一種檢測TORCHIgM抗體的方法及試劑盒和該試劑盒的制備方法

文檔序號：6235655閱讀：694來源：國知局

一種檢測TORCH IgM抗體的方法及試劑盒和該試劑盒的制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種檢測TORCH?IgM抗體的試劑盒，所述試劑盒包括：包被有與TORCH?IgM抗體結合的抗體的固相載體，鑭系元素標記的TORCH抗原，TORCH?IgM抗體校準品，樣本稀釋液，實驗緩沖液，濃縮洗液以及增強液。本發明所述試劑盒能夠在相對同一檢測條件下同時檢測TORCH病原體中多種病原體IgM抗體，靈敏度高，特異性強，精密度好，準確度高，用血量少，快速方便，有利于TORCH病原體感染的早期診斷；本方法又具有檢測線性范圍寬的特點，可以減少高值樣本的稀釋次數或稀釋倍數，可以提高檢測結果的準確性。
【專利說明】-種檢測TORCH I gM抗體的方法及試劑盒和該試劑盒的制備方法

【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種TORCH IgM抗體的方法及試劑盒，具體涉及一種基于多元標記時間分辨熒光免疫法檢測TORCH IgM抗體的方法及試劑盒和該試劑盒的制備方法。

【背景技術】
[0002] TORCH -詞是美國學者Nahmias等于1971年將數種孕婦患病后將引起子宮內胚胎（胎兒）感染引發流產、甚至造成先天缺陷或發育異常的病原體英文名詞的第一個字母組合而成。是指一組病原體：T即剛地弓形蟲（Toxoplasma) ;0即others,比如乙型肝炎病毒、HIV病毒、梅毒螺旋體等；R即風疫病毒（Rubellavirus) ;C即巨細胞病毒 (Cytomegalovirus) ;H 即單純皰疫病毒（herpes simplex virus)。
[0003] 上述四種病原體具有以下幾個共同點：1.可以通過胎盤垂直傳播，引起胎兒宮內感染。2.宮內感染后可能導致流產、早產、死胎和畸形。3.病原體感染對胎兒造成的危害，與孕婦感染的孕齡相關。
[0004] TORCH綜合征患者造成孕婦流產、死胎，出生后有嚴重的智力障礙，生活不能自理，造成極大的精神及經濟負擔。我國每年約有26000個TORCH患兒出生，平均每小時就有3 人，對優生優育與人口素質構成極大的威脅，因此它的感染診治工作引起普遍關注。
[0005] TORCH感染是嚴重危害新生兒健康的重要因素之一。可導致多器官損害及一系列嚴重后遺癥。因此，為減少病殘兒的出生率及提高出生人口素質，臨床工作者應進一步加強對孕婦的宣傳教育，積極做好TORCH感染的血清學篩查以便及早發現不良妊娠并及時處理。對新生兒也應常規開展TORCH檢測，了解新生兒TORCH感染情況，以便早干預、早治療。 TORCH感染的血清學篩查對優生優育具有重要現實意義。
[0006] TORCH抗體檢測試劑是指一類利用免疫學方法，如酶免疫技術、化學發光免疫分析技術等，對育齡婦女、孕婦血清或血漿樣本中，TORCH特異性抗體進行體外定性和/或半定量和/或定量檢測的試劑。結合臨床表現和其他實驗室指標，可作為TORCH感染輔助診斷的指標之一，用于治療方案的制定及免疫狀態的評估。
[0007] TORCH抗體檢測試劑，主要檢測的Ig為病原體特異性IgG和IgM。在病原體感染的初次體液免疫應答中（原發性感染），特異性IgM抗體首先出現，但其普遍反應短暫，一般幾周后即不易再測到。病原體特異性IgM抗體陽性常提示早期感染，可用于感染急性期的輔助判斷。特異性IgG抗體，在免疫接種后、原發性感染及再次感染時都可檢出，且長時間存在。
[0008] 實時熒光定量PCR能早期、靈敏地檢測到TORCH病原體DNA/RNA，并可對抗TORCH 病原體治療的效果監測，但是TORCH病原體DNA/RNA陽性只能反映 TORCH病原體某一片段的存在，不能準確反映 TORCH病原體活動狀態，對亞臨床型或潛伏型感染，實時熒光定量 PCR結果可為陽性。
[0009] 目前用于檢測TORCH IgM抗體常分別采用單一試劑盒，即一個試劑盒僅能檢測 TORCH病原體中的一種病原體的IgM抗體，此種方式存在以下缺點：1.檢測步驟繁多，特別是手工法容易導致實驗出現錯誤；2.加樣時間長，檢測時間長，費時費力；3.樣本需要量大，導致采血量增加。
[0010] 目前常用免疫方法有放射免疫分析法（radioimmunoassay, RIA)、酶聯免疫吸附測定法（enzyme-linked immunosorbent assay， ELISA)、化學發光免疫分析法（chemiluminescent immunoassay, CLIA)、電化學發光免疫分析法 (electro-chemiluminescence immunoassay，ECLI)等。RIA 由于放射性污染，對環境和操作者影響較大，批內批間變異較大，難于自動化；ELISA采用大分子酶標記，且酶容易失活，這種依靠比色法或偏振光法的檢測技術所受的干擾因素太多（即使是優秀的"管式ELISA"，其試管形狀的變化也會影響試驗的結果），其靈敏度、線性和穩定性未能高于 RIA ;CLIA的化學發光通常是瞬間完成，發光峰值很快衰減，溫度和pH值對發光有很大影響，該類因素影響了該類方法的應用；ECLI仍為非開放系統，試劑依賴進口，試劑昂貴，維修及檢測成本高，這也限制了其推廣應用。由于時間分辨熒光免疫法（time-resolved fluoroisnmunoassay，TRFIA)獨特的技術原理，有區別于傳統的免疫標記技術的特點和優勢，已被人們廣泛接受，與現在廣泛使用的RIA、ELISA、CLIA和ECLI相比，TRFIA克服了 RIA 放射性污染的不足、酶標記物的不穩定性和定量范圍窄的缺陷、化學發光僅能一次發光、一般熒光標記受環境干擾的難點和ECLI的非直接標記等缺點，Eu標記TRFIA的靈敏度可達l(T 19m〇l/L，應用范圍廣，致使其試劑盒的生產和檢測儀器的更新換代進展甚速，目前已實現了分析技術的自動化，TRFIA已成為生物醫學研究和臨床超微量生化檢驗中一項最有發展前景的分析手段。

