專利名稱：一種基于nad(p)h熒光的醇脫氫酶的篩選鑒定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種基于NAD(P)H熒光的醇脫氫酶的篩選鑒定方法，適用于所有以 NAD(H)或NADP (H)為輔酶的醇脫氫酶。
背景技術(shù)：
醇脫氫酶(ADHs，Ε. C. 1. 1. 1. 1)是以NAD (H)或NADP (H)為輔酶進行電子轉(zhuǎn)移，催化醇的氧化或酮、醛還原的酶類。醇脫氫酶廣泛地存在于細菌、酵母和霉菌等微生物中，在胞內(nèi)代謝中具有重要的生理意義。醇脫氫酶也是一類重要的生物催化劑，可通過選擇性氧化或不對稱還原制備藥物中間體-手性醇，在生物化工和工業(yè)催化領(lǐng)域正得到越來越大的應(yīng)用。目前，篩選醇脫氫酶的方法主要包括用傳統(tǒng)的特定底物多次富集法和基于NAD (P) H生成的比色法，即NBT/PMS檢測方法。傳統(tǒng)的方法通過多次的底物富集工作量大時間長， 得到優(yōu)良菌株的幾率小。NBT/PMS檢測方法相對于傳統(tǒng)方法有所改進，該方法所需試劑較多、所用試劑毒性較大并且過程較為繁瑣。因此，設(shè)計出一套簡單快速經(jīng)濟的方法提高篩選醇脫氫酶的成功率是相當(dāng)必要和迫切的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明為了解決上述課題，基于醇脫氫酶以NAD(H)或NADP(H)為輔酶的特性，在反應(yīng)體系中加入待測樣本對醇進行氧化，在醇氧化的同時把不發(fā)射熒光的氧化型輔酶NAD+ 或NADP+轉(zhuǎn)化成能在一定激發(fā)光激發(fā)下發(fā)射熒光的還原型輔酶NADH或NADPH，利用反應(yīng)液熒光強度的變化設(shè)計出了一種醇脫氫酶的快速篩選鑒定方法。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種基于NADH或NADPH熒光的醇脫氫酶的篩選鑒定方法，所述方法包括在96孔微孔板中，分別加入PH 7. 0 8. 8的Tris-HCl或ρΗ8· 8 10. 5的甘氨酸-NaOH緩沖液， 然后往緩沖液中添加0. 2. 0% (ν/ν)的底物，0. 5 ImM的輔酶NAD+或NADP+，以及待測樣本，在0 80°C下反應(yīng)1 4 后，反應(yīng)液在激發(fā)波長340nm 380nm和發(fā)射波長 450nm 470nm下檢測熒光強度，在同等條件下以反應(yīng)體系中不加入底物的反應(yīng)液為對照， 與對照相比，熒光強度增加值大于400的樣本，即為含有對應(yīng)醇脫氫酶的樣本，反之則否； 所述底物為C2 ClO的醇、C6 ClO的芳香醇或C4 ClO的脂肪醇，包括混旋的醇或光學(xué)純的醇。本發(fā)明方法可用于未知樣品中醇脫氫酶的篩選，待測樣品為微生物或酶液，所述微生物來自各種可分離得到的微生物樣品，如污水、化工廠、農(nóng)田等的土樣或水樣以及現(xiàn)存或保藏的微生物菌種或者基因工程菌，也可將待篩選的微生物經(jīng)培養(yǎng)得到菌體后，再進行篩選操作。本發(fā)明方法也可用于已知酶樣品的鑒定，待測樣品為已知的粗酶液或經(jīng)純化后的純酶，可為市購產(chǎn)品，也可為已知產(chǎn)醇脫氫酶微生物經(jīng)發(fā)酵分離獲得的酶液。
優(yōu)選的，所述芳香醇為苯甲醇、1-苯乙醇、1-苯丙醇、扁桃酸甲酯。優(yōu)選的，所述脂肪醇為乙醇、丙醇、戊醇、仲丁醇、仲戊醇、仲辛醇、4-氯-3-羥基丁
