌CGMCC6495種至活化培養(yǎng)基中活化培養(yǎng)48h得活化菌種待用；將活化菌種接種到擴(kuò)大發(fā)酵培養(yǎng)基，30°C 35°C、120rmp條件下振蕩培養(yǎng)48h 72h，得接種菌液(菌液濃度107 108CFU/ml)，待用。2、糞便除臭處理將接種菌液IOml接種于裝有`300g人糞便的IL燒杯中(接種量3.33%，V/W)，保鮮膜密封燒杯；同時(shí)做不加菌液的對(duì)照，每組實(shí)驗(yàn)設(shè)置三個(gè)重復(fù)，溫度30°C。5d后測(cè)定惡臭強(qiáng)度、氨氣濃度、硫化氫濃度，測(cè)定結(jié)果如下表I。表I乳酸桿菌CGMCC6495菌株除臭效果(30°C )
權(quán)利要求
1.乳酸桿菌屬Lactobacillus菌株,保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏日期2012年9月3日，保藏編號(hào)CGMCCN0.6495。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的乳酸桿菌CGMCC6495應(yīng)用于糞便除臭。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用方法，其特征在于:是糞便原位除臭。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的應(yīng)用方法，其特征在于:是將活化培養(yǎng)與擴(kuò)大培養(yǎng)后的乳酸桿菌CGMCC6495菌液應(yīng)用于糞便除臭。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用方法，其特征在于:乳酸桿菌CGMCC6495活化液體培養(yǎng)基組分為蛋白胨log、牛肉膏10g、酵母膏5g、葡萄糖5g、乙酸鈉5g、檸檬酸二銨2g、吐溫801ml、硫酸鎂0.58g、硫酸錳0.05g、磷酸氫二鉀2g、加水至1000ml, ρΗ6.2 ;或者乳酸桿菌CGMCC6495活化固體培養(yǎng)基組分為蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、葡萄糖5g、乙酸鈉5g、檸檬酸二銨2g、吐溫801ml、硫酸鎂0.58g、硫酸錳0.05g、磷酸氫二鉀2g，加水至1000ml，再加入瓊脂 1.0% 2.0% (W/V), ρΗ6.2。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用方法，其特征在于:乳酸桿菌CGMCC6495擴(kuò)大發(fā)酵液體培養(yǎng)基組分為蛋白胨5g、牛肉膏5g、酵母膏5g、葡萄糖10g、乙酸鈉5g、朽1檬酸二銨2g、吐溫801ml、硫酸鎂0.58g、硫酸錳0.05g、磷酸氫二鉀2g、加水至1000ml，pH6.0 ;或者乳酸桿菌CGMCC6495擴(kuò)大發(fā)酵固體培養(yǎng)基組分為蛋白胨5g、牛肉膏5g、酵母膏5g、葡萄糖10g、乙酸鈉5g、檸檬酸二銨2g、吐溫801ml、硫酸鎂0.58g、硫酸錳0.05g、磷酸氫二鉀2g、瓊脂1.0% 2.0%，加水至 1000ml，再加入瓊脂 1.0% 2.0% (W/V), ρΗ6.0。
7.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的應(yīng)用方法，其特征在于:依如下步驟實(shí)施: 步驟S1、乳酸桿菌CGMCC6495菌株活化培養(yǎng)得活化菌株，活化液體培養(yǎng)基為組分為蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、葡萄糖5g、乙酸鈉5g、朽1檬酸二銨2g、吐溫801ml、硫酸鎂0.58g、硫酸錳0.05g、磷酸氫二鉀2g，加水至1000ml，pH6.2 ;或者活化固體培養(yǎng)基組分為蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g`、葡萄糖5g、乙酸鈉5g、朽1檬酸二銨2g、吐溫801ml、硫酸鎂0.58g、硫酸錳0.05g、磷酸氫二鉀2g，加水至1000ml，再加入瓊脂1.0% 2.0% (W/V),ρΗ6.2 ； 步驟S2、乳酸桿菌CGMCC6495菌株活化菌株擴(kuò)大發(fā)酵培養(yǎng)得接種菌液，擴(kuò)大發(fā)酵液體培養(yǎng)基組分為蛋白胨5g、牛肉膏5g、酵母膏5g、葡萄糖10g、乙酸鈉5g、朽1檬酸二銨2g、吐溫801ml、硫酸鎂0.58g、硫酸錳0.05g、磷酸氫二鉀2g、加水至1000ml、pH6.0 ;或者擴(kuò)大發(fā)酵固體培養(yǎng)基組分為蛋白胨5g、牛肉膏5g、酵母膏5g、葡萄糖10g、乙酸鈉5g、朽1檬酸二銨2g、吐溫801ml、硫酸鎂0.58g、硫酸錳0.05g、磷酸氫二鉀2g、瓊脂1.0% 2.0%，加水至1000ml,再加入瓊脂 1.0% 2.0% (W/V)，ρΗ6.0 ； 步驟S3、接種除臭，將接種菌液接種于人糞便中，在20°C 35°C條件下處理。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用方法，其特征在于:所述步驟SI中，培養(yǎng)時(shí)間48h;所述步驟S2中振蕩培養(yǎng)條件為120rpm，30°C 35°C，培養(yǎng)48h 72h。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用方法，其特征在于:所述步驟S3中接種量為1% 10%(V/W)。
10.一種以乳酸桿菌CGMCC6495為除臭效用成分的糞便除臭菌劑。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種乳酸桿菌菌株及其應(yīng)用。乳酸桿菌CGMCC6495從泡菜污水中分離得到，已保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏日期2012年9月3日，保藏編號(hào)CGMCC No.6495。該菌株經(jīng)常規(guī)的活化培養(yǎng)與擴(kuò)大發(fā)酵培養(yǎng)可應(yīng)用于糞便的生物除臭。乳酸桿菌CGMCC6495作為單一菌株即可應(yīng)用于人糞便原位除臭，除臭效果穩(wěn)定，受溫度影響小。在常溫條件下無(wú)論是試驗(yàn)室環(huán)境還是公廁現(xiàn)場(chǎng)環(huán)境都具有較好的除臭效果。
文檔編號(hào)C02F11/02GK103173384SQ201310036200
公開(kāi)日2013年6月26日 申請(qǐng)日期2013年1月30日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月30日
發(fā)明者閆志英, 劉曉風(fēng), 袁月祥, 廖銀章, 李志東, 許力山 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院成都生物研究所