【發明內容】

[0011] 本發明的目的在于克服現有技術存在的不足之處而提供了一種基于多元標記時間分辨熒光免疫法檢測TORCH IgM抗體的試劑盒，以及所述試劑盒的制備方法，本發明還提供了采用所述試劑盒檢測TORCH IgM抗體的方法。本發明建立了定量測定TORCH病原體中多種病原體IgM抗體的時間分辨突光免疫多兀標記捕獲法，同時提供了一種能夠在相對同一檢測條件下同時檢測TORCH病原體中多種病原體IgM抗體的定量測定試劑盒，所述TORCH 病原體包括弓形蟲、風疹病毒、巨細胞病毒、單純皰疹病毒，其中所述單純皰疹病毒為單純皰疹病毒I型和單純皰疹病毒Π 型中的至少一種。
[0012] 為實現上述目的，所采取的技術方案：一種檢測TORCH IgM抗體的試劑盒，所述試劑盒包括：包被有與TORCH IgM抗體結合的抗體的固相載體，鑭系元素標記的TORCH抗原， TORCH IgM抗體校準品，樣本稀釋液，實驗緩沖液，濃縮洗液以及增強液。
[0013] 優選地，所述包被有與TORCH IgM抗體結合的抗體的固相載體為包被有鼠抗人 IgM μ鏈單克隆抗體的固相載體。
[0014] 優選地，所述包被有鼠抗人IgMy鏈單克隆抗體的固相載體是采用以下步驟制備而得的：
[0015] 將鼠抗人IgM μ鏈單克隆抗體用包被緩沖液稀釋至0. 01?10 μ g/mL，在固相載體上進行包被，將固相載體洗滌1次，然后再用含1% BSA的50mmol/L、pH7. 8的Tris-HCl緩沖液進行封閉，將固相載體甩干，晾干，真空包裝，2?8°C保存備用。
[0016] 優選地，所述鑭系元素標記的TORCH抗原為鑭系元素1標記的弓形蟲抗原、鑭系元素2標記的風疹病毒抗原、鑭系元素3標記的巨細胞病毒抗原和鑭系元素4標記的單純皰疹病毒抗原的組合，所述鑭系元素1、鑭系元素2、鑭系元素3、鑭系元素4分別選自銪、釤、鏑和鋱中的一種，且所述鑭系元素1、鑭系元素2、鑭系元素3、鑭系元素4互不相同；所述鑭系元素標記的TORCH抗原中TORCH抗原為TORCH天然抗原和TORCH重組抗原中的至少一種。
[0017] 優選地，所述鑭系元素4標記的單純皰疹病毒抗原中單純皰疹病毒抗原為單純皰疹病毒I型抗原和單純皰疹病毒Π 型抗原中的至少一種。
[0018] 優選地，所述鑭系元素4標記的單純皰疹病毒抗原中單純皰疹病毒抗原為單純皰疹病毒Ι+Π 型重組抗原。所述單純皰疹病毒I+II型重組抗原上同時含有單純皰疹病毒I 型抗原和單純皰疹病毒Π 型抗原。
[0019] 優選地，所述鑭系元素標記的TORCH抗原是參照相應的鑭系元素標記試劑盒說明書制備而成的。
[0020] 本發明還提供了一種采用上述所述試劑盒檢測TORCH IgM抗體的方法，所述方法包括以下步驟：
[0021] (1)用實驗緩沖液配制鑭系元素標記的TORCH抗原，用純化水將濃縮洗液稀釋成工作洗滌液；
[0022] (2)將待檢樣本用樣本稀釋液稀釋，然后在包被有與TORCH IgM抗體結合的抗體的固相載體上預設的校準品孔、樣本孔相應位置分別加入TORCH IgM抗體校準品、預先稀釋好的待檢樣本；
[0023] (3)將步驟（2)中得到的固相載體在室溫條件下緩慢振蕩孵育；
[0024] (4)用步驟⑴中工作洗滌液洗滌步驟（3)中孵育后的固相載體；
[0025] (5)分別向步驟（4)中獲得的固相載體上校準品孔和樣本孔中加入步驟⑴中配制好的鑭系元素標記的TORCH抗原，在室溫下孵育；
[0026] (7)用步驟⑴中工作洗滌液洗滌步驟（5)中孵育后的抗原固相載體；
[0027] (8)分別向步驟（7)中獲得的固相載體上校準品孔和樣本孔中加入增強液的共解離劑部分，繼續孵育，再加入增強液的共增強劑；
[0028] (9)孵育結束后，采用相應的鑭系元素窗口程序進行檢測并分析。
[0029] 優選地，所述步驟（2)中包被有與TORCH IgM抗體結合的抗體的固相載體為包被有鼠抗人IgMy鏈單克隆抗體的固相載體；所述步驟⑴中鑭系元素標記的TORCH抗原為鑭系元素1標記的弓形蟲抗原、鑭系元素2標記的風疹病毒抗原、鑭系元素3標記的巨細胞病毒抗原和鑭系元素4標記的單純皰疹病毒抗原的組合，所述鑭系元素1、鑭系元素2、鑭系元素3、鑭系元素4分別選自銪、釤、鏑和鋱中的一種，且所述鑭系元素1、鑭系元素2、鑭系元素3、鑭系元素4互不相同；所述步驟（1)中鑭系元素標記的TORCH抗原中TORCH抗原為 TORCH天然抗原和TORCH重組抗原中的至少一種。
[0030] 本發明還提供了一種上述所述試劑盒的制備方法，所述制備方法包括以下步驟：
[0031] (1)制備包被有與TORCH IgM抗體結合的抗體的固相載體，鑭系元素標記的TORCH 抗原，TORCH IgM抗體校準品，樣本稀釋液，實驗緩沖液，濃縮洗液以及增強液；
[0032] (2)貼標簽；
[0033] (3)組裝為試劑盒。
