專利名稱：一種無(wú)患子皂苷生產(chǎn)質(zhì)控分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品制備的方法
一種無(wú)患子皂苷生產(chǎn)質(zhì)控分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品制備的方法技術(shù)領(lǐng)域
本方法涉及一種制備無(wú)患子皂苷質(zhì)控品的方法，特別是一種制備無(wú)患子皂苷質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品分級(jí)產(chǎn)品的方法。
背景技術(shù)：
無(wú)患子(Sapindus mukorossi Gaerth.)在東南亞各國(guó)、我國(guó)的臺(tái)灣省及淮河以南各省均有分布。無(wú)患子假種皮中含有豐富的糖苷類物質(zhì)，具有良好的去污性和起泡性能，可作為天然活性物質(zhì)用于洗發(fā)香波及各種潔膚護(hù)膚化妝品中；它還具有抗菌、止癢、美白等生理功效。無(wú)患子皂苷在自然界可被100%降解，溫和無(wú)刺激。不會(huì)產(chǎn)生有害人體健康和有害環(huán)境的殘留物，因此近年來(lái)成為醫(yī)藥、農(nóng)藥、化妝品行業(yè)的研究熱點(diǎn)。
目前市場(chǎng)上沒(méi)有無(wú)患子皂苷的質(zhì)控品出售，對(duì)于無(wú)患子皂苷質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品的分級(jí)也罕有文獻(xiàn)報(bào)道，因此給無(wú)患子皂苷的質(zhì)量評(píng)價(jià)及常規(guī)檢測(cè)分析帶來(lái)一定的困難。解輝等研究人員將無(wú)患子水提液經(jīng)大孔樹脂吸附分離和硅膠柱吸附分離后，得到無(wú)患子總皂苷的標(biāo)準(zhǔn)品，純度大于96%，可作為無(wú)患子總皂苷質(zhì)控品。但無(wú)患子總皂苷是個(gè)混合物，內(nèi)含有多種物質(zhì)，按用途可分為如1)無(wú)患子苷(表面活性較強(qiáng)，可作為天然的非離子型表面活性劑)Mukurozioside I b即無(wú)患子苷I b、Mukurozioside II b即 ^SJi子 Ρ II b> Mukurozioside I a 艮[1 ,! 子 ^f I a> Mukurozioside II a 艮口 患 1Q1 II a, Mukurozioside A即無(wú)患子苷A ;2)皮哨子苷(具有較好的抑菌作用，可作為天然的防腐劑)=Pyishiauoside I b即皮哨子苷I b、Pyishiauoside IIb即皮哨子苷l(shuí)ib、 PyishiauosideIVb即皮哨子苷IVb、PyishiauosideIVa即皮哨子苷IVa ；3)無(wú)患子皂苷(具有抗腫瘤活性，可用于制備無(wú)患子皂苷中藥?kù)o脈注射液)=Sapindoside A即無(wú)患子皂苷A 、Sapindoside C 艮C、Sapindoside K 艮K、Sapindoside M 艮[1 ! 子皂苷M。因此，僅提供無(wú)患子總皂苷的標(biāo)準(zhǔn)品無(wú)法滿足生產(chǎn)需要。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種工藝簡(jiǎn)單、提取物純度較高的無(wú)患子皂苷生產(chǎn)質(zhì)控分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品制備的方法。
本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為一種無(wú)患子皂苷生產(chǎn)質(zhì)控分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品制備的方法， 該方法包括以下生產(chǎn)步驟1)將干燥的無(wú)患子果皮粉碎到5-20目，得到無(wú)患子果皮粉， 加入重量為無(wú)患子果皮粉重量1-6倍的水，在20°C -70°C的恒溫狀態(tài)下攪拌，提取2-3次， 每次提取1-9小時(shí)，過(guò)濾，合并提取液；2)用離心機(jī)分離得到上清液；3)將上清液用體積為其體積0. 9-1. 2倍的石油醚或乙醚進(jìn)行液液萃取，靜置待完全分為兩層，棄去上層液體，得下層皂苷；4)將上步得到下層液體繼續(xù)用體積為其體積1一1. 