酸乙酯。添加的輔酶為NAD+時，反應(yīng)液在激發(fā)波長360nm和發(fā)射波長460nm下檢測熒光強度。添加的輔酶為NADP+時，反應(yīng)液在激發(fā)波長350nm和發(fā)射波長460nm下檢測熒光強度。本發(fā)明中所涉及的底物有一部分水溶性較差，本發(fā)明通過兩種策略解決這一問題，一是降低底物濃度，另一是添加適量的助溶劑。優(yōu)選的，所述緩沖液還添加有體積為緩沖液體積10 30%的助溶劑，所述助溶劑為甲醇、二甲基亞砜或乙腈。優(yōu)選的，所述緩沖液還可添加有1 10g/L的溶菌酶。添加溶菌酶，有助于胞內(nèi)醇脫氫酶的釋放和大分子底物進入細胞，有利于增強反應(yīng)液的熒光強度。優(yōu)選的，所述待測樣品為微生物菌株，所述方法可應(yīng)用于醇脫氫酶產(chǎn)生菌的快速篩選，所述方法如下(1)在固體培養(yǎng)基上涂上20 200μ 1底物，作為富集平板，稱取0. 1 1克土壤樣本，溶于1 2ml無菌水中，充分混勻，再用無菌水稀釋1000 10000倍后涂布于富集平板，在30或37°C下培養(yǎng)12 72h，挑選具有不同菌落形態(tài)特征的菌株，接種于斜面，在30 或37°C下培養(yǎng)12 72h，從斜面上用接種環(huán)挑取2環(huán)菌體，用60 μ 1無菌水制成菌懸液，用于96孔板的微量反應(yīng)體系；(2)在96孔微孔板中，分別加入ρΗ 7. 0 8. 8的Tris-HCl或ρΗ 8. 8 10. 5的甘氨酸-NaOH緩沖液，然后往緩沖液中添加0. 2. 0%的底物，0. 5 ImM的輔酶NAD+ 或NADP+，以及步驟(1)獲得的菌懸液，在20 50°C下反應(yīng)10 24h后，反應(yīng)液在激發(fā)波長340nm 380nm和發(fā)射波長450nm 470nm下檢測熒光強度，在同等條件下以反應(yīng)體系中不加入底物的反應(yīng)液為對照，與對照相比，熒光強度增加值大于400的樣本，即為含有對應(yīng)醇脫氫酶的樣本，即為相應(yīng)醇脫氫酶產(chǎn)生菌。初篩所得的菌株可再利用氣相色譜或液相色譜分析技術(shù)作進一步復(fù)篩確認。本發(fā)明的發(fā)明點如下(1)提供了一種醇脫氫酶的快速篩選鑒定方法，確定輔酶NADH和NADPH的激發(fā)和發(fā)射波長范圍及其最適值，并得到優(yōu)化的篩選反應(yīng)體系及參數(shù)。(2)通過確定溫度、ρΗ、助溶劑、底物與NAD(P)H熒光的關(guān)系，排除本發(fā)明在具體實施中NAD(P)H熒光的干擾因素，使本發(fā)明適用性更廣。(3)利用96孔微孔板作為反應(yīng)容器，利用輔酶熒光正向篩選醇脫氫酶，解決已有醇脫氫酶的篩選中時間過長，過程繁瑣，試劑用量大且成功率低等問題。(4)本發(fā)明提供一種同時適用于篩選具有立體選擇性的醇脫氫酶(底物為手性醇時)的方法。本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在本發(fā)明與已有的醇脫氫酶篩選方法相比，耗時短， 精確率高，所需反應(yīng)試劑微量，具有高通量篩選的特點，并且反應(yīng)體系簡單，操作過程簡便， 反應(yīng)的干擾因素少。

圖1為不同種類輔酶不同濃度下的熒光光譜圖；“□”表示NADH ；“▲”表示NADPH ； “· ”表示 NADP+ ； “ Δ ” 表示 NAD+ ；圖2為還原型輔酶NAD (P)H在發(fā)射光譜400 500nm的范圍內(nèi)熒光光譜圖；“ □” 表示 NADH ；“▲” 表示 NADPH ；圖3為還原型輔酶NAD (P)H在激發(fā)光譜300 400nm的范圍內(nèi)熒光光譜圖；“ □” 表示 NADH ；“▲” 表示 NADPH ；圖4為還原型輔酶NAD(P)H在不同溫度下的熒光光譜圖；“□”表示NADH ；“▲”表示 NADPH ；圖5為還原型輔酶NAD (P)H在不同pH下的熒光光譜圖；“ □”表示NADH ；“▲”表示 NADPH ；圖6為不同助溶劑對還原型輔酶NADH熒光強度的影響；“ □”代表未加助溶劑， “曲’’代表加入10%的助溶劑，“ ■”代表加入20%的助溶劑，“國’’代表加入30%的助溶劑；圖7為編號為觀13的菌株氣相色譜結(jié)果；1、溶劑乙酸乙酯；2、苯乙酮；3、 (R)-I-苯乙醇；4、(S)-I-苯乙醇。