一種改進測定托吡酯有關物質的方法
【專利摘要】本發明公開了一種改進測定托吡酯有關物質的方法，它是對托吡酯中有關物質進行歸屬研究，并且測定主成分檢測濃度與峰面積的線性關系。實驗結果表明：托吡酯有關物質檢測濃度在4～40mg/ml范圍內，隨著主成分濃度的提高，逐漸不成線性關系。因此采用自身對照法比面積歸一化法更準確可靠。
【專利說明】一種改進測定托吡酯有關物質的方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于藥物檢測【技術領域】，涉及確定藥品中有關物質檢測條件及定量方法，更具體的說是一種改進測定托吡酯有關物質的方法。
【背景技術】
[0002]癲癇(epilepsy)俗稱“羊癲瘋、羊角風”是大腦神經元突發性異常放電，導致短暫的大腦功能障礙的一種慢性疾病。而癲癇(羊癲瘋)發作(epileptic seizure)是指腦神經元異常和過度超同步化放電所造成的臨床現象。其特征是突然和一過性癥狀，由于異常放電的神經元在大腦中的部位不同，而有多種多樣的表現。抗癲癇藥物可通過兩種方式來消除或減輕癲癇發作，一是影響中樞神經元，以防止或減少他們的病理性過渡放電；其二是提高正常腦組織的興奮閾，減弱病灶興奮的擴散，防止癲癇復發。一般將60年代前合成的抗癲癇藥如:苯妥英鈉、卡馬西平、乙琥胺、丙戊酸鈉等稱為老抗癲癇藥，其中苯巴比妥、苯妥英鈉、卡馬西平、丙戊酸鈉是目前廣泛應用的一線抗癲癇藥。
[0003]托卩比酯是由美國強生制藥(Johnson&Johnson)公司開發的GABA再攝取抑制劑，1995年以商品名Topamax在英國上市，臨床用于治療成人原發性部分性癲癇。它有別于以往傳統抗癲癇藥物之處在于它首先是一個帶有磺胺基團的單糖衍生物，是一種結構全新的抗癲癇藥物。其次是具有獨特的三重作用機理:(I)選擇性阻斷鈉離子通道，限制持續重復發作；(2)增強氨基丁酸介導的神經抑制作用；(3)阻斷介導的神經興奮作用，因而具有廣譜強效的抗癲癇作用。
[0004]托卩比酯(topiramate),別名為妥泰(Topamax),化學名稱為2, 3:4，5_雙_0_ (1-甲基亞乙基)-β-D吡喃果糖氨基磺酸酯，是一個由氨基磺酸酯取代單糖的新型抗癲癇藥物。美國藥典中有關物質的檢測主要有Testl和Test2兩種方法。其中Testl是采用C18色譜柱，檢測器和柱溫為55°C，流動相為乙腈-水(50: 50)，流速為0.6ml/min進行檢測，；Test2是采用C6色譜柱，柱溫為35°C，流動相為甲醇-水(32: 68)，流速為1.5ml/min ;兩種檢測方法都采用面積歸一化計算有關物質含量。但我們的研究結果表明:采用面積歸一化法測得的雜質含量偏高。

【發明內容】

[0005]本發明的目的在于，克服現有技術存在的缺點與不足，提供一種改進托吡酯有關物質測定的方法，本發明采用美國藥典有關物質檢測的Testl，采用自身對照法計算有關物質的含量，其結果更加準確可靠。
[0006]為實現上述目的本發明公開了如下的技術內容:
[0007]—種改進測定托吡酯有關物質的方法，其特征在于按如下的步驟進行:
[0008](I)色譜條件
[0009]色譜柱為Kromasil C18 柱(250mm*4.6mm*5 μ m)；
[0010]流動相:乙腈-水的體積比為48: 52?52: 48[0011 ]流速:0.48-0.72ml/min
[0012]檢測器和柱溫:50°C；55°C ；60°C ；
[0013]配樣濃度:4_40mg/ml；
[0014]進樣體積:40-60μ I ；
[0015](2)有關物質歸屬
[0016]分別向原料藥溶液中添加硫酸鉀、雙丙酮-D-吡喃果糖、異丙醚，說明相對托吡酯保留時間0.4雜質為硫酸鹽無保留的無機離子，相對托吡酯保留時間0.9的雜質為雙丙酮-β -D-吡喃果糖，相對托吡酯保留時間2.2的雜質為異丙醚；相對托吡酯保留時間4.5的雜質歸屬采用液質聯用，測定條件除流速0.4ml/min ；
[0017](3)有關物質檢測濃度的確定
[0018]精密稱取托吡酯4000mg置IOOml量瓶中，配成濃度為40mg/ml儲備液，精密移取
l、2、3、4、5、6、7、8、9、10ml置IOml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，得濃度為4、8、12、16、20、24、28、32、36、40mg/ml 溶液，相當于檢測濃度的 10%,20%,30%,40%,50%,60%,70%,80%,90%U00%,作為供試品溶液；取50 μ I分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖；以相對托吡酯保留時間4.5雜質為例，不同檢測濃度(10?100%)按照面積歸一化法其雜質含量分別為 0.11、0.09,0.11,0.11,0.11,0.12,0.12,0.13,0.14,0.14%，而按照自身對照法其雜質含量分別為 0.10,0.09,0.10,0.10,0.09,0.10,0.10,0.10,0.10,0.10%。