[0034] 本發明的有益效果在于：在TORCH病原體感染的初次體液免疫應答中（原發性感染），特異性IgM抗體首先出現，但其普遍反應短暫，一般幾周后即不易再測到。病原體特異性IgM抗體陽性常提示早期感染，檢測TORCH病原體特異性IgM抗體可用于TORCH病原體感染急性期的輔助判斷。
[0035] 本發明采用鼠抗人IgMy鏈單克隆包被固相載體，避免了以往的IgM抗體試劑采用間接法檢測IgM抗體時因同型抗體間對抗原位點的競爭而導致敏感性差的問題，也避免如類風濕因子（rheumatoid factor, RF)等引起的非特異性反應。
[0036] 本發明采用時間分辨熒光免疫法多元標記技術，研制了一種能夠在相對同一檢測條件下同時檢測TORCH病原體中多種病原體IgM抗體的定量測定試劑盒，降低了由于人為原因造成的檢測誤差，減少了操作人員的工作量，也減少了樣本用量。妊娠期發生初次感染或復發感染，體內產生IgG或IgM是一個急劇變化的過程，只有通過定量分析濃度變化才能檢測到。定量分析有助于發現假陽性或假陰性結果。對于那些孕前未做過基礎免疫狀況評估的孕婦，選擇兩個時間點（T1，T2)檢測IgG或IgM濃度（C1，C2)，計算單位時間內濃度變化梯度，能有效的發現機體受到病毒攻擊而發生的特異性免疫反應，但目前還沒有參考值，較為常用的是C2/C1 > 4倍。所有這些必須以定量檢測為前提。
[0037] 本發明所述試劑盒能夠在相對同一檢測條件下同時檢測TORCH病原體中多種病原體IgM抗體，靈敏度高，特異性強，精密度好，準確度高，用血量少，快速方便，有利于 TORCH病原體感染的早期診斷；本方法又具有檢測線性范圍寬的特點，可以減少高值樣本的稀釋次數或稀釋倍數，可以提高檢測結果的準確性。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0038] 圖1為采用本發明所述試劑盒檢測TORCH病原體IgM抗體時同一檢測微孔內反應體系的一種實施例的原理不意圖；
[0039] 圖中1為鼠抗人IgMy鏈單克隆抗體,2為為弓形蟲病毒IgM抗體,3為風疫病毒 IgM抗體,4為巨細胞病毒IgM抗體,5為單純皰疫病毒IgM抗體,6為銪（Eu3+)標記的弓形蟲重組抗原，7為杉（Sm 3+)標記的風疫病毒重組抗原,8為鏑（Dy3+)標記的巨細胞病毒重組抗原，9為鋱（Te 3+)標記的單純皰疹病毒I+II型重組抗原。

【具體實施方式】
[0040] 為更好的說明本發明的目的、技術方案和優點，下面將結合具體實施例對本發明作進一步說明。實施例中的鼠抗人IgMy鏈單克隆抗體、弓形蟲重組抗原、弓形蟲天然抗原、風疹病毒重組抗原、風疹病毒天然抗原、巨細胞病毒天然抗原、巨細胞病毒重組抗原、單純皰疹病毒I型天然抗原、單純皰疹病毒I型重組抗原、單純皰疹病毒II型天然抗原、單純皰疹病毒II型重組抗原、單純皰疹病毒I+II型重組抗原購于深圳市菲鵬生物股份有限公司；固相載體為96孔微孔空白板（8X12孔）購于深圳市金燦華實業有限公司；銪（Eu 3+) 標記試劑盒、釤（Sm3+)標記試劑盒、鏑（Dy3+)標記試劑盒和鋱（Te 3+)標記試劑盒購于芬蘭 Wallac公司；瓊脂糖凝膠Sepharose CL-6B購于瑞典Pharmacia公司；人類優生優育病毒 (TORCH)系列檢測試劑盒（酶聯免疫法）由德國維潤賽潤研發有限公司提供；共熒光增強液、濃縮洗液、實驗緩沖液、FWZ- I型微量振蕩儀、DEM- III型全自動酶標洗板均由廣州市豐華生物工程有限公司提供。VictorTM2D1420型TRFIA儀購于美國Perkin Elmer公司。其他試劑為國產分析純。所述單純皰疹病毒I+II型重組抗原上同時含有單純皰疹病毒I型抗原和單純皰疹病毒II型抗原。
[0041] 實施例1
[0042] 本發明所述檢測TORCH IgM抗體的試劑盒的一種實施例，所述試劑盒包括：包被有鼠抗人IgMy鏈單克隆抗體的固相載體，銪（Eu3+)標記的弓形蟲重組抗原，釤（Sm 3+)標記的風疹病毒重組抗原，鏑（Dy3+)標記的巨細胞病毒重組抗原，鋱（Te3+)標記的單純皰疹病毒 I型重組抗原，TORCH IgM抗體校準品，樣本稀釋液，實驗緩沖液，濃縮洗液以及增強液；所述增強液為共熒光增強液。
[0043] 本發明所述檢測TORCH IgM抗體的試劑盒的制備方法，包括以下步驟：
[0044] (1)包被有鼠抗人IgMy鏈單克隆抗體的固相載體：將鼠抗人IgMy鏈單克隆抗體用包被緩沖液稀釋至〇. 01?10 μ g/mL，在固相載體上進行包被，將固相載體洗滌1次，然后再用含1% BSA的50mmol/L pH 7. 8的Tris-HCl緩沖液進行封閉，將固相甩干，晾干，真空包裝，2?8°C保存備用。所述包被緩沖液為50mmol/L pH 9. 6的碳酸緩沖液，20mmol/L pH 4. 5的磷酸鹽緩沖液，50mmol/LpH 7. 8的Tris-HCl緩沖液和50mmol/L pH 4. 5的檸檬酸鹽緩沖液中的一種。