5倍的正丁醇進(jìn)行萃取，靜置待完全分為兩層，將下層棄去，上層留下；5)將上步得到的上層液體進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，待液體全部蒸發(fā)，容器內(nèi)只剩下粉末狀物質(zhì)；6)取上步得到的粉末，用水稀釋至固體濃度為1.5 — 2. ; 7)將上步液體過(guò)80目篩子以除去沉淀；8)用體積為上述液體體積1. 8-2倍體積的大孔吸附樹脂柱對(duì)其進(jìn)行吸附，具體吸附步驟為將上清液上大孔吸附樹脂柱，泵的流速根據(jù)柱壓調(diào)節(jié)，柱壓不能超過(guò)0. 4MPa，然后用去離子水洗脫大孔吸附樹脂柱至無(wú)色，所述的無(wú)色是指同步進(jìn)行薄層色譜分析直至洗脫下來(lái)的液體在平板上皂苷或糖苷部分不再顯色為止，棄去此部分洗脫液；9)再以30%-80%的乙醇或甲醇水溶液洗脫樹脂柱，至無(wú)色，所述的無(wú)色是指同步進(jìn)行薄層色譜分析直至洗脫下來(lái)的液體在平板上皂苷或糖苷部分不再顯色為止，收集洗脫液；10)將收集的洗脫液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至乙醇或甲醇揮發(fā)完全；11)將所剩余的洗脫液過(guò)80目篩子以除去沉淀，用水稀釋至固體濃度為1.5— 2. 2%；12)再將過(guò)濾后的洗脫液過(guò)MCI柱，MCI柱體積為大孔吸附樹脂柱體積的二分之一 ；13)用去離子水洗脫MCI柱，同步進(jìn)行薄層色譜分析直至洗脫下來(lái)的液體在平板上皂苷部分不再顯色為止，停止洗脫，收集洗脫液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)揮去大部分溶劑，真空干燥(溫度 50-70°C)得到含有 Mukurozioside I b 即無(wú)患子苷 I b、Mukurozioside II b 即無(wú)患子 Ρ II b、Mukurozioside I a 艮[1 ,! 子^f I a> Mukurozioside II a 艮口患 了 II a、 Mukurozioside A即無(wú)患子苷A的無(wú)患子苷類混合物質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品；14)再用20%_40%乙醇或甲醇水溶液洗脫MCI柱，同步進(jìn)行薄層色譜分析直至洗脫下來(lái)的液體在平板上皂苷部分不再顯色為止，停止洗脫，收集洗脫液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)揮去大部分溶劑，真空干燥(溫度 50_70°C)得到含有Pyishiauoside I b即皮哨子苷I b、Pyishiauoside II b即皮哨子苷 II b,PyishiauosideIVb即皮哨子苷IVb、PyishiauosideIVa即皮哨子苷IVa的皮哨子苷類混合物質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品；15)再用50%-95%乙醇或甲醇水溶液洗脫MCI柱，同步進(jìn)行薄層色譜分析直至洗脫下來(lái)的液體在平板上皂苷部分不再顯色為止，停止洗脫，收集洗脫液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)揮去大部分溶劑，真空干燥(溫度50-70°C)得到含有Sapindoside A即無(wú)患子皂苷A 、Sapindoside C 艮C、Sapindoside K 艮K、Sapindoside M 艮[1 ! 子皂苷M的三萜皂苷類混合物的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品。
無(wú)患子苷、皮哨子苷均為倍半萜糖苷類。無(wú)患子皂苷為三萜皂苷類。
上述步驟中“10)將收集的洗脫液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至乙醇或甲醇揮發(fā)完全”，是指乙醇或甲醇沸點(diǎn)較低，會(huì)先于水蒸出，比如若洗脫劑為IL 30%的乙醇或甲醇的水溶液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)時(shí)剩余液體體積小于700ml時(shí)，基本可以判斷乙醇或甲醇已蒸發(fā)完全。
所述的離心機(jī)轉(zhuǎn)速及時(shí)間為5000-10000rpm，10_30min。
所述的洗脫時(shí)去離子水及乙醇溶液的用量是以同步進(jìn)行薄層色譜分析直至洗脫下來(lái)的液體在平板上皂苷部分不再顯色為標(biāo)準(zhǔn)，此時(shí)說(shuō)明皂苷已全部被洗脫下來(lái)。
所述的大孔樹脂柱為AB_8、D101中的一種。
