專利名稱：癌性疾病調節抗體的制作方法
技術領域：
本發明涉及癌性疾病調節抗體(CDMAB)的分離和生產，以及這些CDMAB 在治療和診斷方法中的應用，其任選地與一種或多種化療試劑聯合使用。本發 明還涉及利用本發明的CDMABs進行的結合分析(binding assay)。
背景技術：
單克隆抗體作為癌癥治療劑每一個患有癌癥的個體都是獨特的，由于個 體的差異，每個人所患的癌癥與其它癌癥都不一樣。盡管如此，現有療法都是 以同樣的方式來治療患有相同階段的同種癌癥的患者。這些患者中至少有30% 的一線治療是失敗的，從而增加了額外的療程以及治療失敗、病毒轉移和最終 死亡的可能性。治療的優選方法將是針對特定個體的個性化治療。目前唯一的 個性化治療方法是手術。化療和放療無法針對患者量身定做，而在大多數情況 下單靠手術不足以治愈癌癥。
隨著單克隆抗體的出現，開發個性化治療方法的可能性變得更加現實，因 為每一抗體能夠針對單一的抗原表位(epitope)。而且，也可以生產針對多個抗 原表位的集群(constellation)的抗體組合，該抗原表位集群唯一定義了特定個體 的腫瘤。
已經認識到癌細胞和正常細胞之間的顯著差別是癌細胞含有對轉化細胞來 說具有特異性的抗原，科技界長期認為單克隆抗體能夠設計成通過與這些癌 抗原特異結合而特異地靶向轉化細胞；因此產生了這樣的觀點單克隆抗體能 夠作為"魔術子彈(Magic Bullets)"來消滅癌細胞。然而，現在已經取得廣泛共 識，沒有單一的單克隆抗體可以在所有情況的癌癥中發揮作用，并且單克隆抗體可按類開發用于目標癌癥的治療。結果顯示，依照本發明公開的教導分離的 單克隆抗體以對患者有益的方式(如通過降低腫瘤負荷)來調節癌癥進程，這些
抗體在本文中稱為癌性疾病調節抗體(CDMAB)或"抗癌"抗體。
目前，癌癥患者的治療選擇很少。系統化的癌癥治療方法已經改善了全王求 的存活率和發病率。然而，對于特定個體而言，這些改善的統計數據與他們個
人狀況的改善并沒有必然的聯系。
因此，如果有一種方法學使得醫師能夠在同類腫瘤患者中，獨立于其他患 者治療每例腫瘤，將使得對每個患者可以用量身定做的獨特方法進行治療。理 論上，這種治療過程將提高治愈率，產生更好的結果，從而滿足人們長期感受 到的需要。
過去，多克隆抗體已經被應用于人類癌癥的治療，但只取得了有限的成功。 已經用人血漿來治療淋巴瘤和白血病，但是很少獲得持久的改善或應答。而且， 缺乏重現性，相比化療也沒有額外的優點。實體瘤(如乳癌、黑素瘤和腎細胞癌) 也已經采用人血液、猩猩血清、人血清和馬血清來治療，但是相應的結果是不 確定的和無效的。
有很多用單克隆抗體治療實體瘤的臨床試驗。在20世紀80年代，利用抗 特異抗原的抗體或基于組織選擇性對人乳腺癌進行了至少4次臨床試驗，在至 少47例患者中只產生了 1例應答者。直至1998年才有成功的臨床試驗，該試 驗聯合使用了人源化抗-Her2/neu抗體(Herceptin⑧)與順鉑。在這次實驗中，評 價了37例患者，其中約1/4具有部分應答率，另外1/4病情進展輕微或穩定。 應答者的中位*時間是8.4個月，而中位應^#續時間是5.3個月。
Herceptir^在1998年獲得批準，與Taxol⑧聯合用于一線治療。臨床研究結 果顯示，與單獨接受Taxof的組(3.0個月)相比，接受抗體治療以及Taxo^的患 者(6.9個月)的疾病進展的中位時間延長。且中位存活也有小幅提高；Herceptin 聯合Taxo產治療對比Taxo^單獨治療為22個月比18個月。此外，抗體加Taxol 聯合組相比Taxol⑧單獨組，完全響應者(8%比2%)和部分響應者(34%比15%)的 數量均有所上升。然而，Herceptii^聯合Taxo產治療相比Taxol⑧單獨治療，會導 致更高的心臟毒性(cardiotoxicity)發生率(分別為13%比1%)。并且，Herceptin 治療僅對過表達(通過免疫組織化學(IHC)分析測定的)人表皮生長因子受體 2(Her2/neu)(目前尚沒有已知的功能或生物學重要的配體的受體)的患者有效；約占患有轉移性乳癌患者的25%。因此，對于患有乳癌的患者，仍然存在很大 的未獲滿足的需求。甚至那些可得益于Herceptin⑧治療的患者也需要進行化療， 因此某種程度上也必須處理這種治療的副作用。
研究結腸直腸癌的臨床試驗涉及同時抗糖蛋白和糖脂類靶標的抗體。對腺 癌有一定特異性的抗體，如17-1A，已經在超過60例的患者中進行了 II期臨床 試驗，其中僅有l例患者有部分應答。在其他應用17-lA的試驗中，在使用附 加的環磷酰胺的實驗記錄中，52例受試患者中僅有1例完全響應和2例輕微應 答。至今，17-1A的III期臨床試驗尚未證明作為III期結腸癌的輔助治療時具 有提高的功效。首次批準用于顯像診斷的人源化的鼠單克隆抗體也沒有產生腫 瘤消退。
只是到最近，使用單克隆抗體進行的結腸直腸癌臨床研究才得到了一些正 面的結果。在2004年，ERBITUX⑧被批準用于患有表達EGFR的轉移性結腸直 腸癌患者的二線治療，這些患者用基于伊立替康的化療難以醫治。雙臂II期臨 床研究和單臂研究的結果顯示ERBITUX⑧聯合伊立替康分別具有23%和15%的 應答率，疾病進展的中位時間分別為4.1和6.5個月。來自同一雙臂II期臨床 研究和另一單臂研究的結果顯示，單獨用￡1131丁1;乂@進行治療分別產生11%和 9%的反應率，疾病進展的中位時間分別為1.5和4.2個月。
因此，ERBITUX②聯合伊立替康治療在瑞士和美國，以及ERBITUX㊣單獨 治療在美國都獲得批準，作為一線伊立替康治療失敗的結腸癌患者的二線治療。 因此，如Herceptir^—樣，￡116111^@治療在瑞士僅批準單克隆抗體與化療的聯 合治療。并且，ERBITLD^治療在瑞士和美國僅批準作為患者的二線治療。同 樣，在2004年，AVASTES^被批準與靜脈內基于5-氟尿嘧啶的化療聯合作為轉 移性結腸直腸癌的一線治療。III期臨床研究結果證明，用AVASTDv^聯合5-氟尿嘧啶治療的患者相比單獨用5-氟尿嘧啶治療的患者，中位平均存活時間延 長(20個月相比16個月)。然而，再一次，如同Herceptin⑧和ERBITUX⑧一樣， AVASTIN⑧治療僅批準單克隆抗體與化療的聯合治療。
對肺癌、腦癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌和胃癌的結果仍然很差。近期 最有希望的對非小細胞肺癌的結果來自II期臨床試驗，其中所述治療采用與細 胞殺傷藥阿霉素偶聯的單克隆抗體(SGN-15; dox-BR96,抗-Sialyl-LeX)聯合化 療劑TAXOTERE⑧。TAXOTERE⑧是唯一獲得FDA批準用于肺癌二線治療的化療劑。初步數據表明，相比單獨的TAXOTERE②總存活提高。在參與研究的 62例患者中，2/3接受SGN-15聯合TAXOTERE ,剩余的1/3單獨接受 TAXOTERE⑧。對于接受SGN-15聯合丁八乂0丁￡11￡@的患者，中位總存活為7.3 個月，相比之下，單獨接受TAXOTERE②的患者為5.9個月。總存活在1年和 18個月的，對接受SGN-15聯合丁八乂0丁￡虹@的患者分別為29%和18%，而對 單獨接受TAXOTERE⑧的患者分別為24%和8%。已策劃了進一步的臨床試驗。
在臨床使用前，使用單克隆抗體治療黑素瘤取得了有限的成功。這些抗體 中非常少的種類達到了臨床試驗，且至今沒有一種獲得批準，或者在III期臨床 試驗中證明具有有益的結果。
由于無法鑒定與疾病發病機理有關的30,000種已知基因的產物中的相關靶 標，治療疾病的新藥的開發受阻。在腫瘤學研究中，通常筒單地根據在腫瘤細 胞中過表達的事實來選擇潛在的藥物靶標。隨后，根據與眾多化合物的相互反 應來對由此鑒定的靶標進行篩選。在潛在的抗體治療中，這些候選化合物通常 源自根據Kohler和Milstein (1975， Nature, 256， 495-497， Kohler和Milstein)提出 的基本原則產生單克隆抗體的常規方法。從以抗原免疫的小鼠收集脾細胞(例如 全細胞、細胞碎片、純化的抗原)，并將其與永生化(immortalized)雜交瘤伴侶 (partner)融合。根據抗體的分泌來對所得雜交瘤進行篩選和選擇，該抗體與所述 靶標的結合最強烈。使用這些方法產生、并基于其親合性選擇了許多抗腫瘤細 胞的治療和it斷抗體，包括Herceptin⑧和RITUXIMAB。這種策略的缺點是兩 重的。首先，對治療或診斷抗體結合的適當靶標的選擇受到關于組織特異致癌
的限制。、其次，以最大親合性:合至受體的藥:分子通常有最大的可能性啟動 或抑制信號這一假設并不總是成立。
