專利名稱：一種檢測白木香是否產生沉香的方法
技術領域：
本發明屬于生物化學領域，具體涉及一種檢測白木香是否產生沉香的方法。
背景技術：
沉香(AquilariaResin、Aloeswood、Agarwood 或 Eaglewood)是具有悠久應用歷史的傳統名貴藥材以及名貴天然香料、木料。沉香入藥的歷史久遠，在中國和日本至少有3000年的歷史。《本草綱目》中記載沉香能“治上熱下寒，氣逆喘急，大腸虛閉，小便氣淋，男子精冷”。沉香性辛，微溫，無毒，具有行氣鎮痛、溫中止嘔、納氣平喘等功效，對于治療腹脹、胃寒、腎虛、氣喘有明顯療效，自古以來，沉香通常被加工成傳統中藥飲片，目前沉香是160多個中成藥的組方原料，《中國基本中成藥》中使用沉香的中成藥達47種。沉香還是一種在亞洲廣受歡迎和廣泛應用的傳統名貴香料，在熏燒時則香氣濃郁，能覆蓋其它氣味，而且留香時間甚長，是制造香精油和天然香水的高檔香料。沉香是佛教所供奉的七寶之一，象征修行者持戒清靜之香，也可以說是解脫者心靈的芳香，被作為佛部的供養香料。沉香產生于瑞香科(Thymelaeaceae)植物中，能夠產生沉香的樹種約32個，其中沉香屬(Aquilaria) 25個,擬沉香屬(Gyrinops) 7個。我國主要以白木香[Aquilariasinensis (Lour. )Gilg]為主，又名土沉香，為熱帶及亞熱帶常綠喬木，是我國產沉香的唯一植物資源，分布于我國的廣東、廣西、海南、臺灣及云南等地，也是廣東道地藥材“十大廣藥”之一。沉香樹在自然條件下正常生長，木質白色，較為柔軟，沒有香氣，不產生樹脂，在自然界，沉香樹因受到蟲蟻、傷病等損害會分泌樹脂，并浸潤、沉積于木質部中，經多年結聚而成，樹齡越長，香脂沉積越久，沉香品質越好。根據創傷能夠刺激沉香樹分泌樹脂的經驗，在生產實踐中香農往往采用砍傷法、半斷桿法、鑿洞法、火燒法等人工造香技術來刺激白木香，一般能夠導致結香。目前，經過若干年的發展，已發展了較為成熟的人工結香技術，在數個專利中也有詳述。但目前的結香技術均面臨一個重要的問題，即從外觀很難辨別白木香樹是否已經結香。傳統方法是砍下已具有黑色樹脂的心材部分，用火點燃，聞其氣味，判斷手感、質是否重。該方法具有較大的破壞性，易造成局部創面過大，雖憑經驗不會影響植株的存活，但仍無法觀察到樹干上其他部位的結香情況，同時對沉香成品的商品性就有較大的影響。

發明內容
本發明的目的是提供一種快速的、非破壞性的檢測白木香樹中是否產生沉香的方法，利用該方法通過檢測樹葉中的一種或兩種分子的含量即可確定沉香的形成情況，確定米收時間。本發明通過比較結香及未結香的白木香葉片中的化學成分含量的變化，發現了兩種化學分子的含量與沉香的形成相關，可作為白木香產生沉香的信號，為快速的、非破壞性的沉香藥材采收時間及質量評價提供依據，從而實現了本發明的目的。本發明的檢測白木香是否產生沉香的方法，其特征在于，包括以下步驟，采集白木香樹的樹葉，測定樹葉中是否含有生育酚，如果含有生育酚則該白木香樹中產生了沉香，如果不含有生育酚則該白木香樹中還沒有產生沉香；或者采集白木香樹的樹葉，陰干后，測定陰干樹葉中的角鯊烯含量，如果角鯊烯相對含量超過6%，則該白木香樹中產生了沉香，如果角鯊烯相對含量沒有超過6%則該白木香樹中還沒有產生沉香。所述的生育酚為a -生育酚、0 -生育酚和Y -生育酚中的一種或兩種或三種。本發明的測定樹葉中是否含有生育酚以及測定樹葉中的角鯊烯含量可經由氣相色譜-質聯用儀(GC-MS)進行檢測，其中生育酚還可以利用標準品進行比對的色譜方法進行測定。通過本發明的方法能快速的、在非破壞性的情況下檢測白木香是否產生沉香，不影響白木香植株的生長，不會對未來產生沉香的商品性造成破壞，可同時檢測大量樣品，對于沉香藥材標準化生產具有重要的應用價值。