所述的MCI 柱為MCI GEL CHP 55A、MCI GEL CHP 55Y、MCI GEL CHP 20Y、MCI GEL CHP 20SS 或 MCI GEL CHP 20P 中的一種。
本發(fā)明與現(xiàn)有研究相比，具有以下明顯的優(yōu)勢(shì)和有益效果 1.本方法工藝簡(jiǎn)單，溶劑無(wú)毒，易回收。
2.本發(fā)明將無(wú)患子總皂苷根據(jù)其不同的性能用途進(jìn)行提取、分類，得到純度大等于97%的三個(gè)不同部分的無(wú)患子皂苷質(zhì)控品，用此三種標(biāo)準(zhǔn)品做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線可對(duì)其他產(chǎn)品中的同類物質(zhì)進(jìn)行更細(xì)致的定量，克服了以往用無(wú)患子總皂苷定量不準(zhǔn)確的缺陷，為進(jìn)一步分離出無(wú)患子皂苷單體打下基礎(chǔ)。
3.在某些特殊的情況下，若需要更高純度的分級(jí)質(zhì)控品，可將三部分洗脫液重復(fù)上MCI柱用三種溶劑反復(fù)洗脫，最后得到的產(chǎn)品純度可接近100%。
具體實(shí)施方式
下面的實(shí)施例可以使本專業(yè)的技術(shù)人員更理解本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。
一種無(wú)患子皂苷生產(chǎn)質(zhì)控分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品制備的方法，其生產(chǎn)步驟為其生產(chǎn)步驟為 1)將干燥的無(wú)患子果皮粉碎到5-20目，得到無(wú)患子果皮粉，加入重量為無(wú)患子果皮粉重量1-6倍的水，在20°C -70°C的恒溫狀態(tài)下攪拌，提取2-3次，每次提取1_9小時(shí)，過(guò)濾， 合并提取液；2)用離心機(jī)分離得到上清液；3)將上清液用體積為其體積0. 9-1. 2倍的石油醚或乙醚進(jìn)行液液萃取，靜置待完全分為兩層，棄去上層液體，得下層皂苷；4)將上步得到下層液體繼續(xù)用體積為其體積1 一 1.5倍的正丁醇進(jìn)行萃取，靜置待完全分為兩層， 將下層棄去，上層留下；5)將上步得到的上層液體進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，待液體全部蒸發(fā)，容器內(nèi)只剩下粉末狀物質(zhì)；6)取上步得到的粉末，用水稀釋至固體濃度為1. 5-2. 2%; 7)將上步液體過(guò)80目篩子以除去沉淀；8)用體積為上述液體體積1.8— 2倍體積的大孔吸附樹脂柱對(duì)上步液體進(jìn)行吸附，將上清液上大孔吸附樹脂柱，泵的流速根據(jù)柱壓調(diào)節(jié)，柱壓不能超過(guò)0. 4MPa，然后用去離子水洗脫大孔吸附樹脂柱至無(wú)色，所述的無(wú)色是指同步進(jìn)行薄層色譜分析直至洗脫下來(lái)的液體在平板上皂苷或糖苷部分不再顯色為止，棄去此部分洗脫液；9)再以30%-80%乙醇或甲醇水溶液洗脫樹脂柱，至無(wú)色，所述的無(wú)色是指同步進(jìn)行薄層色譜分析直至洗脫下來(lái)的液體在平板上皂苷或糖苷部分不再顯色為止，收集 30%-80%乙醇或甲醇水溶液洗脫液；10)將收集的洗脫液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至乙醇或甲醇揮發(fā)完全；11)將所剩余的洗脫液過(guò)80目篩子以除去沉淀；12)再將過(guò)濾后的洗脫液用水稀釋至固體濃度為1. 5—2.洲后，過(guò)MCI柱，MCI柱體積為大孔吸附樹脂柱體積的二分之一； 13)用去離子水洗脫MCI柱，同步進(jìn)行薄層色譜分析直至洗脫下來(lái)的液體在平板上皂苷部分不再顯色為止，停止洗脫，收集洗脫液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)揮去大部分溶劑(水)，真空干燥(溫度 50-70°C)得到含有 Mukurozioside I b 即無(wú)患子苷 I b、Mukurozioside II b 即無(wú)患子 Ρ II b、Mukurozioside I a 艮[1 ,! 