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進行進一步描述，但本發(fā)明的保護范圍并不僅限于此實施例1 輔酶NADH和NADPH的激發(fā)與發(fā)射波長將還原型輔酶NADH和NADPH、氧化型輔酶NAD+和NADP+分別配制成從0. 01 ImM的不同濃度梯度的水溶液，取300 μ 1加入96孔微孔板中，在激發(fā)波長360nm，發(fā)射波長 460nm處測熒光強度，結(jié)果見圖1。由圖可知，在激發(fā)波長360nm和發(fā)射波長460nm下，還原型輔酶具有熒光，而氧化型輔酶不發(fā)射熒光。配制0. 5mM的NADH和NADPH水溶液，設(shè)定激發(fā)波長360nm，在發(fā)射光譜400 500nm的范圍內(nèi)測其熒光值，得到熒光光譜圖，見圖2。由圖2可知，NADH和NADPH最適發(fā)射波長為460nm。另外，設(shè)定發(fā)射波長460nm，在激發(fā)光譜300 400nm的范圍內(nèi)測其熒光值，得到熒光光譜圖，見圖3。由圖3可知，NADH最適激發(fā)波長為360nm，NADPH最適激發(fā)波長為350nm。實施例2 溫度、pH、有機溶劑、底物等與NAD (P) H熒光的關(guān)系(1)溫度與NAD(P)H熒光的關(guān)系配置0. 5mM的NAD (P)H水溶液，取300 μ 1分裝入96孔微孔板中，在4 70°C的溫度梯度內(nèi)過夜放置16h，期間用保鮮膜封存，防止揮發(fā)對熒光值造成影響。在最適波長下分別測其熒光值，結(jié)果見圖4。由圖4可知，在此范圍內(nèi)溫度對NADH的熒光值基本無影響； NADPH在高溫下自發(fā)熒光有所減弱，但是根據(jù)實施例1中圖1的結(jié)果分析，其熒光仍顯著。(2) pH與NAD(P)H熒光的關(guān)系用pH 7.0 10. 5的緩沖液配置0.5mM的NAD (P) H溶液，其中pH 7. 0、7. 5、8. 0為 50mM 的 Tris-HCl 溶液，pH 8. 5、9. 0、9. 5、10. 0、10. 5 為 50mM 的甘氨酸-NaOH 溶液。取不同pH的NAD (P) H溶液各300μ 1，30°C恒溫過夜放置16h，在最適波長下測其熒光值，結(jié)果見圖 5。在pH 7.0 10. 5范圍內(nèi)，pH對NAD(P)H熒光沒有明顯影響。(3)助溶劑與NAD(P)H熒光的關(guān)系在0.5mM的NAD (P) H水溶液中加入不同濃度常用助溶劑(甲醇、二甲基亞砜、乙腈)，取300 μ 1加入96孔微孔板中，用保鮮膜封存防止揮發(fā)損失，30°C恒溫過夜放置16h， 在最適波長下測其熒光值，其中NADH的數(shù)據(jù)如圖6。由圖可知，幾種常見的助溶劑對其自發(fā)熒光值基本無影響，NADPH的結(jié)果基本與NADH —致。(4)底物NAD (P) H熒光的關(guān)系在0. 5mM的NAD (P) H水溶液中加入1. 0% (V/V)的各種常用醇脫氫酶底物，芳香醇以苯甲醇、1-苯乙醇、1-苯丙醇、扁桃酸甲酯為例；脂肪醇以乙醇、丙醇、戊醇、仲丁醇、仲戊醇、仲辛醇、4-氯-3-羥基丁酸乙酯為例。取300 μ 1加入96孔微孔板中，用保鮮膜封存， 30°C恒溫過夜放置16h，在最適波長下測其熒光值，結(jié)果顯示熒光值均在4000 6000的范圍內(nèi)，表明該方法對各種類型的醇具有普適性。在96孔微孔板中，分別加入pH 10. 5的50mM甘氨酸-NaOH緩沖液，然后往緩沖液中添加1.0% (ν/ν)的前述常用醇脫氫酶底物(乙醇、仲丁醇、4-氯-3-羥基丁酸乙酯、 1-苯乙醇或扁桃酸甲酯)，0. 