盡管在乳癌和結腸癌治療上取得了一些進展，有效抗體治療的鑒定和開發 對各種癌癥而言都不充分，不管是作為單一試劑還是聯合治療。
現有專利
美國專利US 5,750,102公開了一種用MHC基因轉染患者腫瘤細胞的方法, 該MHC基因可以從患者的組織或細胞中克隆。然后用這些經轉染的細胞對患 者進行接種。美國專利US4,861,581公開了一種方法，該方法包括如下步驟獲得單克 隆抗體，該抗體對哺乳動物的肺瘤細胞及正常細胞的內部細胞成分有特異性而
對外部成分沒有特異性；標記單克隆抗體；將標記的抗體與已經接受過腫瘤細 胞殺滅治療的哺乳動物的組織接觸；以及通過測定標記抗體與退化腫瘤細胞的 內部細胞成分的結合來確定治療的效果。在制備靶向人細胞內抗原的抗體的過 程中，專利權人認識到惡性細胞是這類抗原的一個方便來源。
美國專利US 5,171,665提供了一種新型抗體和該抗體的生產方法。具體地， 該專利講述了單克隆抗體的制備，所述單克隆抗體具有與人腫瘤(如結腸和肺) 相關蛋白抗原牢固結合的性質，而與正常細胞的結合程度要小得多。
美國專利US 5,484,596提供了一種癌癥的治療方法，該方法包括手術去 除人類癌癥患者的腫瘤組織；處理腫瘤組織以獲得腫瘤細胞；照射腫瘤細胞， 使其存活但沒有致瘤性質；以及用這些細胞為患者制備疫苗，該疫苗能夠抑制 原發性腫瘤的復發并同時抑制病灶轉移。該專利公開了與腫瘤細胞表面抗原具 有反應性的單克隆抗體的研制。如第4欄第45行等處說明，專利權人在開發對 人類腫瘤表現活性特異的免疫治療的單克隆抗體過程中，利用了自體腫瘤細胞。
美國專利US 5,693,763講述了人類癌細胞的糖蛋白抗原特性，其不依賴于 原發的上皮組織。
美國專利US 5,783,186涉及誘導Her2表達細胞凋亡的抗Her2抗體、產生 該抗體的雜交瘤細胞系，使用該抗體和含有所述抗體的藥物組合物治療癌癥的 方法。
美國專利US 5,849,876描述了用于生產單克隆抗體的新型雜交瘤細胞系， 所述抗體針對從腫瘤和非腫瘤組織來源中提純的粘蛋白抗原。
美國專利US 5,869,268涉及產生人J林巴細胞的方法，該'淋巴細胞產生對目 標抗原具有特異性的抗體，同時涉及生產單克隆抗體的方法，及由該方法生產 的單克隆抗體。該專利特別涉及用于診斷和治療癌癥的抗HD人單克隆抗體的 生產。
美國專利US 5,869,045涉及與人體癌細胞有反應性的抗體、抗體片段、抗 體偶聯物和單鏈免疫毒素。這些抗體功能的機理是雙重的，因為這些抗體一方 面與人體癌表面的細胞膜抗原具有反應性，另外這些抗體還能夠內在化入癌細 胞中，隨后結合，使它們特別適用于形成抗體-藥物和抗體-毒素偶聯物。在未修飾形式時，所述抗體在特定濃度下也表現出細胞毒性質。
美國專利US5,780，033公開了自體抗體用于腫瘤治療和預防。不過，該抗 體是從成年哺乳動物中得到的抗核自體抗體。這里，自體抗體是指在免疫系統 中發現的一種天然抗體。因為自體抗體來源于"成年哺乳動物"，因此就不要求 自體抗體真正來源于受治患者。此外，該專利公開了來自成年哺乳動物的天然
的單克隆抗細胞核自體抗體以及生成單克隆抗核自體抗體的雜交瘤細胞系。
發明概述
本發明采用了專利US 6,180,357中講述的生產患者特異性抗癌抗體的方 法，用以分離編碼調節癌性疾病的單克隆抗體的雜交瘤細胞系。可以為一種腫 瘤而專門制備這些抗體，從而使癌癥治療的個性化成為可能。在本申請公開的 內容中，具有細胞殺滅(細胞毒素的)或細胞生長抑制(細胞生長抑制的)性能的抗 癌抗體將在下文中被稱為細胞毒。這些抗體用于幫助癌癥的分期和診斷，也可 用于治療肺瘤轉移。這些抗體也可通過預防性治療的方式用于癌癥預防。與才艮 據常規藥物開發范例產生的抗體不同，以這種方式產生的抗體可靶向先前未顯 示為惡性組織的生長和/或存活所需的分子和路徑。并且，這些抗體的結合親合 性滿足了啟動細胞毒性作用事件的要求，而這種細胞毒性作用事件可能不順從 更強的親合性相互作用。并且，將標準化療形式(例如放射性核)與本發明的 CDMAB結合從而使所述的化療作用集中，也屬于本發明的范圍。所述CDMAB 也可與毒素、細胞毒性部分(moiety)、諸如生物素偶聯酶的酶類、或者造血細胞 偶聯，從而形成抗體偶聯物。
個性化抗癌治療的前景將給患者的治療方式帶來變化。 一種可能的臨床情 境是在腫瘤出現時就取樣并入庫。根據該樣品，能夠通過預存在的癌性疾病調 節抗體庫對該腫瘤進行分型。對腫瘤患者進行常規分期，而所提供的抗體可用于患者的進一步分期。可以用現有的抗體立即對患者進行治療，腫瘤特異的抗 體庫可以使用本發明公開的方法來產生，也可以使用噬菌體展示庫結合本發明 公開的篩選方法來產生。生成的所有抗體將被添加入抗癌抗體庫，因為可能其 它腫瘤具有某些與被治療的肺瘤相同的抗原表位。根據本方法生產的抗體可以 用于治療許多的患者的癌癥，這些患者患有與這些抗體結合的癌癥。
除了抗癌抗體外，患者可以選擇接受當前推薦的治療方法作為多重療法的一部分。本發明方法分離的抗體對非癌細胞相對無毒性的事實使得高劑量抗體 可單獨使用，或與常規療法的結合使用。高治療指數也使得可在短期內再次治 療，從而降低出現治療耐受細胞的可能性。
如果患者的初期治療產生耐藥性或發生了轉移，則可以重復腫瘤特異抗體 生成過程來進行再次治療。而且，抗癌抗體可以和取自患者的紅細胞偶聯，并 再次注入來治療病灶轉移。目前對轉移癌癥的有效治療很少，轉移通常預示著 導致死亡的糟糕結果。不過，轉移的腫瘤通常血管豐富，通過紅細胞進行的抗 癌抗體輸送具有將抗體聚集在腫瘤位置的作用。甚至在轉移前，大多數癌細胞 也依靠宿主血液供應來存活，而與紅細胞結合的抗癌抗體同樣對原位腫瘤也有 效。可選擇地，抗體可以和其它造血細胞偶聯，如淋巴細胞、巨嗟細胞、單核 細胞、自然殺傷細胞等等。
存在五類抗體，每類抗體都具有由其重鏈賦予的功能。通常認為棵露抗體
(naked antibodies)的癌細胞殺傷作用是由抗體依賴性細胞毒性作用、或補體依賴 性細胞毒性作用介導的。例如，鼠lgM和IgG2a抗體能夠通過與補體系統中的 C-l組分結合來激活人補體，從而激活補體活化的典型途徑，這能導致腫瘤細 胞裂解。對于人抗體，最有效的補體激活抗體通常是IgM和IgGl。IgG2a和IgG3 同種型的鼠抗體可有效俘獲具有Fc受體的細胞毒性細胞，其導致單核細胞、巨 噬細胞、粒細胞和某些淋巴細胞的細胞殺傷作用。IgGl和lgG3同種型的人抗 體都介導ADCC。
抗體介導的癌殺傷作用的另 一種可能的機制可以是具有催化功能的抗體 (即所謂的催化抗體)的使用，該抗體能催化細胞膜及與其結合的糖蛋白或糖脂 中的化學鍵的水解。
還有其它三種抗體介導癌細胞殺傷的機理。第一種是利用抗體作為疫苗來 誘導機體對腫瘤細胞表面的推定抗原產生免疫反應。第二種是利用抗體來耙向 生長受體并干擾其功能、或下調該受體以使其功能有效喪失。第三種是這類抗 體對細胞表面部分的直接連接(ligation)的作用，其可導致直接細胞死亡，例如 諸如TRAIL Rl或TRAIL R2的死亡受體、或諸如aVj83的整合素分子等等的連 接。
腫瘤藥物的臨床應用基于該藥物在可接受的風險評估之下對患者的益處。 在癌癥的治療中，存活率通常是所尋求的最重要的益處，但是除了延長壽命外，還有許多其它7>認的益處。在治療對存活沒有負面影響的情況下，這些其它益 處包括癥狀的減輕、防止負面效果、延長復發周期或無瘤存活時間、和延長疾
病進程。這些標準被普遍接受，并且諸如美國食品藥品管理局(F.D.A.)的管理枳i 構批準了能產生這些益處的藥物(Hirschfeld等.Critical Reviews in Oncology/Hematology 42:137-143 2002)。除了這些標準外，人們充分i人識到還 有其他指標可以預示這些類型的益處。部分地，美國FDA批準的快速審批程序
確認了有替代者可能預測患者受到的益處。到2003年末，有16種藥物被批準 進入這個程序，其中四個已經進入全面審批，即后續研究驗證了替代指標所預 示的直接的患者受益。確定實體瘤藥物療效的一個重要指標是通過測試治療響 應來評價腫瘤負荷(Therasse等.Journal of the National Cancer Institute 92(3):205-216 2000)。這種評價的臨床標準(RECIST標準)已經由實體瘤療效評 價標準工作組(Response Evaluation Criteria in Solid Tumors Working Group)頒 布，該工作組由國際癌癥專家組成。和參照RECIST標準的客^見反應所顯示的 一樣，與適當的對照組相比，對腫瘤負荷有確切效果的藥物易于最終產生直接 的患者受益。在臨床前條件下，腫瘤負荷通常更容易被評估和記錄。既然臨床 前研究可以轉化為臨床設置，在臨床前模型中產生存活延長的藥物具有最大的、 預期臨床效用。與對臨床治療產生積極的反應類似，在臨床前條件下降低肺瘤 負荷的藥物也可能對疾病具有顯著的直接影響。盡管延長存活期是癌癥藥物治 療所追求的最重要的臨床結果，但是還有其他益處具有臨床效用，顯然腫瘤負 荷的降低(其可伴有疾病進展的延遲、延長的存活期或兩者并存)也能夠導致直 才姿的益處、并具有臨床歲丈果(Eckhardt等.Developmental Therapeutics: Successes and Failures of Clinical Trial Designs of Targeted Compounds(發展的治療學覃巴4匕 合物的臨床試驗設計的成功與失敗)；ASCO Educational Book, 39th Annual Meeting, 2003, 209-219頁)。