子^f I a> Mukurozioside II a 艮口患 了 II a、 Mukurozioside A即無(wú)患子苷A的無(wú)患子苷類混合物質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品；14)再用20%_40%乙醇或甲醇水溶液洗脫MCI柱，同步進(jìn)行薄層色譜分析直至洗脫下來(lái)的液體在平板上皂苷部分不再顯色為止，停止洗脫，收集洗脫液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)揮去大部分溶劑，真空干燥(溫度 50_70°C)得到含有Pyishiauoside I b即皮哨子苷I b、Pyishiauoside II b即皮哨子苷 II b、PyishiauosideIVb即皮哨子苷IVb、PyishiauosideIVa即皮哨子苷IVa的皮哨子苷類混合物質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品；15)再用50%-95%乙醇或甲醇水溶液洗脫MCI柱，同步進(jìn)行薄層色譜分析直至洗脫下來(lái)的液體在平板上皂苷部分不再顯色為止，停止洗脫，收集洗脫液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)揮去大部分溶劑，真空干燥(溫度50-70°C)得到含有Sapindoside A即無(wú)患子皂苷 A、Sapindoside C即無(wú)患子皂苷C、Sapindoside K即無(wú)患子皂苷K、Sapindoside M即無(wú)患子皂苷M的三萜皂苷類混合物的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品。
無(wú)患子苷、皮哨子苷均為倍半萜糖苷類。無(wú)患子皂苷為三萜皂苷類。
實(shí)施例1 :1)將干燥的無(wú)患子果皮粉碎成8目的無(wú)患子果皮粉，在提取罐中加入無(wú)患子果皮粉500g加水2. 5L，在40°C的恒溫狀態(tài)下攪拌，提取8小時(shí)，過(guò)濾QO目)得提取液，在剩余的殘?jiān)性偌尤胨?L，在40°C的恒溫狀態(tài)下攪拌，提取6小時(shí)，過(guò)濾QO目)得提取液，在剩余的殘?jiān)性偌尤胨?50ml，在40°C的恒溫狀態(tài)下攪拌，提取1小時(shí)，過(guò)濾得提取液，與前兩次提取液合并；2)離心機(jī)離心分離，5000rpm工作15min，得上清液約4L ； 3)將4L上清液用4L石油醚進(jìn)行液液萃取，靜置待完全分為兩層，上層主要為脂類等雜質(zhì)， 下層主要為皂苷(約3. 5L)，棄去上層液體；4)將上步得到的3. 5L下層液體繼續(xù)用4L正丁醇進(jìn)行萃取，靜置待完全分為兩層，上層主要為皂苷，下層為糖類，將下層棄去，上層留下； 5)將上步得到的上層液體進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，待液體全部蒸發(fā)，容器內(nèi)只剩下粉末狀物質(zhì)(約 176g)，可判斷正丁醇已揮發(fā)完全，6)取上步得到的粉末20 g，用約IL水稀釋至濃度為2%， 7)將上步液體過(guò)80目篩子以除去沉淀；8)用體積為2L的大孔吸附樹脂柱(AB-8)(也可用 DlOl)對(duì)上步液體進(jìn)行吸附，將IL上清液上大孔吸附樹脂柱(泵的流速根據(jù)柱壓調(diào)節(jié)，柱壓不能超過(guò)0. 4MPa)，然后用去離子水洗脫大孔吸附樹脂柱(AB-8)至無(wú)色，所述的無(wú)色是指同步進(jìn)行薄層色譜分析直至洗脫下來(lái)的液體在平板上皂苷或糖苷部分不再顯色為止，這部分洗下的為蛋白質(zhì)和糖等雜質(zhì)，棄去此部分洗脫液；9)以60%乙醇水溶液洗脫樹脂柱，至無(wú)色，所述的無(wú)色是指同步進(jìn)行薄層色譜分析直至洗脫下來(lái)的液體在平板上皂苷或糖苷部分不再顯色為止，收集60%乙醇水溶液洗脫液；10)將收集的洗脫液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原體積35% (因乙醇沸點(diǎn)較低，會(huì)先于水蒸出，比如若洗脫劑為IL 30%酒精，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)時(shí)剩余液體體積小于700ml時(shí)，基本可以判斷乙醇已蒸發(fā)完全。)