專利名稱：一種新的硫酸依替米星有關(guān)物質(zhì)的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新的氨基糖苷類抗生素硫酸依替米星有關(guān)物質(zhì)的檢測方法。具體的講是一種新的采用HPLC-ELSD儀器、采用梯度洗脫的方法檢測硫酸依替米星有關(guān)物質(zhì)的方法。
背景技術(shù)：
硫酸依替米星(Etimicin sulfate)是我國科研人員自行研制的，擁有自主知識產(chǎn)權(quán)的高效、低毒、抗耐藥菌的新一代半合成氨基糖苷類抗生素，是唯一獲得國家一類新藥證書的抗感染藥物。硫酸依替米星注射液適用于對其敏感的大腸桿菌、克雷伯氏肺炎桿菌、沙雷氏桿菌屬、枸櫞酸桿菌、腸桿菌屬、不動桿菌屬、變形桿菌屬、嗜血流感桿菌、綠膿桿菌和葡萄球菌等引起的各種感染。臨床研究顯示本品對以下感染有較好的療效呼吸道感染如急性支氣管炎、慢性支氣管炎急性發(fā)作、社區(qū)肺部感染等。腎臟和泌尿生殖系統(tǒng)感染如急性腎盂腎炎、膀胱炎、慢性腎盂腎炎或慢性膀胱炎急性發(fā)作等。皮膚軟組織和其它感染如皮膚及軟組織感染，外傷、創(chuàng)傷和手術(shù)產(chǎn)后的感染及其他敏感菌感染。目前，生產(chǎn)硫酸依替米星使用的工藝均為專利報道的工藝(申請?zhí)?93112412. 3)。其主要步驟為慶大霉素Cla堿在溶劑中加入醋酸鈷、乙酸酐，生成3，2，， 6，-三-N-乙酰基慶大霉素Cla (Pl)，經(jīng)過提取濃縮，濃縮液通入硫化氫氣體除去鈷離子， 得到純度為90% -95%的Pl，然后加入乙醛，在0-5°C冰水浴中用還原劑氫化，得到3，2，， 6，-三-N-乙酰基-I-N乙基慶大霉素Cla (P2)，經(jīng)吸附型大孔樹脂分離后得到純度較高的 P2，純度較高的P2加入IN的氫氧化鈉溶液，水解回流48小時，水解液經(jīng)吸附型大孔樹脂分離得到純度為90%以上的I-N-乙基慶大霉素Cla (依替米星)溶液，加酸成鹽，活性炭脫色，冷凍干燥，即得依替米星鹽。硫酸依替米星是一種多結(jié)構(gòu)產(chǎn)品，生產(chǎn)中難于提純，主要雜質(zhì)為ETM-10，ETM-7， ETM-12, ETM-6，ETM-5，ETM-3，它們的結(jié)構(gòu)分別為ETM-10 結(jié)構(gòu)式
權(quán)利要求
1. 一種硫酸依替米星雜質(zhì)含量檢測方法，其特征在于，經(jīng)過以下步驟精密稱取氨基糖苷有關(guān)物質(zhì)ETM-10，ETM-7，ETM-12, ETM-6，ETM-5，ETM-3對照品各適量，分別加水制成每Iml分別含相關(guān)雜質(zhì)約0. OOl-IOmg的對照品儲備溶液；精密吸取以上各有關(guān)物質(zhì)對照品儲備溶液適量，轉(zhuǎn)移至同一容量瓶中，加水稀釋至刻度，制備成有關(guān)物質(zhì)混合對照品溶液， 其中各有關(guān)物質(zhì)濃度為1-1000 μ g/ml，色譜柱=Gemini NX C18(4. 6mmX 150mm, 5 μ m)；流動相A相水-氨水-冰醋酸(98 75 2.0 5.0 0. 1 1. 0)，B相甲醇，采用梯度洗脫的方法，用HPLC-ELSD進行測定，面積歸一化法計算其含量。 流動相梯度
2.如權(quán)利要求1所述的檢測方法，有關(guān)物質(zhì)對照品儲備溶液的濃度為0.001-10mg。
3.如權(quán)利要求1所述的檢測方法，有關(guān)物質(zhì)混合對照品溶液的濃度為1-1000μg/ml。