本發明描述了根據在細胞毒性分析及人癌癥動物模型中的作用而鑒定得到 的AR62A61.8的開發和應用。本發明描述了特異結合靶標分子上的一個抗原表 位或多個抗原表位的試劑，且該試劑其作為棵抗體還對惡性腫瘤細胞而非正常 細胞具有體外細胞毒性作用，并且作為棵抗體還直接介導腫瘤生長的抑制。更 進一步描述了諸如這種抗體的抗癌抗體的用途，所述用途為靶向表達同源抗原 標記物的腫瘤以實現對腫瘤生長的抑制，及癌癥治療的其它陽性指標。總而言之，本發明講述了 AR62A61.8抗原作為治療劑的靶標的用途，所述 治療劑給藥后能降低哺乳動物中的表達該抗原的癌癥的腫瘤負荷。本發明還講 述了 CDMAB (AR62A61.8)、其衍生物、其抗原結合片段、及其細胞毒性作用 誘導配體的用途，所述用途為靶向其抗原以P爭低哺乳動物中的表達所述抗原的 癌癥的腫瘤負荷。此外，本發明還講述了癌細胞中的AR62A61.8抗原檢測的用 途，其可用于患有表達該抗原的腫瘤的哺乳動物的診斷、治療預測和預后。
因此，本發明的目的是利用一種方法來產生抗來源于特定個體的癌細胞、 或者一種或多種特定癌細胞系的癌性疾病調節抗體(CDMAB)，該CDMAB對癌 細胞有細胞毒性作用，同時對非癌細胞相對無毒，目的是分離雜交瘤細胞系、 及所述雜交瘤細胞系所編碼的相應的分離的單克隆抗體及其抗原結合片段。
本發明的另一個目的是涉及癌性疾病調節抗體、其配體及抗原結合片段。
本發明的另一個目的是產生癌性疾病調節抗體，該抗體的細胞毒性作用通 過抗體依賴的細胞毒性作用來介導。
本發明的另一個目的是產生癌性疾病調節抗體，該抗體的細胞毒性作用通 過補體依賴的細胞毒性作用來介導。
本發明的另一個目的是產生癌性疾病調節抗體，該抗體的細胞毒性作用是 其催化細胞化學鍵水解的能力的作用。
本發明的另一個目的是產生癌性疾病調節抗體，該抗體可用于癌癥i貪斷、 預后和監測的結合試驗。
通過以下以示例和舉例的方式、對本發明某些實施方案的描述，本發明的 其它目的和優點將變得顯而易見。
附圖簡JH兌明


圖1比較了雜交瘤上清對細胞系MDA-MB-231、OVCAR-3、SW1116、Lovo 和CCD-27sk的細胞毒性作用百分比和結合水平。
圖2顯示了 AR62A61.8和抗-EGFR對照對癌細胞系和正常細胞系的結合。 數據制成表格，以高出同種型對照的倍增顯示平均熒光強度。
圖3包括了針對幾種癌細胞和非癌細胞系的AR62A335.9和抗-EGFR抗體 的的代表性FACS直方圖。
圖4說明了 AR62A61.8在預防性Lovo結腸癌模型中對腫瘤生長的作用。垂直線(vertical line)表示抗體給藥時間。數據點表示平均值+A標準誤。
圖5說明了 AR62A61.8在預防性Lovo結腸癌模型中對體重的作用。數據
點表示平均值+A標準誤。
圖6說明了 AR62A61.8在預防性DLD-1結腸癌模型中對肺瘤生長的作用。
垂直線(vertical line)表示抗體給藥時間。數據點表示平均值+/-標準誤。
圖7說明了 AR62A61.8在預防性DLD-1結腸癌模型中對體重的作用。數
據點表示平均值+/-標準誤。
發明的詳細說明
一般而言，下列詞匯或短語出現在發明內容、發明說明、實施例和權利要 求中時具有所給的定義。
術語"抗體"使用其最寬泛的含義，并特別包括例如單種單克隆抗體(包括 激動劑、拮抗劑和中和抗體、去免疫的、鼠源的、嵌合的或人源化的抗體)、具 有多抗原表位特異性的抗體組合物、單鏈抗體、抗體的免疫結合物和片段(見下)。
本文使用的術語"單克隆抗體"指從基本同質的抗體群(即構成該群的抗體 個體除少量可能自然出現的變異外完全相同)中得到的抗體。單克隆抗體是高特 異性的，靶向單一的抗原位點。并且，相比包含靶向不同決定簇(抗原表位)的 多種不同抗體的多克隆抗體制劑，每種單克隆抗體靶向抗原上的單一決定簇。 除特異性外，單克隆抗體的優點還在于其合成可以不受其他抗體的污染。修飾 語"單克隆的"指所述抗體得自基本同質的抗體群的特性，而不應理解為需要 采用任何特定的方法來生產該抗體。例如，本發明使用的單克隆抗體可通過首 次由Kohler等人公開的雜交瘤(鼠或人)方法(Nature， 256:495 (1975))來制備，或 者通過重組DNA方法(參見，例如美國專利第4,816,567號)來制備。還可使用 例如Clackson等人(Nature， 352:624-628 (1991))和Marks等人(J. Mol. Biol, 222:581-597 (1991))描述的技術，從噬菌體抗體庫中分離所述"單克隆抗體"。
"抗體片段"包括完整抗體的一部分，優選包括所述抗體的抗原結合區或 可變區。抗體片段的例子包括少于全長抗體，Fab、 Fab'、 F(ab')2和Fv片段； 雙功能抗體(diabodies);線性抗體；單鏈抗體分子；單鏈抗體，單域抗體分子， 融合蛋白、重組蛋白和由抗體片段形成的多特異抗體。"完整"抗體是包括抗原結合可變區，以及輕鏈恒定區(QJ和重鏈恒定區 CH1, Ch2和Ch3的抗體。所述恒定區可以是天然序列恒定區(如人天然序列恒 定區)或其氨基酸序列變體。優選地，所述完整抗體具有一種或多種效應器 (effector)功能。
根據其重鏈的恒定區的氨基酸序列，完整抗體可分為不同的"類型"。有五 種主要的完整抗體類型IgA、 IgD、 IgE、 IgG和IgM,其中幾種可進一步劃分 為"亞類"(同種型)，例如IgGl、 IgG2、 IgG3、 IgG4、 IgA和IgA2。不同抗體 類型對應的重鏈恒定區分別稱為a、 S、 e、 7和/x。不同類型的免疫球蛋白的亞 單元結構和三維構型是公知的。
抗體"效應器功能"指由抗體的Fc區(天然序列Fc區或氨基酸序列變體 Fc區)導致的生物學活動。抗體效應器功能的例子包括Clq結合；補體依賴的細 胞毒性作用；Fc受體結合；抗體依賴、細胞介導的細胞毒性作用(ADCC);吞 噬作用；細胞表面受體的下調(例如B細胞受體；BCR)等等。
"抗體依賴的細胞介導的細胞毒性作用"及"ADCC"指一種細胞介導的反 應，在該反應中表達Fc受體(FcRs)的非特異性細胞毒性細胞(例如天然殺傷(NK) 細胞、嗜中性粒細胞和巨噬細胞)識別靶細胞上結合的抗體，并進而導致靶細胞 的溶解。介導ADCC的主要細胞，NK細胞僅表達Fc^m，而單核細胞表達 FcyRI， FcyRII和Fcr)RIII。 Ravetch和Kinet， v4wwi/. i ev. /mmwwo/ 9:457-92 (1991 ) 第464頁表3種總結了造血細胞的FcR表達。為了評估所關注的分子的ADCC 活性，可進行體外ADCC分析，例如美國專利5,500,362或5,821,337中所描述 的那樣。用于這類分析的效應器細胞包括外周血單個核細胞(PBMC)和天然殺傷 (NK)細胞。可選擇或者附加地，可在體內評估所關注分子的ADCC活性，例如 在諸如Clynes等PNAS (USA) 95:652-656 (1998)7>開的動物模型中。
"效應器細胞"是表達一種或多種FcRs,并執行效應器功能的白細胞。優 選地，所述細胞至少表達FcryRni，并執行ADCC效應器功能。介導ADCC的 人白細胞包括外周血單個核細胞(PBMC)、天然殺傷(NK)細胞、單核細胞、細 胞毒性T細胞和嗜重型粒細胞；優選PBMCs和NK細胞。如本文所述，可從 其天然來源例如從血液或PBMCs分離效應器細胞。