[0045] TORCH IgM抗體校準品為TORCH病原體IgM抗體混合校準品，采用廠商選定測量程序校準，將TORCH病原體IgM抗體原料用含有10g/L BSA的50mmol/L pH 7. 8的Tris-HCl 緩沖液稀釋成A、B、C、D、E和F 6個校準品。由于目前尚無弓形蟲IgM抗體正式的國際標準品和定量的國家標準品，弓形蟲IgM抗體校準品采用德國維潤賽潤研發有限公司的弓形蟲IgM抗體定量檢測試劑盒（酶聯免疫法）及酶標儀組成的測量程序標化，所述弓形蟲IgM 抗體在A、B、C、D、E和F 6個校準品中的濃度分別為0,2,8,32，128, 256U/mL。由于目前尚無風疫病毒IgM抗體正式的國際標準品和定量的國家標準品，風疫病毒IgM抗體校準品采用德國維潤賽潤研發有限公司的風疹病毒IgM抗體定量檢測試劑盒（酶聯免疫法）及酶標儀組成的測量程序標化，所述風疹病毒IgM抗體在A、B、C、D、E和F 6個校準品中的濃度分別為0, 2,8, 32,128, 256U/mL。由于目前尚無巨細胞病毒（CMV) IgM抗體國際標準品和定量的國家標準品，巨細胞病毒IgM抗體校準品采用德國維潤賽潤研發有限公司的巨細胞病毒 IgM抗體定量檢測試劑盒（酶聯免疫法）及酶標儀組成的測量程序標化，所述巨細胞病毒 IgM抗體在A、B、C、D、E和F 6個校準品中的濃度分別為0,2,8,32，128,256 U/mL。由于目前尚無單純皰疹病毒（HSV) IgM國際標準品和定量的國家標準品，單純皰疹病毒I型IgM抗體校準品以德國維潤賽潤研發有限公司的單純皰疹病毒I型IgM抗體定量檢測試劑盒（酶聯免疫法）及酶標儀組成的測量程序標化，所述單純皰疹病毒I型IgM抗體在A、B、C、D、E 和F6個校準品中的濃度分別為0, 2,8, 32,128, 256U/mL。
[0046] 銪（Eu3+)標記的弓形蟲重組抗原：按照銪（Eu3+)標記試劑盒說明書操作。將1. Omg 的弓形蟲抗原加入Millipore公司的截留分子量為10000的超濾離心管中，8000r/min離心5?6min，再用標記緩沖液重復離心洗滌3?5次，將處理得到的200 μ L弓形蟲抗原加入到1. 〇mg的預先用標記緩沖液溶解的銪（Eu3+)標記試劑DTTA-EuNa充分混勻，2?8°C振蕩孵育24?72h。反應液經分別用50mmol/L pH 7. 80Tris_HCl緩沖液平衡的Sepharose CL-6B柱（lcmX4〇Cm)層析，在A280下監測收集第一洗脫峰。然后采用棋盤方陣滴配法確定最適工作濃度，然后用含有〇· 2%BSA、30ppm Procline-300 的ρΗ7· 8 的 50mmol/L Tris-HCl 緩沖液稀釋成最適工作濃度的1/20倍即為所述銪（Eu3+)標記的弓形蟲重組抗原。
[0047] 釤（Sm3+)標記的風疹病毒重組抗原：按照釤（Sm3+)標記試劑盒說明書操作。將 1. 〇mg的風疹病毒重組抗原加入Millipore公司的截留分子量為10000的超濾離心管中， 8000r/min離心5?6min，再用標記緩沖液重復離心洗漆3?5次，將處理得到的200 μ L風疹病毒重組抗原加入到1. Omg的預先用標記緩沖液溶解的釤（Sm3+)標記試劑DTTA-SmNa充分混勻，2?8°C振蕩孵育24?72h。反應液經分別用50mmol/L pH 7. 80Tris-HCl緩沖液平衡的Sepharose CL-6B柱（lcmX40cm)層析，在A280下監測收集第一洗脫峰。然后采用棋盤方陣滴配法確定最適工作濃度，然后用含有〇. 2% BSA、30ppm Procline-300的pH7. 8 的50mmol/L Tris-HCl緩沖液稀釋成最適工作濃度的1/20倍即為所述釤（Sm3+)標記的風疹病毒重組抗原。
[0048] 鏑（Dy3+)標記的巨細胞病毒重組抗原：按照鏑（Dy3+)標記試劑盒說明書操作。將 1. Omg的巨細胞病毒重組抗原加入Millipore公司的截留分子量為10000的超濾離心管中， 8000r/min離心5?6min，再用標記緩沖液重復離心洗漆3?5次，將處理得到的200μ L 巨細胞病毒抗原加入到l.Omg的預先用標記緩沖液溶解的鏑（Dy3+)標記試劑DTTA-DyNa充分混勻，2?8°C振蕩孵育24?72h。反應液經分別用50mmol/L pH 7. 80Tris-HCl緩沖液平衡的Sepharose CL-6B柱（lcmX40cm)層析，在A280下監測收集第一洗脫峰。然后采用棋盤方陣滴配法確定最適工作濃度，然后用含有〇. 2% BSA、30ppm Procline-300的pH7. 8 的50mmol/L Tris-HCl緩沖液稀釋成最適工作濃度的1/20倍即為所述鏑（Dy3+)標記的巨細胞病毒重組抗原。
[0049] 鋱（Te3+)標記的單純皰疹病毒I型重組抗原：按照鋱（Te3+)標記試劑盒說明書操作。將1. Omg的單純皰疹病毒重組抗原加入Millipore公司的截留分子量為10000的超濾離心管中，8000r/min離心5?6min，再用標記緩沖液重復離心洗滌3?5次，將處理得到的200 μ L單純皰疹病毒抗原加入到1. Omg的預先用標記緩沖液溶解的Te3+標記試劑DTTA-TeNa充分混勻，2?8°C振蕩孵育（24?72)h。反應液經分別用50mmol/L pH 7. 80Tris-HCl緩沖液平衡的S印harose CL-6B柱（lcmX40cm)層析，在A280下監測收集第一洗脫峰。然后采用棋盤方陣滴配法確定最適工作濃度，然后用含有0.2% BSA、 30ppmProcline-300的ρΗ7· 8的50mmol/L Tris-HCl緩沖液稀釋成最適工作濃度的1/20倍即為所述鋱（Te3+)標記的單純皰疹病毒I型重組抗原。
[0050] 樣本稀釋液：在潔凈容器中準確加入6. 06g三羥甲基氨基甲烷（Tris)，8. 50g氯化鈉，加入適量的純化水攪拌溶解后，加入3mL濃鹽酸混勻，再向其中加入20mg硫柳汞，lmL Procline-300,50g牛血清白蛋白（BSA)，攪拌溶解后，加純化水至1000mL。