5mM的輔酶NAD+，以及相應(yīng)的醇脫氫酶(乙醇脫氫酶、仲醇脫氫酶、4-氯-3-羥基丁酸乙酯脫氫酶、芳香醇脫氫酶)，反應(yīng)總體系為300 μ 1。將反應(yīng)液體系在96孔微孔板中配置好后，用保鮮膜封存，30°C恒溫過夜放置16h，在最適波長下測其熒光值，在同等條件下以反應(yīng)體系中不加入底物的反應(yīng)液為對照，結(jié)果顯示與對照相比，所有樣本熒光強度增加值均大于400。實施例3 以1-苯乙醇為底物快速篩選醇脫氫酶產(chǎn)生菌取150 μ 1 1-苯乙醇涂布與LB平板上，吸收片刻，即為富集平板。稱取土樣(來源于湖北，內(nèi)蒙古，山東等地)0. 5克，置于2ml離心管(含無菌水Iml)中，用無菌水1000 倍稀釋后取10(^1均勻涂布于富集平板，301培養(yǎng)4811。然后選取平板上形態(tài)不同的菌落接種于LB斜面上，30°C培養(yǎng)Mh。從所得斜面中取2接種環(huán)菌體在60 μ 1無滅菌水中，震蕩制成菌懸液，用于初篩。反應(yīng)體系總體積為300 μ 1，分別包括pH 10.0的甘氨酸-NaOH緩沖液(總濃度50mM)、0. 5% (V/V)混旋1-苯乙醇、1. OmMNAD+和25 μ 1待測菌懸液。將配置好的反應(yīng)液體系300 μ 1，加入96孔微孔板，保鮮膜封存，在30°C下反應(yīng)1 后，在激發(fā)波長360nm和發(fā)射波長460nm下檢測熒光強度。反應(yīng)體系中不加底物苯乙醇作為對照，排除微生物可能由于自身存在能將NAD+還原成NADH的酶而影響篩選方法的準(zhǔn)確性。對照在上述同等條件下反應(yīng)并檢測熒光強度。選取反應(yīng)液的熒光值與對照差值大于400以上的菌株作為醇脫氫酶產(chǎn)生菌。實施例4 以1-苯乙醇為底物快速篩選醇脫氫酶產(chǎn)生菌菌株富集方法與菌懸液制備方法與實施例3中所用方法相同。反應(yīng)體系總體積為 300 μ 1，分別包括pH 9. 0的甘氨酸-NaOH緩沖液(總濃度50mM) U.0% (V/V)混旋1_苯乙醇、l.OmM NADPMO% (V/V) 二甲基亞砜、1.0% (W/V)溶菌酶和50 μ 1待測菌懸液。將配置好的反應(yīng)液體系300 μ 1，加入96孔微孔板，保鮮膜封存，在30°C下反應(yīng)他后，在激發(fā)波長350nm和發(fā)射波長460nm下檢測熒光強度。反應(yīng)體系中不加底物苯乙醇作為對照，排除微生物可能由于自身存在能將NADP+還原成NADPH的酶而影響篩選方法的準(zhǔn)確性。對照在上述同等條件下反應(yīng)并檢測熒光強度。選取反應(yīng)液的熒光值與對照差值大于400以上的菌株作為醇脫氫酶產(chǎn)生菌。實施例5 以1-戊醇為底物快速篩選醇脫氫酶產(chǎn)生菌取150 μ 1 1-戊醇涂布與LB平板上，吸收片刻，即為富集平板。稱取土樣0. 5克， 置于2ml離心管(含無菌水Iml)中，用無菌水1000倍稀釋后取100 μ 1均勻涂布于富集平板，30°C培養(yǎng)48h。然后選取平板上形態(tài)不同的菌落接種于LB斜面上，30°C培養(yǎng)Mh。從所得斜面中取2接種環(huán)菌體在60 μ 1無滅菌水中，震蕩制成菌懸液，用于初篩。反應(yīng)體系總體積為 300 μ 1，分別包括 pH 8. 0 的 50mM Tris-HCl 緩沖液、2. 0% (V/V) 1-戊醇、0. 8mM NAD+、 20% (V/V)甲醇、0. 5% (ff/V)溶菌酶和50 μ 1待測菌懸液。將配置好的反應(yīng)液體系300 μ 1， 加入96孔微孔板，保鮮膜封存，在30°C下反應(yīng)IMi后，在激發(fā)波長360nm和發(fā)射波長460nm 下檢測熒光強度。