術語"Fc受體"或"FcR"用于描述結合至抗體的Fe區的受體。優選的 FcR是天然序列人FcR。此外，優選的FcR是結合IgG抗體(伽馬受體)，并包括FcryRI、 FcryRII和Fc7Rin亞類受體的受體，包括這些受體的等位變體(allelic variant)和可變剪切形式。Fc7Ri1受體包括Fc7RIIA("活化受體")和Fc^UIB ("抑 制受體")，這兩種形式具有類似的M酸序列，區別主要在其細胞質區。活化 受體Fc7RIIA在其細胞質區包含基于免疫受體酪氨酸的活化基序(ITAM)。抑制 受體F(ryRIIB在其細胞質區包含基于免疫受體酪氨酸的抑制基序(ITIM)(參見 Daeron， Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997)中的綜述M.)。在Ravetch和Kinet， Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991); Capel等，Immimomethods 4:25-34 (1994); 和de Haas等，J. Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995)中對FcRs進行了綜述。其它 FcRs，包括將在以后鑒定出的那些，都包括在本文的術語"FcR"中。該術語 還包括新生受體，FcRn，其參與了母體IgGs到胎兒的轉移(Guyer等，J. Immunol. 1 17:587 (1976)和Kim等，Eur. J. Immunol. 24:2429 (1994))。
"補體依賴的細胞毒性"或"CDC"指分子在補體存在下使靶標溶解的能 力。補體體系(c 1 q)的第 一組分對與同源抗原復合的分子(例如抗體)的結合啟動 了補體活化途徑。為了評估補體活化，可進行CDC分析，例如Gazzano-Santoro 等，J. Immunol. Methods 202:163 (1996)中描述的那樣。
術語"可變的"指抗體之間可變區某些部分的序列具有廣泛差別，且用于 每種特定抗體對其特定抗原的結合和特異性的事實。然而，變異并不是平均分 布在抗體的整個可變區中。其集中在輕鏈和重鏈可變區中的三個稱為高變區的 區段內。可變區中更高度保守的部分稱為框架區(FRs)。天然重鏈和輕鏈的可變 區均包括通過三個高變區連接的四個FRs(主要采用/3折疊構型)，形成環形連 接，并且在某些情況下形成〉折疊結構的一部分。每一鏈的高變區通過FRs緊 密連接在一起，并且，與其它鏈的高變區一起，形成抗體的抗原結合位點(參見 Kabat等,5^wewcey o/0/ T/nmi/wo/og/ca/ /"^"es《義;^夢^標蛋^的y^ /力，5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. pp 15-17; 48-53 (1991))。恒定區不直接參與抗體對抗原的結合，但顯示出各種效應 器功能，例如抗體在抗體依賴的細胞毒性(ADCC)中的參與。
本文使用的術語"高變區"指抗體的負責抗原結合的氨基酸殘基。所述高 變區通常包括來自"互補決定區"或"CDR"的氨基酸殘基(例如輕鏈可變區的 殘基24-34 (LI), 50-56 (L2)和89-97 (L3)，以及重鏈可變區的殘基31-35 (HI), 50-65 (H2)和95-102 (H3); Kabat等,0/ iV她z7w o/ 7m聽wo/og/ca//"&m^(0^瘦夢《^^蛋^的y^/力,第五版.Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda， Md. pp 15-17; 48-53 (1991))和/或來自"高變環(hypervariable loop)"的那些殘基(例如輕鏈可變區的殘基2632 (LI), 50-52 (L2)和91 -96 (L3)， 以及重鏈可變區的殘基26-32 (HI), 53-55 (H2)和96-101 (H3); Chothia和Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987))。
"框架區"或"FR"殘基是除本文定義的高變區殘基之外的那些可變區殘 基。抗體的木瓜蛋白酶消化產生了兩個相同的抗原結合片段(稱為"Fab"片段) 和殘余的"Fc"片段，其中每一 "Fab"片段都有單一的抗原結合位點，而Fc" 片段的名稱反映了其易于結晶的能力。胃蛋白酶處理產生了 F(ab')2片段，其具 有兩個抗原結合位點，并且仍然能夠交聯抗原。
"Fv"是包含完整的抗原識別和抗原結合位點的最小的抗體片革史。該區由以 緊密、非共價結合的一條重鏈與一條輕鏈可變區的二聚體構成。每一可變區的 三個高變區在該構型中相互作用限定了 VH-VL 二聚體表面上的抗原結合位點。 這六個高變區共同賦予了所述抗體抗原結合特異性。然而，即使單個可變區(或 僅包含對抗原具有特異性的三個高變區的半個Fv)同樣具有識別和結合抗原的 能力，盡管親合性比整個結合位點要低。所述Fab片段還包含輕鏈的恒定區和 重鏈的第一恒定區(CH1)。 Fab'片段與Fab片段的區別在于在重鏈CHI區的羧 基末端增加了幾個殘基，包括來自抗體鉸鏈區的一個或多個半胱氨酸。本文將 恒定區的半胱氨酸殘基上帶有至少一個自由巰基的Fab'稱為Fab'-SH。 F(ab')2 抗體片段最初是由其間具有鉸鏈半胱氨酸的Fab'片段對產生的。抗體片段的其 它化學偶合也是公知的。
根據其恒定區的M酸序列，任何脊推動物抗體的"輕鏈"都可以分入兩
種明顯不同類型(稱為kappa(k)和lambda(X))中的一類。
"單鏈Fv"或"scFv"抗體片段包含抗體的Vh和Vl區，其中這些區存在 于單一多肽鏈上。優選地，Fv多肽還包含位于所述VH和Vt區之間的多肽連接 子(linker)，其使得該scFv能形成所需的抗原結合結構。scFv的綜述參見 Pltickthun in 7Tze尸/^maco/ogy o/她"oc/o"a/」""fto^sf卓義發我沐秀理釣, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer- Verlag， New York, pp. 269- 315 (1994)。
術語"雙功能抗體(Diabodies)"指具有兩個抗原結合位點的小抗體片段，該片段在同一多肽鏈中包含與輕鏈可變區(VO相連的重鏈可變區(VH) (VH-VL)。 通過使用使同一鏈上的兩個區之間無法配對的短連接子，這些區被迫與另一條 鏈的互補區配對，并產生兩個結合位點。在例如EP 404,097、 WO 93/11161和 Hollinger等，iV^/. ^c^/. Sd t/5L4， 90:6444-6448 (1993)中對雙功能抗體進行 了更充分的描述。
"分離的"抗體指已經從其天然環境成分中鑒定并分離和/或回收的抗體。
其天然環境中的污染組分是會干擾該抗體的診斷或治療用途的物質，可包括酶、 激素和其它蛋白質或非蛋白質溶解物。分離的抗體包括重組細胞內的原位抗體，
因為缺乏所述抗體的天然環境中的至少一種組分。然而，通常通過至少一個純 化步驟來制備分離的抗體。
"結合"目標抗原的抗體是能夠以足夠的親合性結合該抗原的抗體，從而 能夠用做靶向表達該抗原的細胞的治療或診斷試劑。當抗體是結合抗原部分的 抗體時，它通常優先結合該抗原部分，而不是其它受體，，并且不包括與諸如非 特異型Fc接觸的偶然結合或與其它抗原共有的翻譯后修飾物的結合，并且可以 是與其它蛋白沒有明顯的交叉反應的抗體。檢測結合目標抗原的抗體的方法是 本領域公知的，包括但不限于諸如FACS、細胞ELISA和Western印跡的分析。
本文中使用的表達"細胞"、"細胞系，，和"細胞培養物，，可相互替換,并 且這些名稱均包括子代(progeny)。并且，可以理解，由于人為或無意的突變， 并不是所有子代在DNA成分上都精確地相同。在原始轉化細胞內，篩選的具 有相同的功能或生物活性的變異子代也包括在內。從使用這些不同名稱的描述 中可以明顯看出這一點。
"治療，，指治療性的治療、以及預防或防止性的方法，目的是防止或減緩(減 輕)目標病理疾病狀態或病癥。需要治療的對象包括已經患有該病癥的患者、以 及傾向于患上該病癥的對象，或者需要預防該病癥的對象。因此，本文中待治 療的哺乳動物可以是"^斷為患有該病癥，或者傾向于或易于感染該病癥。
術語"腫瘤"和"癌癥"指或描述哺乳動物的一種生理學疾病狀態，其特 征通常在于不受調控的細胞生長或死亡。癌癥的例子包括，但不限于，癌瘤、 淋巴瘤、胚細胞癌、肉瘤和白血病或惡性淋巴腫瘤。這類癌癥的更具體的例子 包括鱗狀細胞癌(例如鱗狀上皮細胞癌)，肺癌包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌、 肺腺癌和肺鱗癌，腹膜癌、肝細胞癌、胃癌包括胃腸癌、胰腺癌、惡性膠質瘤、宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝細胞癌(hepatoma)、乳癌、結腸癌、直腸 癌、結腸直腸癌、子宮內膜或子宮癌、唾液腺癌、腎或腎臟癌癥、前列腺癌、 女陰癌、曱狀腺癌、肝臟癌癥、肛門癌癥、陰莖癌癥、以及頭和頸部癌癥。