[0051] 實驗緩沖液：在潔凈容器中準確加入6. 06g三羥甲基氨基甲烷（Tris)，8. 50g氯化鈉，加入適量的純化水攪拌溶解后，加入3mL濃鹽酸混勻，再向其中加入0. 05g曙紅、5g聚乙二醇 2000、0· Olmg EDTA、20mg 硫柳汞、lmLProcline-300、100mL 小牛血清、6mL Tween20,攪拌溶解后，加純化水至l〇〇〇mL ;分裝成30mL/瓶。
[0052] 濃縮洗液：在潔凈容器中準確加入6.06g三羥甲基氨基甲烷（Tris)，8.50g氯化鈉，加入適量的純化水攪拌溶解后，加入3mL濃鹽酸混勻，再向其中加入20mg亮藍、4mL Tween20、lmL Procline-300,攪拌溶解后，加純化水至lOOOmL ;分裝成40mL/瓶。
[0053] 共熒光增強液：共熒光增強液含有共解離劑和共增強劑，共解離劑為在潔凈容器中準確加入120 μ mol精對苯二甲酸（PTA)、10 μ mol氧化釔用300mL的乙醇溶解，加入適量的純化水混勻，然后加入0. 5mL曲拉通-100、0. 8mL冰乙酸、0. 5g乙酸鈉后充分溶解,用純化水定容至l〇〇〇mL。共增強劑為在潔凈容器中準確加入0. 5mmol鄰菲羅啉、0. 2mol三羥甲基氨基甲烷（Tris)，加入適量的純化水攪拌溶解后，再用純化水定容至1000mL ;分裝成40mL/ 瓶。
[0054] (2)貼標簽。
[0055] (3)成品組裝。
[0056] 實施例2
[0057] 本發明所述檢測TORCH IgM抗體的試劑盒的一種實施例，所述試劑盒包括：包被有鼠抗人IgMy鏈單克隆抗體的固相載體，鋱（Te3+)標記的弓形蟲重組抗原，鏑（Dy 3+)標記的風疹病毒重組抗原，釤（Sm3+)標記的巨細胞病毒重組抗原，銪（Eu3+)標記的單純皰疹病毒 II型重組抗原，TORCH IgM抗體校準品，樣本稀釋液，實驗緩沖液，濃縮洗液以及增強液；所述增強液為共熒光增強液。
[0058] 本發明所述檢測TORCH IgM抗體的試劑盒的制備方法中除了鋱（Te3+)標記的弓形蟲重組抗原、鏑（Dy3+)標記的風疫病毒重組抗原、杉（Sm 3+)標記的巨細胞病毒重組抗原和銪 (Eu3+)標記的單純皰疹病毒II型重組抗原分別參照相應的鑭系元素標記試劑盒說明書而制備，TORCH IgM抗體校準品中由于目前尚無單純皰疹病毒（HSV) IgM國際標準品和定量的國家標準品，單純皰疹病毒II型IgM抗體校準品以德國維潤賽潤研發有限公司的單純皰疹病毒II型IgM抗體定量檢測試劑盒（酶聯免疫法）及酶標儀組成的測量程序標化，所述單純皰疹病毒Π 型IgM抗體在A、B、C、D、E和F6個校準品中的濃度分別為0, 2,8, 32,128， 256U/mL外，其他同實施例1的制備方法。
[0059] 實施例3
[0060] 本發明所述檢測TORCH IgM抗體的試劑盒的一種實施例，所述試劑盒包括：包被有鼠抗人IgMy鏈單克隆抗體的固相載體，鏑（Dy3+)標記的弓形蟲重組抗原，鋱（Te3+)標記的風疹病毒重組抗原，銪（Eu 3+)標記的巨細胞病毒重組抗原，釤（Sm3+)標記的單純皰疹病毒 I+II型重組抗原，TORCH IgM抗體校準品，樣本稀釋液，實驗緩沖液，濃縮洗液以及增強液；所述增強液為共熒光增強液。
[0061] 本發明所述檢測TORCH IgM抗體的試劑盒的制備方法中除了鏑（Dy3+)標記的弓形蟲重組抗原、鋱（Te3+)標記的風疹病毒重組抗原、銪（Eu 3+)標記的巨細胞病毒重組抗原和釤（Sm3+)標記的單純皰疹病毒I+II型重組抗原分別參照相應的鑭系元素標記試劑盒說明書而制備，TORCH IgM抗體校準品中由于目前尚無單純皰疹病毒（HSV) IgM國際標準品和定量的國家標準品，單純皰疹病毒I+II型IgM抗體校準品以德國維潤賽潤研發有限公司的單純皰疹病毒Ι+Π 型IgM抗體定量檢測試劑盒（酶聯免疫法）及酶標儀組成的測量程序標化，所述單純皰疹病毒Ι+Π 型IgM抗體在A、B、C、D、E和F 6個校準品中的濃度分別為0， 2,8, 32,128, 256U/mL外，其他同實施例1的制備方法。
[0062] 實施例4
[0063] 本發明所述檢測TORCH IgM抗體的試劑盒的一種實施例，所述試劑盒包括：包被有鼠抗人IgMy鏈單克隆抗體的固相載體，釤（Sm3+)標記的弓形蟲天然抗原，鋱（Te3+)標記的風疹病毒天然抗原，銪（Eu3+)標記的巨細胞病毒天然抗原，鏑（Dy3+)標記的單純皰疹病毒 I+II型重組抗原，TORCH IgM抗體校準品，樣本稀釋液，實驗緩沖液，濃縮洗液以及增強液；所述增強液為共熒光增強液。
[0064] 本發明所述檢測TORCH IgM抗體的試劑盒的制備方法中除了釤（Sm3+)標記的弓形蟲天然抗原，鋱（Te3+)標記的風疹病毒天然抗原，銪（Eu 3+)標記的巨細胞病毒天然抗原，鏑 (Dy3+)標記的單純皰疹病毒I+II型重組抗原分別參照相應的鑭系元素標記試劑盒說明書而制備，TORCH IgM抗體校準品中由于目前尚無單純皰疹病毒（HSV) IgM國際標準品和定量的國家標準品，單純皰疹病毒I+II型IgM抗體校準品以德國維潤賽潤研發有限公司的單純皰疹病毒Ι+Π 型IgM抗體定量檢測試劑盒（酶聯免疫法）及酶標儀組成的測量程序標化，所述單純皰疹病毒I+II型IgM抗體在A、B、C、D、E和F 6個校準品中的濃度分別為0,2,8， 32，128,256U/mL外，其他同實施例1的制備方法。
[0065] 實施例5