，除去乙醇；11)將剩余的洗脫液過(guò)80目篩子以除去沉淀；12)再將過(guò)濾后的洗脫液過(guò)MCI柱，MCI柱體積為1L(可以為MCI GEL CHP 55A、MCI GEL CHP 55Y、MCI GEL CHP 20Y、MCI GEL CHP 20SS 或 MCI GEL CHP 20P 中的一種);1；3)用去離子水洗脫MCI柱，同步進(jìn)行薄層色譜分析直至洗脫下來(lái)的液體在平板上皂苷部分不再顯色為止，停止洗脫，收集洗脫液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)揮去大部分溶劑，真空干燥(溫度 50-70°C)得到 6 克純度為 97% 的 Mukurozioside I b 即無(wú)患子苷 I b,Mukurozioside IIb 艮b> Mukurozioside I ει 艮I a> Mukurozioside II a 艮口患 了 II a, Mukurozioside A即無(wú)患子苷A的無(wú)患子苷類混合物質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品；14)再用30%乙醇水溶液洗脫MCI柱，同步進(jìn)行薄層色譜分析直至洗脫下來(lái)的液體在平板上皂苷部分不再顯色為止，停止洗脫，收集洗脫液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)揮去大部分溶劑，真空干燥(溫度50-70°C)得到4. 8克純度為97%的 Pyishiauoside I b即皮哨子苷I b,Pyishiauoside II b即皮哨子苷II b,PyishiauosideIVb即皮哨子苷IVb、PyishiauosideIVa即皮哨子苷IVa的皮哨子苷類混合物質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品；15)再用60%乙醇水溶液洗脫MCI柱，同步進(jìn)行薄層色譜分析直至洗脫下來(lái)的液體在平板上皂苷部分不再顯色為止，停止洗脫，收集洗脫液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)揮去大部分溶劑，真空干燥(溫度50-70°C)得到7克純度為97%的Sapindoside A即無(wú)患子皂苷A、Sapindoside C即無(wú)患子皂苷C、Sapindoside K即無(wú)患子皂苷K、Sapindoside M 即無(wú)患子皂苷M的三萜皂苷類混合物的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品。
實(shí)施例2 1)將干燥的無(wú)患子果皮粉碎成5目的無(wú)患子果皮粉，在提取罐中加入無(wú)患子果皮粉500g加水2. 5L，在40°C的恒溫狀態(tài)下攪拌，提取8小時(shí)，過(guò)濾QO目)得提取液，在剩余的殘?jiān)性偌尤胨?L，在40°C的恒溫狀態(tài)下攪拌，提取6小時(shí)，過(guò)濾QO目) 得提取液，在剩余的殘?jiān)性偌尤胨? L，在40°C的恒溫狀態(tài)下攪拌，提取1小時(shí)，過(guò)濾得提取液(約4. 3L)，與前兩次提取液合并；2)離心機(jī)離心分離，5000rpm工作15min，得上清液約4. 3L ； 3)將上清液用4. 5L乙醚進(jìn)行液液萃取，靜置待完全分為兩層，上層主要為脂類等雜質(zhì)，下層主要為皂苷，棄去上層液體；4)將上步得到的4L下層液體繼續(xù)用4L正丁醇進(jìn)行萃取，靜置待完全分為兩層，上層主要為皂苷，下層為糖類，將下層棄去，上層留下； 5)將上步得到的上層液體進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，待液體全部蒸發(fā)，容器內(nèi)只剩下粉末狀物質(zhì)(約 180g)，可判斷正丁醇已揮發(fā)完全，6)取上步得到的粉末21g，用約IL水稀釋至固體濃度為 1. 8%，7)將上步液體過(guò)80目篩子以除去沉淀；8)用體積為2L的大孔吸附樹脂柱(D101)對(duì)上步液體進(jìn)行吸附，將IL上清液上大孔吸附樹脂柱(泵的流速根據(jù)柱壓調(diào)節(jié)，柱壓不能超過(guò)0. 4MPa)，然后用去離子水洗脫大孔吸附樹脂柱至無(wú)色，所述的無(wú)色是指同步進(jìn)行薄層色譜分析直至洗脫下來(lái)的液體在平板上皂苷或糖苷部分不再顯色為止，這部分洗下的為蛋白質(zhì)和糖等雜質(zhì)，棄去此部分洗脫液；9)以60%甲醇水溶液洗脫樹脂柱，至無(wú)色，所述的無(wú)色是指同步進(jìn)行薄層色譜分析直至洗脫下來(lái)的液體在平板上皂苷或糖苷部分不再顯色為止， 收集60%甲醇水溶液洗脫液；10)將收集的洗脫液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原體積35% ；11)將剩余的洗脫液過(guò)80目篩子以除去沉淀；12)再將過(guò)濾后的洗脫液過(guò)體積為IL的MCI GEL CHP 55A 柱；1 用去離子水洗脫MCI柱，同步進(jìn)行薄層色譜分析直至洗脫下來(lái)的液體在平板上皂苷部分不再顯色為止，停止洗脫，收集洗脫液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)揮去大部分溶劑，真空干燥(溫度 