一種呋喃它酮代謝物的化學發光檢測試劑盒及其應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種呋喃它酮代謝物（AMOZ）的化學發光檢測試劑盒（CLEIA），包括盒體，設在盒體內的化學發光板和設在盒體內的試劑；所述化學發光板的各孔包被有AMOZ偶聯抗原；所述試劑包括：酶標抗體濃縮液，酶標抗體稀釋液，AMOZ系列標準品溶液，化學發光底物A、B液，濃縮洗滌液，濃縮復溶液，衍生化試劑；本發明的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒具有高靈敏度、簡便快速、準確度高的特點，與傳統的ELISA法比較，操作時間大幅度減少。可用作檢測畜禽組織（肌肉、肝臟）和水產品中AMOZ殘留檢測。
【專利說明】一種呋喃它酮代謝物的化學發光檢測試劑盒及其應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種檢測呋喃它酮代謝物(AMOZ)的化學發光免疫檢測試劑盒，用于檢測畜禽組織(肌肉、肝臟)和水產品中的AMOZ含量或殘留量。屬于免疫學檢測領域。
【背景技術】
[0002]呋喃它酮屬于硝基呋喃類抗菌藥,在臨床上主要用于雞白痢、雞大腸桿菌病、雞球蟲病等各種腸道感染性疾病的治療及用作豬、禽類和水產促生長的添加劑。但有關研究證明，呋喃它酮及其代謝物具有相當大的毒性和副作用，能誘導有機體基因突變及致畸胎，且能誘發癌癥。
[0003]歐盟早在1990年就頒布2377/90/EEC條例，將硝基呋喃類藥物及其代謝物列為A類禁用藥，規定其在動物源性食品中的最高殘留量為l.0yg/kg。1995年起歐盟、日本、美國等開始禁止這類抗菌劑在食用的畜禽及水產動物中使用，并嚴格執行對輸入的食用魚、蝦及禽類進行殘留檢測。中國農業部2002年2月發布《食品動物禁用的獸藥及其他化合物清單》中，明文禁止在所有食品動物的所有用途中使用硝基呋喃類藥物。但是，由于其價格便宜，藥效好，在很多國家還在繼續違規使用。為了保障人民健康及擴大與世界各國動物源性食品貿易往來，必須對動物源性食品中呋喃它酮進行檢測。
[0004]由于呋喃它酮在體內很快就能被代謝，而在組織中結合的代謝產物(AMOZ)則能存留較長的一段時間，所以藥殘監測部門經常以檢測其代謝產物-AMOZ為手段達到檢測呋喃唑酮殘留的目的。目前，呋喃它酮檢測方法主要有微生物法、色譜法、免疫分析法等。微生物法是測定抗生素殘留的經典方法，具有前處理簡單、經濟、批量大等優點，但精確度、準確度和特異性不高。色譜法應用較普遍，精確度和靈敏度高，但因其流程繁瑣、設備昂貴、檢測速度慢等原因，很難實現現場檢測和普及推廣。酶聯免疫檢測法具有簡單、快速、處理樣本量大、靈敏度較高、特異性強等諸多優點，被廣泛應用于殘留檢測，但在實踐中很容易出現各種各樣的問題，如加樣時間是否一致，洗板是否徹底，加樣量是否一致等，導致易出現假陽性結果等缺點。
[0005]基于化學發光強度和被測物含量之問的關系建立的分析方法叫化學發光分析法。化學發光免疫分析包含兩個部分，即免疫反應系統和化學發光分析系統。化學發光免疫檢測方法具有特異性強、穩定快速、檢測范圍寬、操作簡單自動化程度高、試劑穩定且有效期長(6?18個月)等優點，其檢測限比酶聯免疫法和理化檢測方法高幾個數量級。本研究旨在建立AMOZ殘留化學發光酶聯免疫檢測試劑盒，為擁有自主知識產權檢測產品技術的開發奠定基礎。

【發明內容】

[0006]本發明的目的是提供一種AMOZ的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒。該試劑盒具有檢測靈敏度高、應用靈活、方便的特點，可用于畜禽組織、肝臟和水產品中AMOZ的殘留量檢測。[0007]為實現上述目的，本發明主要是利用抗原與抗體的特異性免疫反應的基本原理來實現的。化學發光免疫分析法是化學發光法和免疫分析法結合的產物，因此同時具有化學發光法的高靈敏性和免疫分析法的高特異性。在整個反應過程中，樣品中ΑΜ0Ζ含量越高，反應體系中發光強度越弱；反之，樣品中ΑΜ0Ζ含量越少，發光強度越高。