"化療劑，，是用于癌癥治療的化學化合物。化療劑的例子包括諸如噻替派 和環磷酰胺(CYTOXANW)的烷基化試劑類；諸如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡 的烷基磺酸酯類；諸如千替派(benzodopa)、卡巴醌、美妥替哌(meturedopa)和 烏瑞替派(uredopa)的氮丙啶類；包括六曱蜜胺、三亞胺溱、三亞乙基磷酰胺、 三亞乙基硫代磷酰胺和三曱基奧羅蜜胺(trimethylolomelamine)的氮丙啶類 (ethylenimines)和甲基蜜胺類(methylamelamine);諸如瘤可寧、萘氮芥、環磷酰 胺、磷雌氮芥、異磷酰胺、雙氯乙基曱胺、雙氯乙基曱胺氧化物鹽酸鹽、美法 侖、新氮芥、苯乙酸氮芥膽甾醇酯、潑尼莫司汀、氯乙環磷酰胺、尿嘧啶氮芥 的氮芥類；諸如卡氮芥、氯脲菌素、佛替姆丁、羅莫司丁、尼莫司丁、雷莫司 汀的硝脲類(nitrosureas);諸如阿克拉霉素類、放射菌素、安曲霉素、偶氮霉素 A、博來霉素類、放線菌素C、刺孢霉素、洋紅霉素、碳霉素(camomycin)、嗜 癌霉素、色霉素類、放線菌素D、柔紅霉素、地托比星、6-重氮基-5-羰基丄-己氨酸、多柔比星、表柔比星、依索比星、伊達比星、麻西羅霉素、密吐霉素 類、霉酚酸、諾加霉素、橄欖霉素類、派來霉素、泊非霉素、嘌羅霉素、三鐵 阿霉素、羅多比星、鏈黑霉素、鏈佐星、殺結核菌素、烏苯美司、新制癌菌素、 佐柔比星的抗生素類；諸如曱氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)的抗代謝劑類；諸如 二曱葉酸、曱氨蝶呤、蝶羅呤、曲美沙特的葉酸類似物類；諸如氟達拉濱、6-巰噪呤、硫咪噤呤、碌u鳥噪呤的噪呤類似物類；諸如安西他濱、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二脫氧尿核甙、去氧氟尿苷、依諾他濱、氟脲嘧 啶脫氧核苷、5-FU的嘧啶類似物類；諸如卡普睪酮、屈他雄酮、環辟ui^醇、環 戊縮環碌u^烷、睪內酯的雄性激素類；諸如氨魯米特、米托坦、曲洛司坦的抗 腎上&泉類；諸如亞葉酸的葉酸補充劑；醋葡醛內酯；醛磷酰胺糖苷；氛基乙酰 丙酸；安吖咬；bestrabucil;比生群；依達曲沙；地磷酰胺；^火水仙胺；地吖醌； elformithine;醋酸羥嗶^唑；環氧甘醚；硝酸鎵；羥基脲；蘑菇多糖；氯尼達 明；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌達醇；二胺硝吖啶；噴司他丁；蛋氨氮芥；吡 柔比星；鬼臼酸；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；PSK ;雷佐生；西佐喃；鍺螺胺； 細交鏈孢菌酮酸；三亞胺醌；2,2',2"-三氯三乙胺；烏拉坦；長春地辛；達卡巴嗪；甘露莫司汀；二溴甘露醇；二溴衛矛醇；派泊溴烷；gacytosine;阿糖胞苷 ("Ara-C");環磷酰胺；塞替派；諸如紫杉醇(TAXOL氣Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N丄)和多西紫杉醇(TAXOTERE⑧，Aventis， Rhone-Poulenc Rorer，Antony,France)的紫杉烷類；苯丁酸氮芥；吉西他濱；6-硫鳥嘌呤；巰嘌 呤；甲氨蝶呤；諸如順鉑和卡鉑的鉑類似物類；長春堿；柏；依托泊苷(VP-16); 異環磷酰胺；絲裂霉素C;米托蒽醌；長春新堿；長春瑞濱；諾維本；諾消靈； 替尼泊苷；柔紅霉素；氨基蝶呤；希羅達；伊班膦酸鹽；CPT-11;拓樸異構酶 抑制劑RFS2000; 二氟曱基鳥氨酸(DMFO);維A酸；esperamicins;卡培他濱； 和上述試劑中的任意試劑的藥物可接受的鹽類、酸類或衍生物。該定義中還包 括抗激素劑，其調節或抑制激素對腫瘤的作用，例如包括如他莫昔芬、雷洛昔 芬、抑制4(5)-咪唑的芳香酶、4-羥泰米芬、曲沃昔芬、、雷諾昔芬(keoxifene)、 LY117018和托瑞米芬(Fareston)的抗雌激素；和諸如氟他胺、尼魯米特、比卡 魯胺、醋酸亮丙瑞林和戈舍瑞林的抗雄激素，以及上述試劑中任意試劑的藥物 可才妻受的鹽類、酸類或書f生物。
作為治療目標的"哺乳動物，，指歸類為哺乳動物的任何動物，包括人類、 鼠類、SCID鼠或^^果鼠或品系小鼠、家畜和農場動物，以及動物園、運動或寵 物型動物，例如羊、狗、馬、貓、牛等等。優選地，本文所述的哺乳動物是人。 "寡核苷酸"是短長度的單鏈或雙鏈多聚脫氧核苷酸，其通過公知方法(例 如磷酸三酯、亞磷酸酯或亞磷酰胺化學)使用諸如1988年5月4日公開的EP 266,032中描述的固相技術，或者通過Froehler等，M/d. Jc/& i as.， 14:5399- 5407， 1986描述的脫氧核苷酸H-膦酸酯中間體化學合成。然后在聚丙烯酰胺凝膠上 對其進行純化。
"嵌合"抗體是免疫球蛋白，其中重鏈和/或輕鏈的一部分與衍生自特定物 種或屬于特定抗體類型或亞類的抗體的對應序列相同或同源，而鏈上的其余部 分與衍生自其它物種或屬于其它抗體類型或亞類的抗體以及這類抗體的片段 (只要其顯示所需的生物學活性)的對應序列相同或同源(美國專利4,816,567和 Morrison等，iV^/."&4， 81 :6851-6855 (1984))。
非人(如鼠)抗體的"人源化"形式是特定的嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白 鏈或其片段(例如抗體的Fv、 Fab、 Fab，、 F(ab)2或其它抗原結合序列)，其包含 衍生自非人免疫球蛋白的最小序列。很大程度上，人源化的抗體是人免疫球蛋白(受者抗體(recipient antibody)),其中來自受者抗體的互補決定區(CDRs)的殘 基被來自非人物種(如小鼠、大鼠或兔子)的(供者抗體)、具有所需特異性、親合 性和能力的CDRs的殘基所替代。在某些例子中，人免疫球蛋白的Fv框架區(FR) 殘基被相應的非人FR殘基所替代。并且，人源化的抗體可包含在受者抗體及 引入的CDR或FR序列中均未發現的殘基。制備這些修飾體來進一步改善和優 化抗體性能。通常，人源化的抗體包含至少一個、通常兩個可變區的基本全部 殘基，其中全部或基本全部的CDR區對應于非人免疫球蛋白的殘基，而全部 或基本全部的FR殘基是人免疫球蛋白一致序列的殘基。優選地，人源化的抗 體還包含免疫球蛋白(通常是人免疫球蛋白)的恒定區(Fc)的至少 一部分。
"去免疫的"抗體是對給定物種不產生免疫原性的或免疫原性較低的免疫 球蛋白。可通過改變抗體的結構來實現去免疫化。可采用任何本領域所屬技術 人員公知的去免疫技術。例如，2000年6月15日公開的WO 00/34317中描述 了 一種適用于對抗體進行去免疫的技術。
誘導"細胞凋亡"的抗體是通過任何方式誘導程序性細胞死亡的抗體，這 些方式例如，但不限于，膜聯蛋白V結合、半胱天冬酶活性、DNA碎裂、細 胞收縮、內質網膨脹、細胞碎裂和/或膜嚢(稱為凋落小體)形成。
在整個說明書中，可相互替換地用內部名稱AR62A61.8或保藏名稱IDAC 170505-04來稱呼雜交瘤細胞系，以及由其產生的分離的單克隆抗體。
本文使用的"抗體-配體，，包括對靶抗原的至少一個抗原表位顯示出結合特 異性的部分，其可以是完整的抗體分子、抗體片段、及至少具有一個抗原結合 區或其部分(即抗體分子的可變區)的任何分子，例如特異地識別和結合抗原 (IDAC 170505-04抗原)的至少一個抗原表位的Fv分子、Fab分子、Fab'分子、 F(ab')2分子、雙特異性抗體、融合蛋白、或任一遺傳工程分子，其中所述抗原 被稱為IDAC 170505-04的雜交瘤細胞系產生的分離的單克隆抗體結合。
本文使用的"癌性疾病調節抗體"(CDMAB)指以有利于患者的方式，例如 通過降低胂瘤負荷或延長患有肺瘤的個體的存活，來調節癌癥進程的單克隆抗 體及其抗體配體。
本文使用的"抗體結合區"指識別靶抗原的分子部分。
本文使用的"竟爭性抑制，，指使用常規相互(reciprocal)抗體竟爭分析 (Belanger L 等，C7/m'ca C7nVm'ca ^cto 48: 15-18 (1973), Enzyme linkedimmunoassay for alpha fetoprotein by competitive and sandwich procedures(竟爭和 夾心法的甲胎蛋白的酶聯免疫測定).Clinica Chimica Acta 48, 15)能夠識別并結 合決定基，其中雜交瘤細胞系IDAC 170505-04產生的單克隆抗體(IDAC 170505-04抗體)耙向該決定基。