[0066] 本發明所述檢測TORCH IgM抗體的試劑盒的一種實施例，所述試劑盒包括：包被有鼠抗人IgMy鏈單克隆抗體的固相載體，銪（Eu3+)標記的弓形蟲天然抗原，釤（Sm 3+)標記的風疹病毒天然抗原，鏑（Dy3+)標記的巨細胞病毒天然抗原，鋱（Te3+)標記的單純皰疹病毒 I型天然抗原，TORCH IgM抗體校準品，樣本稀釋液，實驗緩沖液，濃縮洗液以及增強液；所述增強液為共熒光增強液。
[0067] 本發明所述檢測TORCH IgM抗體的試劑盒的制備方法中除了銪（Eu3+)標記的弓形蟲天然抗原、釤（Sm3+)標記的風疹病毒天然抗原、鏑（Dy3+)標記的巨細胞病毒天然抗原和鋱 (Te3+)標記的單純皰疹病毒I型天然抗原分別參照相應的鑭系元素標記試劑盒說明書而制備外，其他同實施例1的制備方法。
[0068] 實施例6
[0069] 本發明所述檢測TORCH IgM抗體的試劑盒的一種實施例，所述試劑盒包括：包被有鼠抗人IgMy鏈單克隆抗體的固相載體，銪（Eu3+)標記的弓形蟲天然抗原，釤（Sm 3+)標記的風疹病毒天然抗原，鏑（Dy3+)標記的巨細胞病毒天然抗原，鋱（Te3+)標記的單純皰疹病毒 II型天然抗原，TORCH IgM抗體校準品，樣本稀釋液，實驗緩沖液，濃縮洗液以及增強液；所述增強液為共熒光增強液。
[0070] 本發明所述檢測TORCH IgM抗體的試劑盒的制備方法中除了銪（Eu3+)標記的弓形蟲天然抗原、釤（Sm3+)標記的風疹病毒天然抗原、鏑（Dy 3+)標記的巨細胞病毒天然抗原和鋱（Te3+)標記的單純皰疹病毒II型天然抗原分別參照相應的鑭系元素標記試劑盒說明書而制備，TORCH IgM抗體校準品中由于目前尚無單純皰疹病毒（HSV) IgM國際標準品和定量的國家標準品，單純皰疹病毒II型IgM抗體校準品以德國維潤賽潤研發有限公司的單純皰疹病毒Π 型IgM抗體定量檢測試劑盒（酶聯免疫法）及酶標儀組成的測量程序標化，所述單純皰疹病毒II型IgM抗體在A、B、C、D、E和F 6個校準品中的濃度分別為0,2,8,32， 128,256U/mL外，其他同實施例1的制備方法。
[0071] 實施例7
[0072] 本發明所述檢測TORCH IgM抗體的試劑盒的一種實施例，所述試劑盒包括：包被有鼠抗人IgMy鏈單克隆抗體的固相載體，銪（Eu3+)標記的弓形蟲天然抗原，釤（Sm 3+)標記的風疹病毒天然抗原，鏑（Dy3+)標記的巨細胞病毒天然抗原，鋱（Te3+)標記的單純皰疹病毒 I型重組抗原，TORCH IgM抗體校準品，樣本稀釋液，實驗緩沖液，濃縮洗液以及增強液；所述增強液為共熒光增強液。
[0073] 本發明所述檢測TORCH IgM抗體的試劑盒的制備方法中除了銪（Eu3+)標記的弓形蟲天然抗原、釤（Sm3+)標記的風疹病毒天然抗原、鏑（Dy 3+)標記的巨細胞病毒天然抗原和鋱 (Te3+)標記的單純皰疹病毒I型重組抗原分別參照相應的鑭系元素標記試劑盒說明書而制備外，其他同實施例1的制備方法。
[0074] 實施例8
[0075] 本發明所述檢測戊型肝炎病毒抗體的試劑盒的使用方法，具體操作如下：
[0076] 1)試劑準備
[0077] 固相載體：將試劑及所需數量的鼠抗人IgM μ鏈單克隆抗體固相載體平衡至室溫 (20?25°C )。余下的固相載體及時置入自封袋密閉并于2?8°C保存。
[0078] 洗滌工作液：將40mL濃縮洗液和960mL純化水在干凈的容器中混合，作為工作洗滌液備用。純化水敬請用戶自備。
[0079] 鑭系元素標記物混合工作液：使用前30min內配制，銪標記物、釤標記物、鏑標記物和鋱標記物四種鑭系元素標記物與實驗緩沖液按體積比1:1:1:1:20加進潔凈的同一個一次性容器中并混勻；當次實驗用完。在實施例3所述試劑盒的使用方法中，鏑標記物為鏑 (Dy 3+)標記的弓形蟲重組抗原，鋱標記物為鋱（Te3+)標記的風疹病毒重組抗原，銪標記物為銪（Eu 3+)標記的巨細胞病毒重組抗原，釤標記物為釤（Sm3+)標記的單純皰疹病毒I+II型重組抗原，其他實施例所述試劑盒的使用方法中銪標記物、釤標記物、鏑標記物和鋱標記物分別為相應鑭系元素標記的病原體抗原。
[0080] 2)試驗操作
[0081] ①將待檢樣本用樣本稀釋液按1:100稀釋，然后在包被有鼠抗人IgM μ鏈單克隆抗體的固相載體上預設的校準品孔、樣本孔相應位置分別加入100 μ LTORCH IgM抗體校準品和100 μ L預先稀釋好的待檢樣本；
[0082] ②將步驟①中得到的固相載體在室溫條件下緩慢振蕩孵育45min ;
[0083] ③第一步孵育結束后，小心將封片揭下并棄掉，用洗板機洗滌4次，拍干；
[0084] ④分別向步驟③中獲得的固相載體上校準品孔和樣本孔中加入100 μ 1配制好的鑭系元素標記物混合工作液，在室溫下緩慢振蕩孵育45min ;
[0085] ⑤第二步孵育結束后，小心將封片揭下并棄掉，用洗板機洗滌6次，拍干；
[0086] ⑥分別向步驟⑤中獲得的固相載體上校準品孔和樣本孔中加入100 μ 1加入增強液的共解離劑部分，繼續孵育5min，再加入100 μ 1增強液的共增強劑；
[0087] ⑦步驟⑥中獲得的固相載體于室溫下緩慢振蕩5min后，在相應的鑭系元素檢測窗口檢測，銪標記物、釤標記物、鏑標記物、鋱標記物分別在銪窗口、釤窗口、鏑窗口、鋱窗口檢測，在30min內完成檢測并進行分析。
[0088] 實施例9
[0089] 本發明所述試劑盒的性能分析
[0090] (1)弓形蟲IgM抗體定量測定的分析性能：
[0091] ①最低檢出量（稀釋度）：用6份企業靈敏度參考品進行檢定，S1?S3檢測結果 S/CO或COI彡L 0, S4、S5檢測結果S/CO或COI < L 0或彡L 0, S6檢測結果S/CO或COI < 1. 0 ；