[0008]本發明的檢測ΑΜ0Ζ的化學發光免疫檢測試劑盒含有盒體，設在盒體內的化學發光板和設在盒體內的試劑。具體含有以下成分:
[0009]包被有ΑΜ0Ζ偶聯抗原的白色不透明96孔可拆卸或不可拆卸的聚苯乙烯化學發光板。
[0010]應用pH=7.4 0.05 mol/L的PBS溶液稀釋ΑΜ0Ζ純品得到的ΑΜ0Ζ系列標準品溶液，濃度范圍至少包含了 0.05^4.05ng/mL的濃度區間。
[0011]酶標抗體濃縮液。是由ΑΜ0Ζ與牛血清蛋白偶合制成的偶聯物作為免疫原免疫Balb/c小鼠制備獲得。
[0012]酶標抗體稀釋液。ρΗ7.6的0.01Μ的磷酸鈉、0.25Μ的NaCl溶液。
[0013]發光底物液。發光底物液分為A、B液。A液為化學發光底物-魯米諾和發光增強劑-對甲苯酚溶液，B液為過氧化氫脲溶液。
[0014]濃縮復溶液。濃縮復溶液具體為2倍濃縮磷酸鹽緩沖液，使用前用雙蒸水稀釋至工作濃度后使用，用于樣品前處理。
[0015]濃縮洗滌液。濃縮洗滌溶液具體為含有吐溫-20 (Tween-20)緩沖液的20倍濃縮磷酸鹽緩沖液，使用前用雙蒸水稀釋至工作濃度后使用，用于實驗過程中洗滌化學發光板。
`[0016]衍生化試劑。2-硝基苯甲醛。
[0017]本發明溶液的配制:
[0018]本發明試劑盒中涉及的ΑΜ0Ζ標準品溶液、酶標抗體溶液、化學發光溶液及洗滌溶液及其配方對本發明試劑盒檢測的靈敏度影響很大；其中各溶液的主要成分及其配制方法是:
[0019]1、ΑΜ0Ζ標準溶液:以常規方法將ΑΜ0Ζ純品用0.05 mol/L, pH=7.4的PBS配制成濃度分別為 0、0.05,0.15,0.45、1.35,4.05 ng/mL 的 ΑΜ0Ζ 標準溶液。
[0020]2、酶標抗體溶液:用ΑΜ0Ζ與偶聯蛋白偶聯制備的偶聯物作為免疫原免疫Balb/c小鼠制備獲得的抗體與辣根過氧化物酶偶聯制備得到，將所得酶標抗體用酶標抗體稀釋液稀釋成1:8000的工作濃度。
[0021]3、酶標抗體稀釋液:為pH7.6的磷酸鈉為0.01M、NaCl為0.25M的緩沖溶液。
[0022]4、化學發光溶液:A液為魯米諾含量為0.01M、對甲苯酚含量為0.001M pH=8.8的三(羥甲基)氨基甲烷溶液，B液為每100mL溶液含檸檬酸2.lg，無水Na2HP04 2.82g,0.75%的過氧化氫脲0.64mL的水溶液。
[0023]5、濃縮復溶工作液:NaH2P04.2Η20 5.74g、Na2HP04.12H20 32.6g 溶于 1L 的去離子水中。
[0024]6、濃縮洗滌溶液:按體積分數0.05%將吐溫-20添加至pH=7.4,0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液中。
[0025]7、包被溶液:1.59 g碳酸鈉和2.53 g碳酸氫鈉溶于1L水中，調節pH=9.5。
[0026]8、封閉溶液配制:10 g BSA溶于1L洗滌溶液中，再加入重量比為5%。的NaN3。[0027]9、衍生化試劑:15mg 2_硝基苯甲醛溶于10mL甲醛中。
[0028]本發明化學發光板的包被:
[0029]本發明中包被化學發光板采用將AM0Z偶聯抗原置于設定的包被溶液中，以設定的濃度，在37 °C恒溫箱中反應包被。
[0030]本發明采用的是pH=9.5的碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖溶液。本發明中微孔板中所包被的AM0Z偶聯抗原在堿性環境下可以很好的結合在微孔板塑料表面上，可以經受多次洗板，采用的偶聯抗原包被濃度為2.5 μ g/mL。