本文使用的"靶抗原"是IDAC 170505-04抗原或其部分。 本文使用的"免疫偶聯物"指化學或生物學方式連接到細胞毒素、放射性 試劑、酶、毒素、抗腫瘤藥或治療劑的任何分子或CDMAB,如抗體。所述抗 體或CDMAB可在該分子上的任何位置連接至細胞毒素、放射性試劑、抗腫瘤 藥或治療劑，只要其能結合它的靶標。免疫偶聯物的例子包括抗體-毒素化學結 合物和抗體-毒素融合蛋白。
本文所用的"融合蛋白，，指抗原結合區連接至生物活性分子(如毒素、酶或 蛋白藥)的任何嵌合蛋白。
為了更完全地理解本文所述的發明，進行了以下描述。
本發明提供了特異識別和結合IDAC 170505-04抗原的CDMAB(即IDAC 170505-04 CDMAB)。
以保藏號170505-04保藏在IDAC的雜交瘤產生的分離的單克隆抗體的 CDMAB可以是任何形式，只要其具有抗原結合區，該抗原結合區能竟爭性地 抑制雜交瘤IDAC 170505-04產生的分離的單克隆抗體對其靶抗原的免疫特異 性結合。因此，任何具有與IDAC 170505-04抗體相同的結合特異性的重組蛋 白(例如抗體與諸如淋巴因子或腫瘤生長抑制因子的另 一蛋白結合的融合蛋白) 都包括在本發明的范圍內。
在本發明一實施方案中，所述CDMAB是IDAC 170505-04抗體。
在其它實施方案中，所述CDMAB是抗原結合片段，其可以是具有IDAC 170505-04抗體的抗原結合區的Fv分子(例如單鏈Fv分子)、Fab分子、Fab'分 子、F(ab')2分子、融合蛋白、雙特異抗體、異種抗體或任何重組分子。本發明 的CDMAB耙向IDAC 170505-04單克隆抗體靶向的抗原表位。
可以對本發明的CDMAB進行修飾(即通過分子內的氨基酸修飾)以產生衍 生分子。也可采用化學〗務飾。
衍生分子會保留所述多肽的功能性，即具有這類取代的分子仍然能使所述 多肽結合IDAC 170505-04抗原或其部分。這些^J^酸取代包括，但不必限于，本領域稱為"保守，，的氨基酸細胞毒性作用取代。
例如，作為蛋白質化學中公知的原則，在蛋白中頻繁進行稱為"保守氨基 酸取代"的氨基酸取代不會改變該蛋白的構造或功能。
這類改變包括用異亮氨酸(I)、纈氨酸(V)和亮氨酸(L)中的任一種取代這些 疏水氨基酸的任何其它一種；天門冬氨酸(D)取代谷氨酸(E)，反之亦然；谷氨 酰胺(Q)取代天冬酰胺(N)，反之亦然；以及絲氨酸(S)取代蘇氨酸(T)，反之亦然。 根據特定氨基酸的環境、及其在蛋白的三維結構中的作用，其它取代也可被視 為保守的。例如甘氨酸(G)和丙胺酸常常是互換的，丙胺酸和纈氨酸(V)也是。 相對疏水的蛋氨酸(M)常常可與亮氨酸和異亮氨酸互換，有時可與纈氨酸互換。 在某些位置，賴氨酸(K)和精氨酸(R)常常也是可互換的，在這些位置上氨基酸 殘基的主要特征是其電荷，而這兩種氨基酸殘基的pK差別并不重要。在某些 特定環境中，仍有其它改變可^L為"保守的"。
給定一種抗體，本領域所屬技術人員可以產生識別相同抗原表位的竟爭性 抑制CDMAB，例如竟爭性抗體(Belanger L等.Clinica Chimica Acta 48: 15-18 (1973))。 一種是用表達該抗體識別抗原的免疫原產生免疫。該樣品可包括，但 不限于，組織、分離的蛋白或細胞系。可用諸如ELISA、 FACS或Western印 跡的竟爭分析來篩選產生的雜交瘤，其中該竟爭分析鑒定抑制測試抗體的結合 的抗體。另一方法利用噬菌體展示抗體庫，并淘選識別所述抗原的至少一個抗 原表位的抗體(Rubinstein JL等，Anal Biochem 314:294-300 (2003))。在任一情 況下，根據它們與靶抗原至少一個決定簇的結合能力竟爭超出原標記抗體來選 擇抗體。因此，這類抗體與原始抗體一樣，具有識別抗原的至少一個抗原表位 的特性。
實施例1
雜交瘤生產一雜交瘤細胞系AR62A61.8
根據布達佩斯條約，將雜交瘤細胞系AR62A61.8于2005年5月17日保藏 在加拿大國際保藏單位(IDAC),位于加拿大馬尼托巴省R3E 3R2溫尼伯市阿林 頓街道1015的加拿大衛生部微生物局，保藏編號為170505-04。根據37 CFR 1.808的規定，保藏者保證在專利授權時徹底取消對公眾獲取該保藏材料的所有 限制。如果保藏處不能給予存活的樣本，那么將替換保藏樣品。為了生成產生抗癌抗體的雜交瘤AR62A61.8,在PBS中制備冷凍的人前列 腺腫瘤組織(Genomics Collaborative, Cambridge, MA)的單細胞懸浮液。 IMMUNEASY (Qiagen， Venlo, Netherlands)佐劑輕輕混合后待用。通過皮下 注射含2百萬細胞的50樣t升抗原一佐劑對5-7周的BALB/c鼠進行免疫。初次 免疫后2-5周，將新制備的含2百萬細胞的50微升抗原一佐劑腹腔注入以加強 免疫小鼠。最后一次免疫之后3天，使用脾進行融合。通過將分離的脾細胞與 NSO-1骨髓瘤配偶體融合制備雜交瘤。檢測雜交瘤亞克隆融合的上清液。
為了確定雜交瘤細胞分泌的抗體是否為IgG或IgM同種型，進行了酶聯免 疫測定試驗(ELISA)。將4。C包被液(Coatingbuffer)(0.1M碳酸鹽/碳酸氫鹽緩沖 液,pH為9.2-9.6)中的濃度為2.4微克/毫升的山羊抗小鼠IgG+IgM(H+L)以100 孩t升/孔加入到ELISA酶標板(ELISA plate)過夜。酶標板用洗滌緩沖液洗滌 (PBS+0.05% Tween)三次。向所述酶標板加入100微升/孔的封閉緩沖液(blocking buffer)(洗滌緩沖液中含有5。/。牛奶)，室溫保持l小時，隨后用洗滌緩沖液洗滌 三次。加入100微升/孔的雜交瘤上清液，室溫孵育1小時。用洗滌緩沖液洗滌 酶標板三次，加入100微升/孔的山羊抗小鼠IgG或IgM與辣根過氧物酶的偶 聯物的1/100,000稀釋液(在含有5%牛奶的PBS中稀釋)。室溫孵育1小時后， 酶標板用洗滌緩沖液洗滌三次。將100微升/孔的TMB溶液在室溫孵育1-3分 鐘。加入50微升/孔的2MH2S04終止顏色反應，用Perkin-Elmer HTS7000讀板 機在450nm讀板。如圖1所示，AR62A61.8雜交瘤主要分泌是IgG同種型抗體。
為了確定所述雜交瘤細胞分泌的抗體的亞型，用小鼠單克隆抗體同種型分 型i式劑盒(Mouse Monoclonal Antibody Isotyping Kit) (HyCult Biotechnology, Frontstraat， Netherlands)進行了同種型實驗。將500孩支升緩沖液加入到含有大鼠 抗-小鼠亞型特異抗體的試驗片(test strip)中。將500 ^L升雜交瘤上清液加入到試 管中，通過輕輕攪動混合。通過結合至膠體顆粒的另一種大鼠單克隆抗體直接 檢測俘獲的小鼠免疫球蛋白。這兩種蛋白的結合產生了可用于分析所述同種型 的一見覺信號。抗癌抗體AR62A61.8是IgGl， k同種型。
經過一輪有限稀釋，在細胞ELISA分析中檢測雜交瘤上清液中結合至靶細 胞的抗體。檢測了一種人乳癌細胞系、 一種人卵巢癌細胞系、兩種人結腸癌細 胞系和一種人正常皮膚細胞系，分別是MDA-MB-231、 OVCAR-3、 SW1116、 Lovo和CCD-27sk。所有細胞系得自美國典型培養物保存中心(American TypeTissue Collection, ATCC;馬納薩斯，VA)。鋪板細胞在使用前先被固定。酶標 板用含有MgCl2和CaCl2的PBS在室溫洗滌三次。每個板孔中加入IO(H效升、 2。/o多聚曱醛的PBS稀釋液，室溫保持10分鐘，隨后棄掉該液。孔板再次用含 有MgCl2和CaCl2的PBS室溫洗滌三次。用100樣史升/孔的含有5。/。牛奶的洗滌 緩沖液(PBS+0.05Q/。 Tween)室溫封閉1小時。孔板用洗滌緩沖液洗滌三次，以 75微升/孔加入雜交瘤上清液，室溫放置l小時。孔板用洗滌緩沖液洗滌三次， 以100孩i升/孔加入與辣才艮過氧物酶偶聯的山羊抗-小鼠IgG或IgM抗體的 1/25,000稀釋液(在含有5%奶的PBS中稀釋)。室溫孵育1小時，孔板用洗滌緩 沖液洗滌三次，將100微升/孔的TMB培養基在室溫孵育1-3分鐘。用50微升 /孔的2M H2S04終止反應，用Perkin-Elmer HTS7000讀板機在450nm下讀板。 圖1列表顯示的結果表示為高出背景的倍數，對照為內部(in-house)的IgG同種 型，事先已經證明該對照不能與被測細胞系結合。來自雜交瘤AR62A61.8的抗 體對乳癌細胞系MDA-MB-231表現出牢固的結合，其后是卵巢癌細胞系 OVCAR-3，結腸癌細胞系Lovo和SW1U6。 AR62A61.8對正常皮膚細胞系 CCD-27sk表現出低水平的結合。