反應(yīng)體系中不加底物苯乙醇作為對照，排除微生物可能由于自身存在能將NAD+還原成NADH的酶而影響篩選方法的準(zhǔn)確性。對照在上述同等條件下反應(yīng)并檢測熒光強度。選取反應(yīng)液的熒光值與對照差值大于400以上的菌株作為醇脫氫酶產(chǎn)生菌。實施例6 氣相色譜方法復(fù)篩醇脫氫酶產(chǎn)生菌將實施例3和4中初篩后得到的菌株接種于LB培養(yǎng)基中，在30°C和200rpm下培養(yǎng)48h，取IOml菌液在6000rpm下離心lOmin，棄上清，所得菌體用與甘氨酸-NaOH緩沖液 (50mM,pH 10. 0)洗滌一次，6000rpm離心lOmin，棄上清。所得菌體中加入2ml甘氨酸-NaOH 緩沖液(50mM，pH 10. 0),5 μ 1 1-苯乙醇和40 μ 1的NAD+(40mM)，混勻。反應(yīng)液在30°C和 200rpm下反應(yīng)16h，然后反應(yīng)液經(jīng)過乙酸乙酯1 1萃取，萃取所得的有機相用于氣相色譜分析(色譜柱，CHIRASIL-DEX CB ；流速，0. 60ml/min ；分流比，1 50 ；140°C恒溫)。結(jié)果表明，從土壤中分離得到菌株214株，經(jīng)實施例3和4的熒光檢測后，初篩得到44株醇脫氫酶產(chǎn)生菌，占所測菌株總數(shù)的20. 6%。初篩所得的菌株經(jīng)氣相色譜法復(fù)篩后，結(jié)果表明具有氧化1-苯乙醇活力的菌株為36株，占初篩所得菌株的81. 8%，其中47%的菌株的底物對映體過量值在80 %以上。本發(fā)明從菌種分離、菌懸液制備、反應(yīng)、熒光檢測到色譜驗證整個篩選過程時間跨度約為5天，一批次可處理上百個待測菌株，與已有篩選的方法比較，本發(fā)明不僅僅大大縮短了篩選時間，更重要的是大幅度地提高了篩選的成功率。實施例7 用于手性催化的醇脫氫酶產(chǎn)生菌的篩選從實施例6中隨意選取一株ee值大于80%的菌株，篩菌編號為觀13，氣相結(jié)果如圖7所示。以混旋1-苯乙醇為底物時，菌株觀13選擇性氧化(S)-I-苯乙醇生成苯乙酮，同時導(dǎo)致(R)-I-苯乙醇的對映體過量值大于80%。按照實施例3中的反應(yīng)體系作96孔微孔板檢測，將底物分別替換為(S)-I-苯乙醇及(R)-I-苯乙醇，得到熒光值如表1所示。熒光檢測結(jié)果顯示，以(S)-I-苯乙醇為底物時反應(yīng)液的熒光值顯著增高，比對照大2598. 396。 而以(R)-I-苯乙醇為底物的反應(yīng)液熒光值，與對照相比，熒光組增加值只有約197，與實施例6中得到的氣相結(jié)果一致。因而，分別以S型和R型對映體作為底物，通過比較它們的反應(yīng)液熒光值，本方法也可用于篩選具有立體選擇性醇脫氫酶活力的菌株。表1
權(quán)利要求
1.一種基于NAD (P) H熒光的醇脫氫酶的篩選鑒定方法，所述方法包括在96孔微孔板中，分別加入PH 7.0 8. 8的Tris-HCl或pH 8. 8 10. 5的甘氨酸-NaOH緩沖液，然后往緩沖液中添加0. 1 % 2. 0 %的底物，0. 5 ImM的輔酶NAD+或NADP+，以及待測樣本，在 0 80°C下反應(yīng)1 48h后，反應(yīng)液在激發(fā)波長!MOnm 380nm和發(fā)射波長450nm 470nm 下檢測熒光強度，在同等條件下以反應(yīng)體系中不加入底物的反應(yīng)液為對照，與對照相比，熒光強度增加值大于400的樣本，即為含有對應(yīng)醇脫氫酶的樣本；所述底物為C2 ClO的醇、 C6 ClO的芳香醇或C4 ClO的脂肪醇。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述樣本為分離自天然環(huán)境的微生物、基因工程菌、粗酶或純酶樣本。