具體實施例方式以下實施例是對本發明的進一步說明，而不是對本發明的限制。實施例1 :取未結香的10月齡白木香苗的葉片，陰干，粉碎(過60目篩)，得葉片粉末。取白木香的葉片粉末約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入三氯甲烷50mL，密塞搖勻，稱定重量，冷浸24h。超聲30min，放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補足減失的重量，搖勻，濾過，濾液置水浴上蒸干，殘渣加三氯甲烷使溶解，轉移至ImL量瓶中，加三氯甲烷至刻度，搖勻，用微孔濾膜過濾(0. 45 u m)，取續濾液。上樣氣相色譜-質聯用儀，色譜條件為色譜柱為Varian CPsi15CB (30mX0. 25mmX0. 25 y m)彈性石英毛細管柱；進樣口溫度250°C;載氣為高純度氮氣，流速1. OmL/min,進樣量為I y L,不分流進樣。升溫程序90°C保溫4min, 1°C /min升溫至145°C保溫30min, 2V /min升溫至180°C保溫lmin, 2V /min升溫至230°C保溫60min。質譜條件為離子源為EI ;電離能量70ev ;電離電壓1977mV，離子溫度171°C，溶劑延時4min ;質量掃描范圍50 550m/z。通過HPMSD化學工作站，應用Wileyl38質譜數據庫進行鑒定，并采用峰面積歸一化法計算各化合物的相對百分含量。結果未檢出a-生育酚、￠-生育酚、Y-生育酚，檢出角鯊烯的相對含量為
1.126%。本實施例的白木香的葉片中不含有生育酚，角鯊烯的相對含量小于6%，由此推斷，本實施例的白木香未結香，這與本實施例的白木香是未結香的白木香的結論一致。實施例2:取未結香的2年生白木香樹的葉片，含量測定方法同實施例1。結果未檢出a-生育酚、￠-生育酚、Y-生育酚，檢出角鯊烯的相對含量為
2.437%。本實施例的白木香的葉片中不含有生育酚，角鯊烯的相對含量小于6%，由此推斷，本實施例的白木香未結香，這與本實施例的白木香是未結香的白木香的結論一致。實施例3:取未結香的4年生白木香樹的葉片，含量測定方法同實施例1。

結果未檢出a-生育酚、￠-生育酚、Y-生育酚，檢出角鯊烯的相對含量為
4.197%。本實施例的白木香的葉片中不含有生育酚，角鯊烯的相對含量小于6%，由此推斷，本實施例的白木香未結香，這與本實施例的白木香是未結香的白木香的結論一致。實施例4 取未結香的10年生白木香樹的葉片，含量測定方法同實施例1。結果未檢出a-生育酚、￠-生育酚、Y-生育酚，檢出角鯊烯的相對含量為
4.803%。本實施例的白木香的葉片中不含有生育酚，角鯊烯的相對含量小于6%，由此推斷，本實施例的白木香未結香，這與本實施例的白木香是未結香的白木香的結論一致。實施例5 取未結香的15年生白木香樹的葉片，含量測定方法同實施例1。結果未檢出a-生育酚、￠-生育酚、Y-生育酚，檢出角鯊烯的相對含量為
3.825%。本實施例的白木香的葉片中不含有生育酚，角鯊烯的相對含量小于6%，由此推斷，本實施例的白木香未結香，這與本實施例的白木香是未結香的白木香的結論一致。實施例6 取4年生蟲蛀后自然結香的白木香樹的葉片，含量測定方法同實施例1。結果檢出a -生育酚、0 -生育酚、Y-生育酚及角鯊烯的相對含量分別為4. 687%、
0.582%,0. 101% 及6. 336%。本實施例的白木香的葉片中含有生育酚，角鯊烯的相對含量大于6%，由此推斷，本實施例的白木香已經產生沉香，這與本實施例的白木香是結香的白木香的結論一致。實施例7:取7年生蟲蛀后自然結香的白木香樹的葉片，含量測定方法同實施例1。結果檢出a -生育酚、P -生育酚、Y-生育酚及角鯊烯的相對含量分別為3. 126%、