在進行抗體結合實驗的同時，在所述細胞系MDA-MB-231、 OVCAR-3、 SW1116、 Lovo和CCD-27sk中測試了雜交瘤上清液的細胞毒性作用。從 Molecular Probes (Eugene, OR)公司獲得了鈣黃綠素(Calcein) AM,并如下所述 進行了所述分析。分析前將細胞以預先確定的適當濃度進行鋪板。2天后，將 來自雜交瘤微量滴定板的75微升上清液轉移至細胞孔板，并于5% C02培育箱 中孵育5天。將陽性對照孔抽空，加入100微升的疊氮化鈉(NaN3， 0.01%, Sigma， Oakville， ON)、放線菌酮(cycloheximide)(CHX, 0.5微摩爾，Sigma, Oakville, ON) 或抗-EGFR抗體(c225， IgGl, k， 5微克/mL, Cedarlane， Hornby, ON)。經過5天的 處理后，孔板經倒空并吸干。將室溫下的、含有MgCl2和CaCl2的DPBS (Dulbecco's磷酸鹽緩沖液)從多通道塑料擠壓瓶中分配入每個孔中，輕敲三次， 倒空然后吸千。將50微升在含有MgCl2和CaCl2的DPBS中稀釋的熒光釣黃綠 素染料加入到每個孔中，并在5% C02培養箱中于37°C孵育30分鐘。用 Perkin-Elmer HTS7000熒光讀氺反沖幾讀4反，數據用Microsoft Excel進4亍分析。結 果在圖1中以表;f各列出。雜交瘤AR62A61.8的上清對OVCAR-3細胞產生了 22% 的特異細胞毒性作用，對Lovo細胞產生了 15%的特異細胞毒性作用。對OVCAR-3，分別是用陽性對照疊氮化鈉和放線菌酮獲得的細胞毒性作用的37% 和61%,而對Lovo細胞分別為31%和17%。對正常皮膚細胞系CCD-27sk沒 有可觀察到的細胞毒性作用。而公知的非特異性細胞毒性作用試劑放線菌酮和 NaN3產生了普遍的預期的細胞毒性作用。抗EGFR抗體c225在SW1116上產 生預期的細胞毒性作用。
圖1的結果證明AR62A61.8對不同細胞系的細胞毒性作用作用與其結合水 平并不成比例。盡管乳癌細胞系MDA-MB-231顯示出最高的結合水平，但是 在該細胞系中并沒有導致細胞毒性作用。相比Lovo細胞，在OVCAR-3細胞中 產生的細胞毒性作用水平更高，這對應于在OVCAR-3卯巢癌細胞系中稍高的 結合水平。因此，該抗體顯示出功能的特異性，其與結合水平并不存在必然聯 系。
實施例2 體外結合
通過在CL-1000瓶(BD Biosciences, Oakville, ON)中培養所述雜交瘤來產生 AR62A61.8單克隆抗體，每星期進行兩次收集和再接種。然后用蛋白G瓊脂糖 4十夬5危(Protein G Sepharose 4 Fast Flow) (Amersham Biosciences, Baie d'Urft， QC) 進行標準的抗體純化過程。利用人源化的、去免疫的、嵌合的(chimerized)或鼠 源單克隆抗體均屬于本發明的范圍。
通過流式細胞計量術(FACS)評估了 AR62A61.8與乳癌(MDA-MB-231)、結 腸癌(DLD-l, Lovo, SW1116)和卯巢癌(OVCAR-3)細胞系，及來自皮膚 (CCD-27sk)和肺(Hs888丄u)的非癌細胞系的結合。所有細胞系得自美國典型培 養物保存中心(ATCC; Manassas, VA)。通過首先用DPBS(不含Ca"和Mg，洗 滌所述細胞單層來準備細胞，以進行FACS。然后用細胞離解緩沖液 (INVITROGEN, Burlington, ON)在37°C下將細胞從細胞培養板上分離出來。離 心收集后，在4。C下，將細胞重懸在含有MgCl2、 CaCl2和2%胎牛血清的DPBS(染 色培養基)中并計數，稀釋到適當的細胞濃度，旋轉沉淀使細胞成球，并在4。C、 在20微克/mL的測試抗體(AR62A61.8)或對照抗體(同種型對照，抗EGFR)的存 在下，重懸在染色培養基中，冰上放置30分鐘。在加入偶聯了 AlexaFluor546 的二抗之前，將細胞用染色培養基洗滌一次。然后加入位于染色培養基中的AlexaFluor 546偶聯抗體，在4。C持續30分鐘。然后最后洗滌一次細胞，并重 懸于固定培養基中(含有1.5%多聚曱醛的染色培養基)。通過在使用FACSarray System Software (BD Biosciences, Oakville， ON)的FACSarray 上運行樣品來評 估流式細胞計數的細胞獲取。通過調節前向散射(FSC)和測向散散(SSC)檢測器 上得到的電壓和幅度(amplitude)來設置細胞的FSC和SSC。通過運行未染色的 細胞來調節熒光通道(Alexa-546)的檢測器，從而該細胞具有均勻的峰，平均熒 光強度約為l-5單位。對于每個樣品，需要約10,000個門事件(gatedevents)(被 染色固定的細胞)來進行分析，結果如圖2所示。
圖2顯示了高出同種型對照的平均焚光強度倍增。圖3匯集了 AR62A61.8 抗體的有代表性的直方圖。AR62A61.8對結腸癌細胞系DLD-1 (4.8倍)、正常 肺細胞系Hs888丄u(3.8倍)和乳癌細胞系MDA-MB-231 (3.8倍)顯示出強結合， 而對結腸癌細胞系SW1116(1.8倍)和卵巢癌細胞系OVCAR-3(2.4倍)顯示出弱 結合。在這些條件下未檢測到對Lovo結腸癌細胞系和CCD-27sk正常皮膚細胞 系的結合。這些數據證明AR62A61.8選擇性地結合不同的人細胞系。
實施例3:
用Lovo細胞進行的體內腫瘤試驗
實施例1和2證明了 AR62A61.8具有抗結腸癌和卵巢癌細胞系的抗癌特 性，并且可結合結腸細胞類型。參照圖4和5，將頸背皮下注射的100微升的 生理鹽水中的1百萬人結腸癌細胞(Lovo)植入4-6周齡的雌性SCID小鼠。小鼠 被隨機分為兩個治療組，每組5只。植入后第一天，向每一群動物腹膜內給予 300微升的AR62A61.8測試抗體(20mg/kg)或緩沖液對照，所述溶液由保存濃縮 液稀釋獲得，所用稀釋劑含有2.7mM的KC1、 lmM的KH2P03、 137mM的NaCl 和20mM的Na2HP04。隨后，以同一方式每周給藥一次抗體和對照樣品，持續 7周。大約每7天用測徑器測量腫瘤的生長，持續到8周，或直至動物個體達 到加拿大動物護理委員會(CCAC)規定的指標。在研究的持續過程中每周一次記 錄動物的體重。在研究結束時，所有的動物都根據CCAC指南進行安樂死。
在人結腸癌預防性體內模型中，AR62A61.8降低了腫瘤負荷。在植入后的 第56天，最后一次治療給藥后第6天，AR62A61.8治療組的平均腫瘤體積比 緩沖液對照治療組低22% (圖4)。最終時間點時的平均腫瘤體積受到治療期結束前由于潰瘍性損傷而損失的小鼠的影響。在第42天，當所有小鼠仍然存活時， 相比緩沖液治療的對照小鼠，AR62A61.8使腫瘤體積降低44% (p=0.171)。
在整個研究中，沒有出現臨床毒性癥狀。圖5所示的體重用做健康作為動 物健康和發育停止的指標。在組內，整個研究期間對照組內有不顯著的9%的 體重降低，而AR62A61.8治療組的體重顯示出11%的降低，從平均20g至17.8g。 在治療期末，各組間沒有顯著的體重差別( =0.13, t-檢驗)。
總而言之，在該人結腸癌異種移植模型中，AR62A61.8良好耐受并降低了 腫瘤負荷。顯然，實施例2中，AR62A61.8對Lovo細胞系的結合使用FACS 是無法檢測到的。盡管如此，該抗體能夠降低Lovo異種移植模型中的腫瘤生 長。該功效可能源于兩個因素中的任一個。有可能Lovo細月包系以4氐于FACS 在這些條件下的檢出閾的水平表達所述抗原靶標，但該低表達水平足以觸發導 致腫瘤生長延遲的事件。還可能當將Lovo細胞置于更符合生理學的體內環境 中時，會誘導抗原表達。在任一情況下，該抗體在Lovo結腸癌模型中的功效 都是以結合為基礎所不能預見到的非顯而易見的發現。
實施例4
用DLD-1細胞進行的體內腫瘤試驗
實施例3的結果擴展至人結腸癌的不同才莫型。參照圖6和7，將頸背皮下 注射的100微升的生理鹽水中的5百萬人結腸癌細胞(DLD-l)植入4-6周齡的雌 性SCID小鼠的生理鹽水。小鼠被隨機分為兩個治療組，每組5只。植入后第 一天，向每一群動物腹膜內給藥300孩i升的AR62A61.8測試抗體(20mg/kg)或 緩沖液對照，所述溶液由保存濃縮液稀釋獲得，所用稀釋劑含有2.7mM的KC1、 lmJVN々KH2P03、 137mM的NaCl和20mM的Na2HP04。隨后，在整個研究期 間以同一方式每周給藥一次抗體和對照樣品。大約每7天用測徑器測量腫瘤的 生長。研究在7次注射(48天)后，動物由于大潰瘍性損傷達到CCAC指標時結 束。在研究的持續過程中每周一次記錄動物的體重。在研究結束時，所有的動 物都根據CCAC指南進行安樂死。