[0031 ] 包被好的微孔板可以用封閉溶液封閉，封閉液中惰性蛋白優選0VA，需加入NaN3防止變質。
[0032]酶標抗體溶液的制備:
[0033]本發明中酶標抗體溶液濃度是決定本發明中AM0Z酶聯免疫檢測試劑盒測定范圍及靈敏度的重要因素。
[0034]本發明中涉及的酶標抗體溶液可以用酶標抗體稀釋液稀釋成1:8000的工作濃度。
[0035]按照上述酶標抗體溶液濃度制備的試劑盒可以達到很好的線性范圍(標準線范圍可以達到0.05^4.05 ng/mL)和很好的靈敏度(IC5Q為0.198 ng/mL)。
[0036]化學發光溶液的配制: [0037]本發明采用辣根過氧化酶標記底物發光系統，主要是魯米諾-過氧化氫系統。
[0038]所述化學發光液A液為魯米諾含量為0.01M、對甲苯酚含量為0.001M pH=8.8的三(羥甲基)氨基甲烷溶液液為lOOmL溶液含檸檬酸2.lg,無水Na2HP04 2.82g，0.75%的過氧化氫脲0.64mL的水溶液。所述魯米諾為化學發光底物，對甲苯酚為發光增強劑。
[0039]本發明的原理是將抗體-抗原反應的高度特異性與酶催化的高度靈敏性結合起來，利用酶催化底物的化學發光反應檢測產物濃度。
[0040]本發明的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒具有靈敏度高、簡便快速、準確的特點，與傳統的比色ELISA法比較，靈敏度可以提高一個數量級。有望在畜禽組織(肌肉、肝臟)和水產品中的AM0Z殘留檢測中發揮重要作用。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0041]圖1為AM0Z半抗原合成反應式。
[0042]圖2為本發明化學發光反應式。
[0043]圖3為本發明化學發光試劑盒工作曲線。
【具體實施方式】
[0044]實施例1:半抗原、抗原及單克隆抗體的制備
[0045]( 1) AM0Z半抗原合成
[0046]取0.5 g ΑΜ0Ζ、0.50 g鄰苯二甲酸酐和2 mL吡啶溶于20 mL DMS0中，在60°C下攪拌反應4小時，反應完成后，加熱蒸除溶劑，柱層析純化得到鄰苯二甲酸單AM0Z酯。
[0047](2)免疫原(AM0Z-BSA)的合成
[0048]A，取6mg半抗原，溶解于lmL DMF中；[0049]B,取30mg EDC和NHS用0.2mL水充分溶解后于加入半抗原溶解液中，室溫下攪拌24 h,即可得到反應液A ;
[0050]C，稱取BSA50mg，使之充分溶解在3.8mL PBS (PH 7.2)中，將反應液A逐滴緩慢滴加到蛋白溶液中，并于室溫下攪拌24 h；
[0051]D,用0.01mol/L PBS 4?透析3d每天換3次透析液，以除去未反應的小分子物質；
[0052]E，分裝，于_20°C保存備用。
[0053]稱取半抗原6mg和OVA 50mg,按上述步驟反應制備包被抗原,供酶標用。
[0054](3) AMOZ單克隆抗體的制備
[0055]A，動物免疫:用上述制備出的免疫原(AMOZ-BSA)按100 μ g/只，以生理鹽水溶解免疫原與弗氏完全佐劑等體積混勻，頸背部皮下注射免疫61周齡Balb/c雌鼠，初次免疫后第7、14、28天以免疫原與弗氏不完全佐劑等體積混勻，各追加免疫一次，融合前3天以免疫復合物100 μ g/只，不加弗氏佐劑再追加免疫一次。
[0056]B，細胞融合:按常規方法進行，取免疫小鼠的脾細胞與處于對數生長期的小鼠骨髓瘤細胞(SP2/0)混合，然后在45秒內緩慢加入預熱的融合劑(PEG4000)進行融合，用HAT培養基懸浮均勻，再加入適量的飼養細胞，培養于96孔培養板，于37°C ,5% CO2培養箱中培養，5天后用HT培養基半換液，9天時候進行全換液。
