專利名稱：柴胡標準化提取物質量標準的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥材提取物的標準和制備方法，即柴胡標準化提取物質量標準。
背景技術：
在現有技術中，傘形科植物柴胡Bupleurum chinense DC.的干燥根，經加工制成提取物，為黃棕色粉末，氣微香，味微苦。柴胡或稱北柴胡、南柴胡。柴胡提取物的功能與主治為疏散退熱，疏肝解郁，升舉陽氣。用于感冒發熱，寒熱往來，胸肋脹痛，月經不調，月經不調子宮脫垂，脫肛。柴胡提取物市面供應大都是水提取物，柴胡皂苷在HPLC上檢測不到，其有效成分沒有定性定量標準，僅僅給出規格5 UlO 1,20 1(得粉率)，不能保證每批產品質量，作為原料藥，影響藥品產品質量。柴胡的成分主要含柴胡皂苷(a、b、c、d)等皂苷，留醇，揮發油(柴胡醇、丁香酚等)，脂肪酸(油酸、亞麻油酸、棕櫚酸、硬脂酸等)和多糖等，其中主要起治療作用的是柴胡皂苷(a、b、c、d)，具有疏散退熱，疏肝解郁，升舉陽氣的作用，可以治療感冒發熱，寒熱往來，胸肋脹痛，月經不調，月經不調子宮脫垂，脫肛等病癥，藥用價值很高。在常規提取時特別是水提取，在這種環境條件下提取，可使原生苷環氧醚鍵的斷裂，主要藥效成分柴胡皂苷(a、b、c、d)的提取率低極低，薄層檢視及HPLC檢測，幾乎沒有柴胡皂苷(a、b、c、d)的顯示斑點和特征吸收峰，主要藥效成分丟失，治病效果差。

發明內容
本發明的目的是針對上述不足而提供一種對柴胡標準化提取物中，柴胡皂苷(a、b、c、d)鑒別和含量測定技術指標控制方法，保證柴胡標準化提取物的質量而制定的質量標準。本發明的技術解決方案是柴胡提取物鑒別和含量測定指標的控制方法，其特征在于步驟如下(1)柴胡提取物制備取北柴胡粉碎成粉狀(粗粉)，加60%乙醇適量，用穩定劑(1.5% Κ0Η)調PH = 8，浸潤8h，在溫度40°C條件下，超聲(功率250W、50kHz)提取3次，每次40分鐘，每次加8倍量乙醇，用穩定劑(1.5%K0H)調PH = 8，濾過，合并濾液，回收乙醇至無醇味，濃縮至相對密度1. 10(60°C )噴霧干燥或微波真空干燥，即得。批量生產選用FGC-TQ/4/1. 6/3. 6釜罐式超聲波提取、真空濃縮成套設備。半仿生法制備柴胡標準化提取物原理，主要是在仿生物體恒定的體溫和生物體大腸生態環境PH值的條件下，結合其它工藝條件，使正交實驗環境，設定在半仿生環境下進行提取篩選。經檢測，柴胡提取物含有四個柴胡皂苷單體柴胡皂苷a、柴胡皂苷b、柴胡皂苷C、柴胡皂苷d之和> 1.874%，充分體現中藥標準化提取物嚴格的質量標準要求，除具有原植物相同作用功能，還可用于做制劑的原料藥。(2)鑒別
供試品溶液的制備取柴胡提取物0. 6g，加甲醇10ml，超聲處理2min，過濾，作為供試品溶液；柴胡皂苷對照品溶液的制備取柴胡皂苷a對照品、柴胡皂苷d對照品、柴胡皂苷b對照品、柴胡皂苷c對照品，加甲醇制成每Iml各含0. 4mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法《中國藥典》2010年版一部附錄VI B試驗，吸取上述溶液各10 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯、乙醇、水=8 2 1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%對二甲基苯甲醛的40%硫酸溶液在60°C加熱至斑點顯色清晰，分別在日光和紫外光燈365n m下檢視，供試品色譜中，在于對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的斑點或熒光斑點；(3)柴胡皂苷含量測定照高效液相色譜法《中國藥典》2010年版一部附錄VID測定；色譜條件與系統適用性試驗照柴胡項下含量測定進行；對照品溶液的制備取柴胡皂苷a對照品，柴胡皂苷d對照品、柴胡皂苷c對照品、柴胡皂苷b對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含柴胡皂苷各0. 4mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備取本品粉末約0. 6g，精密稱定，置20ml量瓶中，加甲醇至刻度，超聲10分鐘，濾過，取續濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液IOul與供試品溶液10ul，注入液相色譜儀，測定，即得；本品按干燥品計算，含柴胡皂苷a(C42H68O13)、柴胡皂苷d(C42H68O13)柴胡皂苷C、柴胡皂苷b的總量不得少于1. 30%。(4)《對照特征峰圖譜》、《特征峰吻合圖譜》測定照高效液相色譜法《中國藥典》2010年版一部附錄VID測定；色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動相A，以水為流動相B，按下表中的規定進行梯度洗脫，檢測波長為210nm，理論板數按柴胡皂苷a峰計算應不低于10000 ；
時間(分鐘)流動相A (%)流動相B (%)0 5025—9075 — 10050 昍9010參照物溶液的制備取柴胡皂苷a對照品、柴胡皂苷b對照品、柴胡皂苷c對照品、柴胡皂苷d對照品適量，精密稱定，置IOml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋成每Iml中含取柴胡皂苷a O.^ig、柴胡皂苷b 0. 5mg、柴胡皂苷c :3mg、柴胡皂苷d 0. 5mg的混合溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備取本品約0. 6g，精密稱定，置20ml量瓶中，加甲醇至刻度，超聲10分鐘，濾過，取續濾液，即得；特征圖譜測定法分別精密吸取參照物溶液和供試品溶液各20ul，注入液相色譜儀，測定，記錄55分鐘的色譜圖，即得特征圖譜；特征峰吻合圖譜測定法分別精密吸取參照物溶液和供試品溶液各10ul，混合后注入液相色譜儀，測定，記錄陽分鐘的色譜圖，即得特征峰吻合圖譜。供試品特征圖譜中應呈現4個特征峰，與參照物相應的峰為S峰，計算各特征峰與對照特征圖譜相對應峰之間的相對保留時間，在其中3個峰應分別與相應的參照物峰保留時間相同，其相對保留時間應在規定值的士5%之內；規定值為17. 133(峰1)、20. 950 (峰2)、21· 167 (峰 3)、26· 467 (峰 4)。本發明的優點是1、可以定性定量的確定柴胡提取物的主要成分，保證了柴胡提取物質量統一、可控，規范生產，確保柴胡提取物的藥品質量和療效，能有效、可靠保證柴胡提取物的產品質量，為GMP生產標準化柴胡提取物，提供了新的質量控制標準。2、本方法具有簡便、穩定、重現性好、專屬性強的特點，有利于提高檢驗效率。下面將結合實施例對本發明的實施方式作進一步詳細描述。


圖1是含量測定中供試品測定圖譜，圖2是《對照特征圖譜》，圖3是《特征峰吻合圖譜》，圖4是TLC薄層色圖。
具體實施例方式實施例1 三批穩定性放大試驗柴胡標準化提取物半仿生組合超聲制備方法取北柴胡250g粉碎成粗粉，加60%乙醇適量，用穩定劑(1. 5% Κ0Η)調PH = 8，浸潤他，在溫度40°C條件下，超聲(功率250W、50kHz)提取3次，每次40分鐘，每次加8倍量乙醇，用穩定劑(1. 5% Κ0Η)調PH = 8，濾過，合并濾液，回收乙醇至無醇味，濃縮至相對密度1. 10(60°C )噴霧干燥或微波真空干燥，即得(見表2)。三批放大實驗平均出粉率15. 35%,以柴胡皂苷abed總含量計算其提取物平均含量為1.874%、平均收率為0.288%、提取率為84. 706%。見表2。表2三批放大實驗主要工藝參數