[0092] ②重復性：用1份企業精密度參考品檢定，試劑盒批內變異系數CV彡15. 0% (n = 10);
[0093] ③陰性參考品符合率：用10份企業陰性參考品檢定，結果均為陰性；
[0094] ④陽性參考品符合率：用10份企業陽性參考品檢定，結果均為陽性；
[0095] ⑤穩定性試驗：取有效期內試劑盒于37°C放置至少6天（有效期為1年）檢測，其性能無明顯改變。
[0096] ⑥交叉反應：檢測以下樣本均無交叉反應，弓形蟲IgG抗體高濃度樣本10例，風疹病毒IgM抗體陽性樣本5例，巨細胞病毒IgM抗體陽性樣本5例，單純皰疹病毒I型IgM 抗體陽性樣本5例，單純皰疹病毒II型IgM抗體陽性樣本5例，抗核抗體陽性樣本5例，類風濕因子陽性樣本5例，異嗜細胞抗體陽性樣本5份，膽紅素樣本5份，甘油三酯樣本5份，溶血樣本15份，EB病毒IgM抗體陽性樣本5例，乙型肝炎病毒表面抗體陽性（彡100mIU/ mL)樣本20例；乙型肝炎病毒e抗體陽性（彡4NCU/mL) 20例；乙型肝炎病毒核心抗體IgM 陽性200PEI U/L) 20例；甲型肝炎病毒IgM抗體陽性樣本5例，水痘帶狀皰疹病毒IgM 抗體陽性樣本5例，肺炎支原體IgM抗體陽性樣本10例，大腸桿菌BL21抗體（2. 50mg/mL) 1 份（僅代表本實驗室研究結果）。
[0097] ⑦干擾物質：膽紅素濃度818ymol/L，血紅蛋白濃度180g/L，甘油三酯濃度 21. 54mmol/L，EDTA-K2-2H20 濃度 2. 2mg/mL，草酸鉀濃度 2mg/mL，肝素濃度 15U/mL，枸櫞酸鈉濃度21. 8mmol/L，氟化鈉濃度lmg/mL對檢測結果無干擾性。
[0098] ⑧IgM破壞性試驗：10份含有特異性弓形蟲（Τ0Χ) IgM抗體的樣本，采用0· 2 mol/ L的2-巰基乙醇37°C滅活IgM抗體2h后對比檢測處理前和處理后的樣本，處理樣本后，IgM 抗體檢測結果均為陰性。
[0099] 2)風疹病毒IgM抗體定量測定的分析性能：
[0100] ①最低檢測限：用國家參考品或標化的企業參考品檢定，3份最低檢測限參考品 (L1?L3)，L1和L2檢測結果均為陽性，L3檢測結果為陰性或陽性；
[0101] ②重復性：用國家參考品或標化的企業參考品檢定，試劑盒批內變異系數（CV)不大于 15. 0% (η = 10);
[0102] ③陰性參考品符合率：用10份國家參考品或標化的企業參考品檢定，結果均為陰性；
[0103] ④陽性參考品符合率：用5份國家參考品或標化的企業參考品檢定，結果均為陽性；
[0104] ⑤穩定性試驗：試劑盒自成品生產之日起于37°C放置6天（有效期為12個月）；成品剩余效期內，則按37°C放置6天有效期為12個月推算37°C放置的時間進行檢測，其性能無明顯改變。
[0105] ⑥交叉反應：檢測以下樣本均無交叉反應，風疹病毒IgG抗體高濃度樣本10例，弓形蟲IgM抗體陽性樣本5例，巨細胞病毒IgM抗體陽性樣本5例，單純皰疹病毒I型IgM 抗體陽性樣本5例，單純皰疹病毒II型IgM抗體陽性樣本5例，抗核抗體陽性樣本5例，類風濕因子陽性樣本5例，異嗜細胞抗體陽性樣本5份，膽紅素樣本5份，甘油三酯樣本5份，溶血樣本15份，EB病毒IgM抗體陽性樣本5例，乙型肝炎病毒表面抗體陽性（彡lOOmlU/ mL)樣本20例；乙型肝炎病毒e抗體陽性（彡4NCU/mL)20例；乙型肝炎病毒核心抗體IgM 陽性（> 200PEI U/L) 20例；甲型肝炎病毒IgM抗體陽性樣本5例，水痘帶狀皰疹病毒IgM 抗體陽性樣本5例，肺炎支原體IgM抗體陽性樣本10例，大腸桿菌BL21抗體（2. 50mg/mL) 1 份（僅代表本實驗室研究結果）。
[0106] ⑦干擾物質：膽紅素濃度818ymol/L，血紅蛋白濃度180g/L，甘油三酯濃度 21. 54mmol/L，EDTA-K2-2H20 濃度 2. 2mg/mL，草酸鉀濃度 2mg/mL，肝素濃度 15U/mL，枸櫞酸鈉濃度21. 8mmol/L，氟化鈉濃度lmg/mL對檢測結果無干擾性。
[0107] ⑧IgM破壞性試驗：10份含有特異性風疹病毒（RV) IgM抗體的樣本，采用0. 2mol/ L的2-巰基乙醇37°C滅活IgM抗體2h后對比檢測處理前和處理后的樣本，處理樣本后，IgM 抗體檢測結果均為陰性。
[0108] (3)巨細胞病毒IgM抗體定量測定的分析性能：
[0109] ①最低檢測限：用國家參考品或標化的企業參考品檢定，S1?S3檢測為陽性，S4、 S5檢測為陰性或陽性，S6檢測為陰性；
[0110] ②重復性：用國家參考品或標化的企業參考品檢定，試劑盒批內變異系數 CV ^ 15. 0% (η = 10)；
[0111] ③陰性參考品符合率：用9份國家參考品或標化的企業陰性參考品檢定，結果均為陰性；
[0112] ④陽性參考品符合率：用5份國家參考品或標化的企業陽性參考品檢定，結果均為陽性；
[0113] ⑤穩定性試驗：試劑盒自成品生產之日起于37°C放置6天（有效期為12個月）；成品剩余效期內，則按37°C放置6天有效期為12個月推算37°C放置的時間進行檢測，其性能無明顯改變。