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述芳香醇為苯甲醇、1-苯乙醇、1-苯丙醇、扁桃酸甲酯。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述脂肪醇為乙醇、丙醇、戊醇、仲丁醇、仲戊醇、仲辛醇、4-氯-3-羥基丁酸乙酯。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于添加的輔酶為NAD+時，反應(yīng)液在激發(fā)波長 360nm和發(fā)射波長460nm下檢測熒光強度。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于添加的輔酶為NADP+時，反應(yīng)液在激發(fā)波長 350nm和發(fā)射波長460nm下檢測熒光強度。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述緩沖液還添加有體積為緩沖液體積 10 30%的助溶劑，所述助溶劑為甲醇、二甲基亞砜或乙腈。
8.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述緩沖液還添加有1 10g/L的溶菌酶。
9.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述待測樣品為微生物菌株，所述方法如下(1)在固體培養(yǎng)基上涂上20 200μ 1底物，作為富集平板，稱取0. 1 1克土壤樣本， 溶于1 2ml無菌水中，充分混勻，再用無菌水稀釋1000 10000倍后涂布于富集平板，在 30或37°C下培養(yǎng)12 72h，挑選具有不同菌落形態(tài)特征的菌株，接種于斜面，在30或37°C 下培養(yǎng)12 72h，從斜面上用接種環(huán)挑取2環(huán)菌體，用60 μ 1無菌水制成菌懸液，用于96孔板的微量反應(yīng)體系；(2)在96孔微孔板中，分別加入pH7. 0 8. 8的Tris-HCl或pH 8. 8 10. 5的甘氨酸-NaOH緩沖液，然后往緩沖液中添加0. 1 % 2. 0%的底物，0. 5 ImM的輔酶NAD+或 NADP+，以及步驟(1)獲得的菌懸液，在20 50°C下反應(yīng)10 24h后，反應(yīng)液在激發(fā)波長 340nm 380nm和發(fā)射波長450nm 470nm下檢測熒光強度，在同等條件下以反應(yīng)體系中不加入底物的反應(yīng)液為對照，與對照相比，熒光強度增加值大于400的樣本，即為含有對應(yīng)醇脫氫酶的樣本。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種基于NAD(P)H熒光的醇脫氫酶的快速篩選鑒定方法，所述方法基于醇脫氫酶以NAD(H)或NADP(H)為輔酶的特性，以96孔微孔板為反應(yīng)容器，在反應(yīng)體系中加入待測樣本對醇進行氧化，在醇氧化的同時把不發(fā)射熒光的氧化型輔酶轉(zhuǎn)化成能在一定激發(fā)光激發(fā)下發(fā)射熒光的還原型輔酶NADH或NADPH，通過測定反應(yīng)液熒光強度的變化來篩選醇脫氫酶產(chǎn)生菌。本發(fā)明與已有的醇脫氫酶產(chǎn)生菌篩選方法相比，耗時短，精確率高，所需反應(yīng)試劑微量，具有高通量篩選的特點，并且反應(yīng)體系簡單，操作過程簡便，反應(yīng)的干擾因素少。
文檔編號G01N21/64GK102517378SQ20111036389
公開日2012年6月27日 申請日期2011年11月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月16日
發(fā)明者應(yīng)向賢, 楊池, 汪釗, 熊斌 申請人:浙江工業(yè)大學(xué)