權利要求
1.一種柴胡標準化提取物鑒別和含量測定方法，其操作步驟如下(1)取北柴胡粉碎成粉，加60%乙醇，用穩定劑調pH= 8，浸潤他，在溫度40°C條件下， 超聲提取3次，每次40分鐘，每次加8倍量乙醇，用穩定劑調pH = 8，濾過，合并濾液，回收乙醇至無醇味，在60°C下濃縮至相對密度1. 10噴霧干燥或微波真空干燥，即得；(2)鑒別供試品溶液的制備取柴胡提取物0. 6g，加甲醇10ml，超聲處理aiiin，過濾，作為供試品溶液；柴胡皂苷對照品溶液的制備取柴胡皂苷a對照品、柴胡皂苷d對照品、柴胡皂苷b對照品、柴胡皂苷c對照品，加甲醇制成每Iml各含0. 4mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法《中國藥典》2010年版一部附錄VI B試驗，吸取上述溶液各10μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯、乙醇、水=8 2 1為展開劑，展開，取出，晾干， 噴以2%對二甲基苯甲醛的40%硫酸溶液在60°C加熱至斑點顯色清晰，分別在日光和紫外光燈365n m下檢視，供試品色譜中，在于對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的斑點或熒光斑點；(3)柴胡皂苷含量測定照高效液相色譜法《中國藥典》2010年版一部附錄VID測定； 色譜條件與系統適用性試驗照柴胡項下含量測定進行；對照品溶液的制備取柴胡皂苷a對照品，柴胡皂苷d對照品、柴胡皂苷c對照品、柴胡皂苷b對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含柴胡皂苷各0. 4mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備取本品粉末約0. 6g，精密稱定，置20ml量瓶中，加甲醇至刻度，超聲10分鐘，濾過，取續濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液IOul與供試品溶液10ul，注入液相色譜儀，測定，即得；本品按干燥品計算，含柴胡皂苷a(C42H68O13)、柴胡皂苷(KC42H68O13)柴胡皂苷C、柴胡皂苷b的總量不得少于1.3%。
2.按照權利要求1所述的柴胡提取物鑒別和含量測定方法，其操作步驟包括如下《特征圖譜》、《特征峰吻合圖譜》測定照高效液相色譜法《中國藥典》2010年版一部附錄VID 測定；色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動相A， 以水為流動相B，按下表中的規定進行梯度洗脫，檢測波長為210nm，理論板數按柴胡皂苷a 峰計算應不低于10000 ；
全文摘要
本發明涉及一種中藥材標準化提取物質量控制方法，即柴胡標準化提取物質量標準。具體是北柴胡在半仿生環境下進行提取，使提取物主要藥效成分柴胡皂苷abcd含量之和≥1.874％，標準含量指標定為含量之和≥1.3％。柴胡提取物質量標準包括柴胡提取物的鑒別、柴胡皂苷含量測定和特征圖譜測定等檢測項?？梢远ㄐ裕康拇_定柴胡提取物的主要成分，保證了柴胡提取物質量統一、可控，規范生產，確保柴胡提取物的藥品質量和療效，為完整、準確評價柴胡標準化提取物質量，在試驗研究的基礎上制定了新的質量標準。本方法具有簡便、穩定、重現性好的特點，有利于提高檢驗效率。
文檔編號G01N30/90GK102565272SQ20121005229
公開日2012年7月11日 申請日期2012年3月1日 優先權日2012年3月1日
發明者婁子恒, 宿武林, 杜躍中, 楊文志, 蔡樹群 申請人:吉林人參研究院