1.237%,0. 107%及8. 124%。本實施例的白木香的葉片中含有生育酚，角鯊烯的相對含量大于6%，由此推斷，本實施例的白木香已經產生沉香，這與本實施例的白木香是結香的白木香的結論一致。實施例8 取35年生蟲蛀后自然結香的白木香樹的葉片，含量測定方法同實施例1。結果檢出a -生育酚、P -生育酚、Y-生育酚及角鯊烯的相對含量分別為2. 146%、
0.107%,0. 104%及10. 227%。本實施例的白木香的葉片中含有生育酚，角鯊烯的相對含量大于6%，由此推斷，本實施例的白木香已經產生沉香，這與本實施例的白木香是結香的白木香的結論一致。實施例9 取35年生刀砍(物理損傷)后結香的白木香樹葉,含量測定方法同實施例1。結果檢出a -生育酚、P -生育酚、Y-生育酚及角鯊烯的相對含量分別為0. 716%、
1.794%、1. 835%及7. 495%。本實施例的白木香的葉片中含有生育酚，角鯊烯的相對含量大于6%，由此推斷，本實施例的白木香已經產生沉香，這與本實施例的白木香是結香的白木香的結論一致。實施例10 取6年生人工接種鐮刀菌(Fusarium sp.)后結香的白木香樹的葉片,含量測定方法同實施例1。結果檢出a -生育酚、0 -生育酚、Y -生育酚及角鯊烯的相對含量分別為5. 632%、0.709%,2. 195%及15. 427%。本實施例的白木香的葉片中含有生育酚，角鯊烯的相對含量大于6%，由此推斷，本實施例的白木香已經產生沉香，這與本實施例的白木香是結香的白木香的結論一致。
權利要求
1.一種檢測白木香是否產生沉香的方法，其特征在于，包括以下步驟，采集白木香樹的樹葉，測定樹葉中是否含有生育酚，如果含有生育酚則該白木香樹中產生了沉香，如果不含有生育酚則該白木香樹中還沒有產生沉香；或者采集白木香樹的樹葉，陰干后，測定陰干樹葉中的角鯊烯含量，如果角鯊烯相對含量超過6%，則該白木香樹中產生了沉香，如果角鯊烯相對含量沒有超過6%則該白木香樹中還沒有產生沉香。
2.根據權利要求1所述的檢測白木香是否產生沉香的方法，其特征在于，所述的生育酚為a-生育酚、0 -生育酚和Y-生育酚中的一種或兩種或三種。
3.根據權利要求1所述的檢測白木香是否產生沉香的方法，其特征在于，所述的測定樹葉中是否含有生育酚以及測定陰干樹葉中的角鯊烯含量是經由氣相色譜-質聯用儀進行檢測。
4.根據權利要求1所述的檢測白木香是否產生沉香的方法，其特征在于，所述的測定樹葉中是否含有生育酚是利用標準品進行比對的色譜方法進行測定。
全文摘要
本發明公開了一種檢測白木香是否產生沉香的方法。它是采集白木香樹的樹葉，測定樹葉中是否含有生育酚，如果含有生育酚則該白木香樹中產生了沉香，如果不含有生育酚則該白木香樹中還沒有產生沉香；或者采集白木香樹的樹葉，陰干后，測定陰干樹葉中的角鯊烯含量，如果角鯊烯相對含量超過6%，則該白木香樹中產生了沉香，如果角鯊烯相對含量沒有超過6%則該白木香樹中還沒有產生沉香。通過本發明的方法能快速的、在非破壞性的情況下檢測白木香是否產生沉香，不影響白木香植株的生長，不會對未來產生沉香的商品性造成破壞，可同時檢測大量樣品，對于沉香藥材標準化生產具有重要的應用價值。
文檔編號G01N30/02GK103063773SQ20121057604
公開日2013年4月24日 申請日期2012年12月26日 優先權日2012年12月26日
發明者王磊, 高曉霞, 章衛民, 潘清靈, 吳關慶 申請人:廣東省微生物研究所