[0057]C，雜交瘤細胞的篩選:細胞融合后，待細胞長到培養孔面積的1/4時，采用分步篩選法篩選雜交瘤細胞。初選采用間接ELISA方法，以包被抗原(預先用方陣法常規滴定其最佳包被濃度和陽性血清稀釋度)包被化學發光板，加入被測孔培養上清，孵育，清洗后加入羊抗鼠IgG-HRP和IgM-HRP，OPD進行顯色反應。篩選出的陽性孔再用間接競爭ELISA方法篩選，先將細胞上清與100 μ g/`mL的AMOZ等體積混合，37°C水浴作用30min，再加入到包被好的化學發光板中。同時用PBS取代AMOZ作對照，其余步驟同上。若經AMOZ阻斷后的0D45(lnm值下降到對照孔的50%以下，則判為陽性，經2~3次檢測都為陽性的孔，立即用有限稀釋法進行亞克隆化。
[0058]D，單克隆抗體制備:將2~3次亞克隆建株后的雜交瘤細胞擴大培養，收集上清液用間接ELISA測定效價，凍存；并取8~10周齡Balb/c小鼠腹腔注射液體石蠟0.5mL/只，7^10日后腹腔注射雜交瘤細胞廣2X106/只，7~10日后抽取小鼠腹水，離心取上清，測定效價，并凍存備用。
[0059]實施例2:酶標抗體的制備
[0060]A，稱取2 mg HRP溶解于0.5 mL雙蒸水中；加入0.5 mL新配制的0.06 mol/L NaIO4溶液，4°C避光作用30 min ；
[0061]B,加入 160 mmol/L 的乙二醇 0.5 mL,室溫作用 30 min ；
[0062]C，加入AMOZ單克隆抗體2 mg，混勻后裝入處理過的透析袋中，置1000 mL的0.05m mol/L碳酸鈉緩沖液中透析，4°C過夜；
[0063]D,透析液吸至10 mL的離心管中，加0.25mL新配的5g/L NaBH4液，混勻后置4°C 2h ;加入等體積的飽和硫酸銨溶液，4°C作用30 min,在4°C下3000 rpm離心25 min,棄上清；
[0064]E，將沉淀溶于 1.5mL 0.02 mol/L pH 7.4 PBS 中，吸入透析袋內，在0.02mol/L pH7.4 PBS透析，4°C過夜(中途更換PBS 3次)；[0065]F,將透析液中液體吸至微量離心管中，4°C下IOOOOrpm離心30 min,將上清液吸出，加等量甘油，混勻，_20°C保存備用。
[0066]實施例3 =CLEIA檢測方法的建立
[0067](I)抗體與包被抗原濃度的優選(方陣法)
[0068]縱向用每種包被抗原(AMOZ-OVA)按80.0,40.0,20.0,10.0,5.0,2.5、1.25、
0.625 μ g/mL的系列稀釋度包被化學發光板，100 μ L/孔,置于37°C恒溫箱2h后,拍干；以150 μ L/孔封閉溶液封閉，37 °C恒溫箱放置2小時,洗板一次,拍干；加入50 μ L/孔一系列稀釋的酶標AMOZ單克隆抗體(1: 1000至1:512000)，室溫(2(T25°C )孵育15min，洗板五次，最后一次拍干；分別加入50 μ L/孔的化學發光A、B液，測定發光強度值。以發光強度值隨包被抗原的濃度有明顯梯度變化的包被抗原濃度和抗體稀釋度為最佳濃度進行特異性測定。
[0069](2)抗體靈敏度的測定
[0070]根據上述對AMOZ-OVA及酶標抗體濃度的優選實驗， 申請人:選擇并確定酶標抗體濃度為1:8000，AMOZ-OVA包被濃度為2.5 μ g/mL進行抗體的靈敏度的測定:
[0071]A，包被:用0.05 M pH=9.6的碳酸鹽包被溶液將AM0Z-0VA配成2.5 μ g/mL的溶液，每個聚苯乙烯板化學發光板反應孔中加100μ L，37°C恒溫箱2h。棄去孔內溶液，拍干。
[0072]B,封閉:用封閉溶液封閉上述已包被的化學發光板，150 μ L/孔，37°C恒溫箱2h然后洗板一次，拍干。
[0073]C，加樣:加不同濃度的AMOZ標準品溶液50 μ L/孔，再加入50 μ L/孔稀釋的酶標AMOZ單克隆抗體(1:8000)于上述已封閉的反應孔中，室溫(2(T25°C)避光孵育15min，然
后洗板五次，最后一次拍干。