50-70°C)得到 6 克純度為 97% 的 Mukurozioside I b 即無(wú)患子苷 I b、Mukurozioside IIb 艮II b、Mukurozioside I ει 艮I a> Mukurozioside II a 艮口 患了 II a, Mukurozioside A即無(wú)患子苷A的無(wú)患子苷類混合物質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品；14)再用30%甲醇水溶液洗脫MCI柱，同步進(jìn)行薄層色譜分析直至洗脫下來(lái)的液體在平板上皂苷部分不再顯色為止，停止洗脫，收集洗脫液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)揮去大部分溶劑，真空干燥(溫度50-7(TC )得到4. 7克純度為97%的 Pyishiauoside I b即皮哨子苷I b,Pyishiauoside II b即皮哨子苷II b,PyishiauosideIVb即皮哨子苷IVb、PyishiauosideIVa即皮哨子苷IVa的皮哨子苷類混合物質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品；15)再用60%甲醇水溶液洗脫MCI柱，同步進(jìn)行薄層色譜分析直至洗脫下來(lái)的液體在平板上皂苷部分不再顯色為止，停止洗脫，收集洗脫液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)揮去大部分溶劑，真空干燥(溫度50-70°C )得到6. 9克純度為97%的Sapindoside A即無(wú)患子g^fA > Sapindoside C 艮口無(wú),患子g^f C、Sapindoside K 艮口無(wú),患子g^f K、Sapindoside M即無(wú)患子皂苷M的三萜皂苷類混合物的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品。
權(quán)利要求
1.一種無(wú)患子皂苷生產(chǎn)質(zhì)控分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品制備的方法，其特征在于其生產(chǎn)步驟為1)將干燥的無(wú)患子果皮粉碎到5-20目，得到無(wú)患子果皮粉，加入重量為無(wú)患子果皮粉重量1-6 倍的水，在20°C _70°C的恒溫狀態(tài)下攪拌，提取2-3次，每次提取1-9小時(shí)，過(guò)濾，合并提取液；2)用離心機(jī)分離得到上清液；3)將上清液用體積為其體積0. 9-1. 2倍的石油醚或乙醚進(jìn)行液液萃取，靜置待完全分為兩層，棄去上層液體，得下層皂苷；4)將上步得到下層液體繼續(xù)用體積為其體積1一1.5倍的正丁醇進(jìn)行萃取，靜置待完全分為兩層，將下層棄去， 上層留下；5)將上步得到的上層液體進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，待液體全部蒸發(fā)，容器內(nèi)只剩下粉末狀物質(zhì)；6)取上步得到的粉末，用水稀釋至固體濃度為1.5—2. ; 7)將上步液體過(guò)80 目篩子以除去沉淀；8)用體積為上述液體體積1.8—2倍體積的大孔吸附樹脂柱對(duì)上步液體進(jìn)行吸附，具體吸附步驟為將上清液上大孔吸附樹脂柱，泵的流速根據(jù)柱壓調(diào)節(jié)，柱壓不能超過(guò)0. 4MPa，然后用去離子水洗脫大孔吸附樹脂柱至無(wú)色，所述的無(wú)色是指同步進(jìn)行薄層色譜分析直至洗脫下來(lái)的液體在平板上皂苷或糖苷部分不再顯色為止，棄去此部分洗脫液；9)再以30%-80%乙醇或甲醇水溶液洗脫樹脂柱，至無(wú)色，所述的無(wú)色是指同步進(jìn)行薄層色譜分析直至洗脫下來(lái)的液體在平板上皂苷或糖苷部分不再顯色為止，收集洗脫液； 10)將收集的洗脫液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至乙醇或甲醇揮發(fā)完全；11)將所剩余的洗脫液過(guò)80目篩子以除去沉淀；12)再將過(guò)濾后的洗脫液用水稀釋至固體濃度為1. 5-2. 2%，過(guò)MCI柱， MCI柱體積為大孔吸附樹脂柱體積的二分之一 ；13)用去離子水洗脫MCI柱，同步進(jìn)行薄層色譜分析直至洗脫下來(lái)的液體在平板上皂苷部分不再顯色為止，停止洗脫，收集洗脫液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)揮去大部分溶劑，真空干燥(溫度50-70°C)得到含有Mukurozioside I b 艮口 I b、Mukurozioside II b 艮II b、Mukurozioside I a 艮[1 ! + 1 I a> Mukurozioside II a 艮口II a> Mukurozioside A 艮[1 ! 