[0019]本發明更加詳細的測定方法如下:
[0020]I儀器與試劑
[0021]LC-10A型高效液相色譜儀(日本Shimadzu公司)；RID_10A型示差折光檢測器(日本Shimadzu公司);SIL_10AV型自動進樣器(日本Shimadzu公司);Class_vp工作站(日本Shimadzu公司);電子天平(瑞士 Mettler toledo公司)。
[0022]托吡酯原料藥(本公司自制110601批)，乙腈(色譜純，TEDIA Company)，水為屈臣氏純凈水。
[0023]2方法與結果
[0024]2.1色譜條件
[0025]根據合成路線，首先選用美國藥典有關物質方法Testl,色譜柱為Kromasil C18柱(250mm*4.6mm*5 μ m);流動相:乙腈-水(50: 50);流速:0.6ml/min ;檢測器和柱溫:55°C ;配樣濃度:4-40mg/ml ;進樣體積:40-60 μ I。
[0026]2.2系統適用性
[0027]稱取D-吡喃果糖3mg和雙丙酮-β -D-吡喃果糖3mg置IOml量瓶中，加40mg/ml的托吡酯溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，取50 μ I注入液相色譜儀，記錄色譜圖。D-吡喃果糖、雙丙酮-β -D-吡喃果糖和托吡酯之間都能達到基線分離，見圖1，2。
[0028]2.3有關物質歸屬
[0029]分別向原料藥溶液中添加硫酸鹽、雙丙酮-β -D-吡喃果糖、異丙醚，說明相對托吡酯保留時間0.4雜質為硫酸鹽等無保留的無機離子，相對托吡酯保留時間0.9的雜質為雙丙酮-β -D-吡喃果糖，相對托吡酯保留時間2.2的雜質為異丙醚。
[0030]相對托吡酯保留時間4.5的雜質歸屬采用液質聯用，測定條件除流速0.4ml/min夕卜，其它同上，質譜圖見圖3，化學結構見圖4。[0031]由于合成路線中會產生相對托吡酯保留時間4.5的雜質，該雜質極性較小，不容易洗脫，需要強洗脫能力的乙腈配制流動相，因此選用美國藥典Testl作為有關物質液相檢測條件。
[0032]2.4有關物質檢測濃度的考察
[0033]精密稱取托吡酯4000mg置100ml量瓶中，配成濃度為40mg/ml儲備液。精密移取
l、2、3、4、5、6、7、8、9、10ml置IOml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，得濃度為4、8、12、16、20、24、28、32、36、40mg/ml 溶液(相當于檢測濃度的 10% ,20% ,30% ,40% ,50% ,60%,70%,80%,90%,100% )作為供試品溶液。取50 μ I分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結果見表1。以進樣濃度為橫坐標，相應的峰面積為縱坐標，作圖，見圖5。
[0034]表1有關物質測定不同濃度測定結果
【權利要求】
1.一種改進測定托吡酯有關物質的方法，其特征在于按如下的步驟進行: (1)色譜條件 色譜柱為 Kromasil C18 柱(250mm*4.6mm*5 μ m)； 流動相:乙腈-水的體積比為48: 52~52: 48
流速:0.48-0.72ml/min 檢測器和柱溫:50°C ；55°C ；60°C ； 配樣濃度:4-40mg/ml ； 進樣體積:40-60 μ I ； (2)有關物質歸屬: 分別向原料藥溶液中添加無機鹽、雙丙酮-β -D-批喃果糖、異丙醚，說明相對托吡酯保留時間0.4雜質為無保留的無機離子，相對托吡酯保留時間0.9的雜質為雙丙酮-β -D-吡喃果糖，相對托吡酯保留時間2.2的雜質為異丙醚；相對托吡酯保留時間4.5的雜質歸屬采用液質聯用，測定條件為流速0.4ml/min ； (3)有關物質檢測濃度的確定: 精密稱取托吡酯4000mg置100ml量瓶中，采用流動相配成濃度為40mg/ml儲備液，精密移取l、2、3、4、5、6、7、8、9、10ml置IOml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，得濃度為4、8、12、16、20、24、28、32、36、40mg/ml 溶液，相當于檢測濃度的 10%,20%,30%,40%,50%,60%、70 %、80 %、90 %、100 %，作為供試品溶液；分別各取50 μ I注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按照自身對照法檢測雜質；所述的無機鹽為硫酸鉀、硫酸鈉、氯化鉀、氯化鐵或EDTA。
【文檔編號】G01N30/02GK103630615SQ201210302454
【公開日】2014年3月12日 申請日期:2012年8月24日 優先權日:2012年8月24日
【發明者】韓建萍, 田青松, 劉穎 申請人:天津泰普藥品科技發展有限公司