[0074]D，發光:于各反應孔中加入臨時配制的化學發光溶液100 μ L/孔，反應3min后用化學發光免疫分析儀檢測。
[0075]E，檢測結果以抑制率計算:
[0076]相對發光強度(％) =RLU/RLU0, RLU是標準品或者樣品溶液測定的發光強度值，RLU0是空白(濃度為O的標準溶液)的發光強度值。
[0077]計算50%抑制率時藥物的濃度即為該抗體的靈敏度。
[0078]實施例4:檢測AMOZ的化學發光酶聯免疫試劑盒
[0079](I)檢測AMOZ的化學發光酶聯免疫試劑盒的組成
[0080]A，包被有AMOZ單克隆抗體的固相載體(化學發光板)；
[0081]B, AMOZ 標準品溶液:0,0.05,0.15,0.45、1.35,4.05ng/mL。
[0082]C，濃縮酶標AMOZ單克隆抗體溶液:用AMOZ單克隆抗體與辣根過氧化物酶偶聯制備得到，使用時用稀釋液稀釋至工作濃度。
[0083]D,酶標AMOZ單克隆抗體稀釋液:磷酸鈉、NaCl緩沖溶液。
[0084]E，發光溶液:A液為魯米諾、對甲苯酚溶液，B液過氧化氫脲溶液，使用時A液、B液等體積混勻，現配現用。
[0085]F，2倍濃縮復溶液，使用時用雙蒸水稀釋至工作濃度。
[0086]G，20倍濃縮洗滌溶液:使用時用雙蒸水稀釋至工作濃度。
[0087]H，衍生化試劑:15mg 2_硝基苯甲醛溶于IOmL甲醛中。[0088](2)化學發光板的制備
[0089]用包被液將AM0Z-0VA稀釋成2.5 μ g/mL,每孔加入100 μ L，37°C恒溫箱放置2h，傾去包被液，拍干，然后每孔加入封閉液150yL，37°C恒溫箱放置2h，傾去孔內液體，洗滌液洗滌一次，拍干，用錫箔紙真空密封保存。
[0090]實施例5:檢測ΑΜ0Ζ的化學發光酶聯免疫試劑盒的應用
[0091](1)試劑的配制[0092]A，洗滌溶液:將試劑盒中提供的濃縮洗滌液用去離子水按1:19倍稀釋后使用。
[0093]B,復溶工作液:將試劑盒中提供的濃縮磷酸鹽緩沖液用去離子水按1:1倍稀釋后使用。
[0094]C，化學發光溶液:使用前將A液與B液按體積比1:1混勻。
[0095]D,酶標抗體工作液:用酶標抗體稀釋液將酶標抗體濃縮液按9:1稀釋(9份酶標抗體稀釋液+1酶標抗體濃縮液)。
[0096]E，衍生化試劑:向裝有2-硝基苯甲醛的試劑瓶中加10mL甲醇溶解混勻。
[0097]F，0.lmol/L磷酸氫二鉀溶液:稱取22.8g三水合磷酸氫二鉀加入1L去離子水溶解混勻。
[0098]G, lmol/L鹽酸溶液:量取8.3mL濃鹽酸加入去離子水定容至lOOmL。
[0099]H，lmol/L氫氧化鈉溶液:稱取4.0g氫氧化鈉加100mL去離子水溶解混勻。
[0100](2)組織、水產樣品前處理
[0101]用均質器均質樣本；稱取1.0±0.05g均質后的樣本，加入4mL去離子水、0.5mLlmol/L鹽酸溶液和100 μ L衍生化試劑，用渦旋儀渦動2min ;在37°C過夜孵育16h ;分別加入5mL 0.lmol/L磷酸氫二鉀溶液、0.4mL lmol/L氫氧化鈉溶液和5mL乙酸乙酯，用渦旋儀渦動30s ；3000 rpm以上，室溫(20~25°C)離心5min ;取2.5mL乙酸乙酯相至10mL干燥玻璃試管中，于5(T60°C水浴氮氣流下吹干；加入lmL正己烷，用渦旋儀渦動lmin，再加入lmL復溶工作液，用渦旋儀渦動30s充分混勻；3000 rpm以上，室溫(2(T25°C )離心5min ;除去上層有機相，取下層水相5θμ?用于分析。
[0102](3)檢測步驟
[0103]Α,加樣:加標準品/樣本50 μ L到對應的微孔中，再加入酶標抗體工作液50 μ L/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25°C避光環境中反應15min。