4.如權(quán)利要求1所述的檢測方法，檢測用流動相由A相和B相組成，其中A相水-氨水-冰醋酸(98 75 2. 0 5. 0 0. 1 1. 0)，B相甲醇。
5.如權(quán)利要求1所述的檢測方法，采用梯度洗脫的方法，流動相梯度為 流動相梯度
6.如權(quán)利要求1所述的檢測方法，采用HPLC-ELSD進行測定，面積歸一化法計算其含量。
7.如權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，經(jīng)過以下步驟精密稱取氨基糖苷有關(guān)物質(zhì)對照品(ETM-10，ETM-7，ETM-12, ETM-6，ETM-5，ETM-3 ；均從原料藥硫酸依替米星中分離得到，純度均> 95% )各適量，分別加水制成每Iml分別含相關(guān)雜質(zhì)約0. OOl-IOmg的對照品儲備溶液；精密吸取以上各氨基糖苷有關(guān)物質(zhì)對照品儲備液各適量，轉(zhuǎn)移至同一容量瓶中，加水稀釋至刻度，制備成氨基糖苷類有關(guān)物質(zhì)混合對照品溶液，其中各有關(guān)物質(zhì)濃度為1-500 μ g/ml)。色譜柱Gemini NX C18(4. 6mmX 150mm, 5 μ m)。流動相A相水-氨水-冰醋酸(98 85 2. 0 4. 0 0. 1 0. 5)，B相甲醇。采用梯度洗脫的方法，用HPLC-ELSD進行測定，面積歸一化法計算其含量。
8.如權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，經(jīng)過以下步驟 精密稱取氨基糖苷有關(guān)物質(zhì)對照品(ETM-10，ETM-7，ETM-12, ETM-6，ETM-5，ETM-3 ；均從原料藥硫酸依替米星中分離得到，純度均> 95% )各適量，分別加水制成每Iml分別含相關(guān)雜質(zhì)約0. OOl-IOmg的對照品儲備溶液；精密吸取以上各氨基糖苷有關(guān)物質(zhì)對照品儲備液各適量，轉(zhuǎn)移至同一容量瓶中，加水稀釋至刻度，制備成氨基糖苷類有關(guān)物質(zhì)混合對照品溶液，其中各有關(guān)物質(zhì)濃度為10-300 μ g/ml)。色譜柱Gemini NX C18(4. 6mmX 150mm, 5ym)。流動相A相水-氨水-冰醋酸(96 3. 6 0.4)，B相甲醇。采用梯度洗脫的方法，用HPLC-ELSD進行測定，面積歸一化法計算其含量。 流動相梯度
全文摘要
本發(fā)明涉及一種新的氨基糖苷類抗生素硫酸依替米星有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，該方法包括以下步驟精密稱取硫酸依替米星有關(guān)物質(zhì)對照品各適量，分別加水制成一定濃度的對照品儲備溶液；精密吸取以上各氨基糖苷有關(guān)物質(zhì)對照品儲備液各適量，轉(zhuǎn)移至同一容量瓶中，加水稀釋至刻度，制備成氨基糖苷雜質(zhì)混合對照品溶液，流動相A相水-氨水-冰醋酸(96∶3.6∶0.4)，B相甲醇。采用梯度洗脫的方法，用HPLC-ELSD進行測定，面積歸一化法計算其含量。
文檔編號G01N30/26GK102435679SQ201010297029
公開日2012年5月2日 申請日期2010年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月29日
發(fā)明者俞婷, 吳凌云, 夏冰, 張智杰, 易斌, 汪豪 申請人:無錫濟民可信山禾藥業(yè)股份有限公司, 江西濟民可信集團有限公司