子^f A ^ ! 子苷類混合物質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品；14)再用20%-40%乙醇或甲醇水溶液洗脫MCI柱，同步進(jìn)行薄層色譜分析直至洗脫下來(lái)的液體在平板上皂苷部分不再顯色為止，停止洗脫，收集洗脫液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)揮去大部分溶劑，真空干燥(溫度50-70°C)得到含有Pyishiauoside I b即皮哨子苷 I b、Pyishiauoside II b 即皮哨子苷 II b、PyishiauosideIVb 即皮哨子苷 IVb, PyishiauosideIVa即皮哨子苷IVa的皮哨子苷類混合物質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品；15)再用50%_95%乙醇或甲醇水溶液洗脫MCI柱，同步進(jìn)行薄層色譜分析直至洗脫下來(lái)的液體在平板上皂苷部分不再顯色為止，停止洗脫，收集洗脫液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)揮去大部分溶劑，真空干燥(溫度 50-70°C)得到含有Sapindoside A即無(wú)患子皂苷A、Sapindoside C即無(wú)患子皂苷C、 Sapindoside K即無(wú)患子皂苷K、Sapindoside M即無(wú)患子皂苷M的三萜皂苷類混合物的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種無(wú)患子皂苷生產(chǎn)質(zhì)控分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品的制備方法，其特征在于，所述的離心機(jī)轉(zhuǎn)速及時(shí)間為5000-10000rpm，10_30min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種無(wú)患子皂苷生產(chǎn)質(zhì)控分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品的制備方法，其特征在于，所述的大孔樹脂柱為AB-8、D101中的一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種無(wú)患子皂苷生產(chǎn)質(zhì)控分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品的制備方法，其特征在于，所述的MCI 柱為MCI GEL CHP 55A、MCI GEL CHP 55Y、MCI GEL CHP 20Y、MCI GEL CHP 20SS 或 MCI GEL CHP 20P 中的一種。
全文摘要
一種無(wú)患子皂苷生產(chǎn)質(zhì)控分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品制備的方法，其生產(chǎn)步驟加1-6倍的水，提取2-3次，合并提取液；離心得上清液；用石油醚萃取，棄上得下；用正丁醇萃取，棄下留上；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā),得粉末；用水稀釋至1.5-2.2%;用樹脂柱吸附，水洗脫至無(wú)色，棄洗脫液；再以30%-80%的乙醇或甲醇洗脫，至無(wú)色，收集洗脫液；將醇揮發(fā)完全；用水稀釋至1.5-2.2%；過(guò)MCI柱；水洗脫MCI柱，真空干燥得無(wú)患子苷的質(zhì)控品；再用20%-40%乙醇或甲醇洗脫MCI柱，真空干燥得皮哨子苷的質(zhì)控品；再用50%-95%乙醇或甲醇洗脫MCI柱，真空干燥得三萜皂苷類混合物的質(zhì)控品。為進(jìn)一步分離出無(wú)患子皂苷單體打下基礎(chǔ)。
文檔編號(hào)G01N1/28GK102494928SQ201110367768
公開(kāi)日2012年6月13日 申請(qǐng)日期2011年11月18日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月18日
發(fā)明者伍恒, 姚衛(wèi)蓉, 孫志勇, 張翠, 徐德平, 汪何雅, 翁震, 郭有枝 申請(qǐng)人:福建省源容生物科技有限公司