[0104]B，洗滌:小心揭開蓋板膜，將孔內液體甩干，用洗滌工作液250 μ L/孔，充分洗滌7次，每次間隔10s，用吸水紙拍干；
[0105]C，加發光溶液:每孔加入新配制的發光底物100 μ L，震蕩約30秒左右，用蓋板膜蓋板后室溫放置3min。
[0106]D，檢測:直接放入微孔板發光分析儀內測量讀數。
[0107](4)結果判斷
[0108]所獲得的標準品和樣品發光強度值的平均值除以第一個標準(0標準)的發光強度值再乘以100，以抑制率為縱坐標，ΑΜ0Ζ濃度的對數為橫坐標作標準曲線，每一個樣品的濃度可以從標準曲線上讀出。
[0109]相對發光強度(％) =RLU/RLU0, RLU是標準品或者樣品溶液測定的發光強度值，RLU0是空白(濃度為0的標準溶液)的發光強度值。[0110]實施例6:試劑盒特異性試驗
[0111]以AMOZ作為標準，設AMOZ的交叉反應率為100%，用于抗體交叉反應性研究的藥物均為與AMOZ結構或者功能相似的硝基呋喃類藥物:ΑΜ0Ζ、AOZ、AHD、SEM、呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林。按試劑盒步驟操作，但加入的競爭物分別為不同的AMOZ類似物，制作抑制曲線，根據線性方程計算各競爭物50%抑制濃度(IC5tl)。交叉反應率(％CR)即為抗體對AMOZ的IC5tl與抗體對AMOZ競爭物的IC5tl之比的百分數，按下式進行計算:
[0112]
【權利要求】
1.一種呋喃它酮代謝物的化學發光檢測試劑盒，其特征在于，包括盒體，設在盒體內的化學發光板和設在盒體內的試劑；所述化學發光板的各孔包被有呋喃它酮代謝物偶聯抗原；所述試劑包括:酶標抗體濃縮液，酶標抗體稀釋液，呋喃它酮代謝物系列標準品溶液，化學發光底物A、B液，濃縮洗滌液，濃縮復溶液、衍生化試劑。
2.根據權利要求1所述呋喃它酮代謝物的化學發光檢測試劑盒，其特征在于:所述化學發光板為乳白色不透明聚苯乙烯96孔化學發光板。
3.根據權利要求1所述呋喃它酮代謝物的化學發光檢測試劑盒，其特征在于:所述偶聯抗原包被濃度為2.5 μ g/mL。
4.根據權利要求1所述呋喃它酮代謝物的化學發光檢測試劑盒，其特征在于:所述酶標抗體的工作濃度為1:8000。
5.根據權利要求1和權利要求4所述呋喃它酮代謝物的化學發光檢測試劑盒，其特征在于:所述抗體是由呋喃它酮代謝物與牛血清蛋白偶合制成的偶聯物作為免疫原免疫Balb/c小鼠制備獲得。
6.根據權利要求1所述呋喃它酮代謝物的化學發光檢測試劑盒，其特征在于:所述呋喃它酮代謝物系列標準品溶液濃度分別為:0、0.05,0.15,0.45、1.35,4.05ng/mL。
7.根據權利要求1所述呋喃它酮代謝物的化學發光檢測試劑盒，其特征在于:所述濃縮復溶液具體為濃縮磷酸鹽緩沖液，是每升含NaH2PO4.2H20 5.74 g、Na2HPO4.12H20 32.6g的水溶液。
8.根據權利要求1所述呋喃它酮代謝物的化學發光檢測試劑盒，其特征在于:所述濃縮洗滌溶液是含有體積分數0.05%吐溫-20的pH=7.4，0.1 mo I/L磷酸鹽緩沖液.
9.根據權利要求1所述呋喃它酮代謝物的化學發光檢測試劑盒，其特征在于:所述化學發光液A液為魯米諾含量為0.01M、對甲苯酚含量為0.0OlM pH=8.8的三(羥甲基)氨基甲烷溶液液為每IOOmL溶液含檸檬酸2.lg，無水Na2HPO4 2.82g，0.75%的過氧化氫脲`0.64mL的水溶液，所述百分比為質量百分比。
【文檔編號】G01N21/76GK103698519SQ201210366092
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2012年9月28日 優先權日:2012年9月28日
【發明者】何方洋, 馮才偉, 馮月君, 楊秀賢, 崔海峰, 馮靜, 白莉, 李海靜 申請人:北京勤邦生物技術有限公司