在人結腸癌的高侵入性(aggressive)DLD-l預防性體內模型中，AR62A61.8 降低了腫瘤生長。在植入后的第41天，約最后一次治療給藥時，AR62A61.8 治療組的平均腫瘤體積比緩沖液對照治療組的腫瘤體積低37% (圖6)。盡管AR62A61.8治療小鼠的腫瘤負荷低于對照治療小鼠，但在該人結腸癌的侵入性 模型中差別是非顯著性的。最終時間點時的平均腫瘤體積受到治療期結束前由 于潰瘍性損傷而損失的小鼠的影響。在第27天，當所有小鼠仍然存活時， AR62A61.8使腫瘤體積降低28% (p=0.13)。僅在4次抗體注射后就觀察到該降 低。這些體內結果，以及圖2中顯示的結果證明AR62A61.8能強烈地結合DLD-1 細胞系，并在其它結腸模型中誘導細胞毒性作用。
在整個研究中，沒有臨床毒性癥狀。每周測得的體重用做健康動物健康和 發育停止的指標。如圖8所示，在研究期末，對照或62A335.9治療組的體重沒 有顯著的差別。在治療期末，兩組間沒有體重差別(p-0.921，t-檢驗)。
因此，在該人結腸癌異種移植模型中，AR62A61.8良好耐受并降低了腫瘤 負荷。
大部分證據顯示AR62A61.8通過對癌細胞系上的抗原表位的連接(ligation) 介導了抗癌作用。進一步表明，利用諸如FACS、細胞ELISA或IHC的技術可 將AR62A61.8抗體用于細胞和/或組織的檢測，其中該細胞和組織表達所述抗 體特異結合的抗原表位。
本說明書中所涉及的所有專利和公開物顯示了本發明所屬技術領域的技術 人員的技術水平。所有的專利和公開物通過引用的方式并入本文，其引用程度 如同每個出版物被專門單獨地指明以引用的方式并入本文。在此以相同的程度 51入作為參考，就如同專門且單獨說明每一獨立公開物被引入作為參考。
應當明白的是盡管說明了本發明的特定形式，發明不限于在此描述和顯示 的特定形式或各部分的布局。對于本領域的技術人員而言，顯而易見地可以在 不背離本發明范圍的情況下進行各種改變，并且不應當認為本發明限于本說明 書中顯示和描述的內容。本領域的技術人員容易理解，本發明非常適于實現所 述目標，并取得所提及、以及發明本身所固有的結果和優點。在此描述的任何 寡核香酸、肽、多肽、生物學相關化合物、方法、步驟和技術代表了優選的實 施方案，僅為示范性的、而不是限制本發明的范圍。本領域技術人員想到的對 發明的修改和其它應用都包含在本發明的范疇內，并由所附權利要求書的范圍 所限定。雖然本發明結合特定的優選實施方案進行了說明，應當理解所要求保 護的發明不應不恰當地受到這些特定實施方案的限制。事實上，對于本領域所屬技術人員顯而易見的，對實現本發明的上述方式的各種修改都應該包含在隨 后的權利要求書的范圍內。加拿大國際保藏機構 電話(204)7柳-2070
加拿大衛生部國立微生物學實驗室 傳真(204)789-2097
加拿大馬尼托巴省溫尼伯市阿林頓街1015
R3E 3R2_
國P示ID AC/BP/4表
微生物保藏證明(譯文)
(根據布達佩斯條約第7.1條發布)
所附文件為原始保藏合同與活存聲明的副本
1、 國際保藏機構接受了以下具體描述的微生物 保藏人姓名Valerie Harris (哈里斯'瓦萊麗)
地址 ARIUS RESEARCH. INC. 55 York Street. Suite 1600. Toronto. ON M5J 1R7
(加拿大多倫多阿里烏斯研究公司) 提交日期2005年5月17日
2、 保藏的標識
保藏人對培養物指定的名稱和符號 AR62A61.8
由該國際保藏機構給予的保藏號:
170505-04
科學性描述和/或預計的分類學指定:
□科學性描述
□預計的分類指定
3、國際保藏機構IDAC授權代表^^ 日期2005年5月17日
權利要求
1.由雜交瘤產生的分離的單克隆抗體，所述雜交瘤以保藏號170505-04保藏在IDAC。
2. 由權利要求1所述分離的單克隆抗體產生的人源化抗體。
3. 由權利要求1所述分離的單克隆抗體產生的嵌合抗體。
4. 分離的雜交瘤細胞系，其以保藏號170505-04保藏在IDAC。
5. 引發抗體誘導的選自人腫瘤的組織樣品中癌細胞的細胞毒作用的方 法，包括提供所述人類腫瘤的組織樣品；提供由雜交瘤產生的分離的單克隆抗體或其CDMAB，所述雜交瘤以保 藏號170505-04保藏在IDAC,所述CDMAB的特征在于竟爭性地抑制所述 分離的單克隆抗體對其靶抗原的結合的能力；以及將所述分離的單克隆抗體或其CDMAB與所述組織樣品接觸； 其中所述分離的單克隆抗體或其CDMAB與所述組織樣品的結合誘導 細胞毒性作用。
6. 權利要求1所述分離的單克隆抗體的CDMAB。
7. 權利要求2所述人源化抗體的CDMAB。
8. 權利要求3所述嵌合抗體的CDMAB。
9. 權利要求1、 2、 3、 6、 7或8中任一權利要求所述的分離的抗體或 其CDMAB,其與選自細胞毒性部分、酶、放射性化合物和造血細胞的成員 偶聯。
10. 確定選自人胂瘤的組織樣品中癌細胞的存在的結合分析方法，所述 癌細胞被分離的單克隆抗體特異性結合，該單克隆抗體由具有IDAC保藏號 170505-04的雜交瘤細胞系AR62A61.8產生，所述方法包括提供所述人類肺瘤的組織樣品；提供至少一種分離的單克隆抗體或其CDMAB,所述單克隆抗體或其 CDMAB識別的 一 個抗原表位或多個抗原表位與由雜交瘤細胞系 AR62A61.8產生的分離的單克隆抗體所識別的一個抗原表位或多個抗原表 位相同，所述雜交瘤細胞系具有IDAC保藏號170505-04;將所述至少一種分離的單克隆抗體或其CDMAB與所述組織樣品接觸；以及測定所述至少一種分離的單克隆抗體或其CDMAB與所述組織樣品的 結合；由此指示出所述組織樣品中所述癌細胞的存在。
11. 治療哺乳動物的人肺瘤的方法，其中所述人腫瘤表達特異結合至分 離的單克隆抗體或其CDMAB的抗原的至少一種抗原表位，所述單克隆抗 體由以保藏號170505-04保藏在IDAC的克隆所編碼，所述CDMAB的特征 在于竟爭性地抑制所述分離的單克隆抗體對其靶抗原的結合的能力，所述方 法包括對所述哺乳動物給予降低所述哺乳動物的腫瘤負荷的有效量的所述 單克隆抗體或其CDMAB。
12. 根據權利要求11所述的方法，其中所述分離的單克隆抗體偶聯到 細月包毒性部分。
13. 根據權利要求12所述的方法，其中所述的細胞毒性部分是放射性 同位素。
14. 根據權利要求11所述的方法，其中所述分離的單克隆抗體或其 CDMAB激活補體。
15. 根據權利要求11所述的方法，其中所述分離的單克隆抗體或其 CDMAB介導抗體依賴的細胞的細胞毒性作用。
16. 根據權利要求11所述的方法，其中所述分離的單克隆抗體是人源 化的。
17. 根據權利要求11所述的方法，其中所述的單克隆抗體是嵌合的。
18. 治療哺乳動物的對抗體誘導的細胞毒性作用敏感的人腫瘤的方法， 其中所述人腫瘤表達特異結合至分離的單克隆抗體或其CDMAB的抗原的 至少一種抗原表位，所述單克隆抗體由以保藏號170505-04保藏在ID AC的 克隆所編碼，所述CDMAB的特征在于竟爭性地抑制所述分離的單克隆抗 體對其靶抗原的結合的能力，所述方法包括對所述哺乳動物給予降低所述哺 乳動物的胂瘤負荷的有效量的所述單克隆抗體或其CDMAB。
19. 根據權利要求18所述的方法，其中所述分離的單克隆抗體偶聯到 細月包毒性部分。
20. 根據權利要求19所述的方法，其中所述的細胞毒性部分是放射性 同位素。
21. 根據權利要求18所述的方法，其中所述分離的單克隆抗體或其 CDMAB激活補體。
22. 根據權利要求18所述的方法，其中所述分離的單克隆抗體或其 CDMAB介導抗體依賴的細胞的細胞毒性。
23. 根據權利要求18所述的方法，其中所述分離的單克隆抗體是人源 化的。
24.根據權利要求18所述的方法，其中所述的單克隆抗體是嵌合的。
全文摘要
本發明涉及一種利用新型篩選模型來產生患者癌性疾病調節抗體的方法。通過使用癌細胞毒性作用作為指標來分離抗癌抗體，該方法使得生產用于治療和診斷目的的抗癌抗體成為可能。該抗體可用于輔助癌癥的分期和診斷，并可以用于治療原發性腫瘤和腫瘤轉移。該抗癌抗體可以和毒素、酶、放射性化合物、造血細胞偶聯。
文檔編號G01N33/557GK101292041SQ200680036699
公開日2008年10月22日 申請日期2006年8月1日 優先權日2005年8月2日
發明者利薩·M·切凱托, 大衛·S·F·楊, 蘇姍·E·哈恩 申請人:阿里烏斯研究公司