[0114] ⑥交叉反應：檢測以下樣本均無交叉反應，巨細胞病毒IgG抗體高濃度樣本10例，風疹病毒IgM抗體陽性樣本5例，弓形蟲IgM抗體陽性樣本5例，單純皰疹病毒I型IgM抗體陽性樣本5例，單純皰疹病毒II型IgM抗體陽性樣本5例，抗核抗體陽性樣本5例，類風濕因子陽性樣本5例，異嗜細胞抗體陽性樣本5份，膽紅素樣本5份，甘油三酯樣本5份，溶血樣本15份，EB病毒IgM抗體陽性樣本5例，乙型肝炎病毒表面抗體陽性（彡lOOmlU/ mL)樣本20例；乙型肝炎病毒e抗體陽性（彡4NCU/mL) 20例；乙型肝炎病毒核心抗體IgM 陽性200PEI U/L) 20例；甲型肝炎病毒IgM抗體陽性樣本5例，水痘帶狀皰疹病毒IgM 抗體陽性樣本5例，肺炎支原體IgM抗體陽性樣本10例，大腸桿菌BL21抗體（2. 50mg/mL) 1 份（僅代表本實驗室研究結果）。
[0115] ⑦干擾物質：膽紅素濃度818ymol/L，血紅蛋白濃度180g/L，甘油三酯濃度 21. 54mmol/L，EDTA-K2-2H20 濃度 2. 2mg/mL，草酸鉀濃度 2mg/mL，肝素濃度 15U/mL，枸櫞酸鈉濃度21. 8mmol/L，氟化鈉濃度lmg/mL對檢測結果無干擾性。
[0116] ⑧IgM破壞性試驗：10份含有特異性巨細胞病毒（CMV) IgM抗體的樣本，采用 0. 2mol/L的2-巰基乙醇37°C滅活IgM抗體2h后對比檢測處理前和處理后的樣本，處理樣本后，IgM抗體檢測結果均為陰性。
[0117] (4)單純皰疹病毒I+II型IgM抗體定量測定的分析性能：
[0118] ①最低檢測限：用企業參考品檢測，S1?S3均為陽性，S4、S5為陰性或陽性，S6為陰性；
[0119] ②重復性：用企業參考品檢測，試劑盒批內變異系數CV彡15% (η = 10);
[0120] ③陰性參考品符合率：用20份企業陰性參考品檢測，檢測結果應為陰性；
[0121] ④陽性參考品符合率：用10份企業陽性參考品進行檢測，檢測結果為陽性；
[0122] ⑤穩定性試驗：試劑盒自成品生產之日起于37°C放置6天（有效期為12個月）；成品剩余效期內，則按37°C放置6天有效期為12個月推算37°C放置的時間進行檢測，其性能無明顯改變。
[0123] ⑥交叉反應：檢測以下樣本均無交叉反應，單純皰疹病毒I型IgG抗體高濃度樣本 10例，單純皰疹病毒II型IgG抗體高濃度樣本10例，風疹病毒IgM抗體陽性樣本5例，弓形蟲IgM抗體陽性樣本5例，巨細胞病毒IgM抗體陽性樣本5例，抗核抗體陽性樣本5例，類風濕因子陽性樣本5例，異嗜細胞抗體陽性樣本5份，膽紅素樣本5份，甘油三酯樣本5份，溶血樣本15份，EB病毒IgM抗體陽性樣本5例，乙型肝炎病毒表面抗體陽性（彡100mIU/ mL)樣本20例；乙型肝炎病毒e抗體陽性（彡4NCU/mL) 20例；乙型肝炎病毒核心抗體IgM 陽性200PEI U/L) 20例；甲型肝炎病毒IgM抗體陽性樣本5例，水痘帶狀皰疹病毒IgM 抗體陽性樣本5例，肺炎支原體IgM抗體陽性樣本10例，
[0124] 大腸桿菌 BL21 抗體（2. 50mg/mL) 1 份。
[0125] ⑦干擾物質：膽紅素濃度818ymol/L，血紅蛋白濃度180g/L，甘油三酯濃度 21. 54mmol/L，EDTA-K2-2H20 濃度 2. 2mg/mL，草酸鉀濃度 2mg/mL，肝素濃度 15U/mL，枸櫞酸鈉濃度21. 8mmol/L，氟化鈉濃度lmg/mL對檢測結果無干擾性。
[0126] ⑧IgM破壞性試驗：10份含有特異性單純皰疹病毒I+II型IgM抗體的樣本，采用 0. 2mol/L的2-巰基乙醇37°C滅活IgM抗體2h后對比檢測處理前和處理后的樣本，處理樣本后，IgM抗體檢測結果均為陰性。
[0127] 實施例10
[0128] 本發明所述試劑盒與德國維潤賽潤研發有限公司的產品比較，比較結果如下：
[0129] 表1弓形蟲IgM抗體檢測結果
[0130]

【權利要求】
1. 一種檢測TORCH IgM抗體的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：包被有與TORCH IgM抗體結合的抗體的固相載體，鑭系元素標記的TORCH抗原，TORCH IgM抗體校準品，樣本稀釋液，實驗緩沖液，濃縮洗液以及增強液。
2. 根據權利要求1所述的檢測TORCH IgM抗體的試劑盒，其特征在于，所述包被有與 TORCH IgM抗體結合的抗體的固相載體為包被有鼠抗人IgMy鏈單克隆抗體的固相載體。
3. 根據權利要求2所述的檢測TORCH IgM抗體的試劑盒，其特征在于，所述包被有鼠抗人IgMy鏈單克隆抗體的固相載體是采用以下步驟制備而得的：將鼠抗人IgM μ鏈單克隆抗體用包被緩沖液稀釋至0. 01?10 μ g/mL，在固相載體上進行包被，將固相載體洗滌1次，然后再用含1% BSA的50mmol/L、pH 7. 8的Tris-HCl緩沖液進行封閉，將固相載體甩干，晾干，真空包裝，2?8°C保存備用。
4. 根據權利要求1所述的檢測TORCH IgM抗體的試劑盒，其特征在于，所述鑭系元素標記的TORCH抗原為鑭系元素1標記的弓形蟲抗原、鑭系元素2標記的風疹病毒抗原、鑭系元素3標記的巨細胞病毒抗原和鑭系元素4標記的單純皰疹病毒抗原的組合，所述鑭系元素1、鑭系元素2、鑭系元素3、鑭系元素4分別選自銪、釤、鏑和鋱中的一種，且所述鑭系元素 1、鑭系元素2、鑭系元素3、鑭系元素4互不相同；所述鑭系元素標記的TORCH抗原中TORCH 抗原為TORCH天然抗原和TORCH重組抗原中的至少一種。
5. 根據權利要求4所述的檢測TORCH IgM抗體的試劑盒，其特征在于，所述鑭系元素 4標記的單純皰疫病毒抗原中單純皰疫病毒抗原為單純皰疫病毒I型抗原和單純皰疫病毒 II型抗原中的至少一種。
6. 根據權利要求5所述的檢測TORCH IgM抗體的試劑盒，其特征在于，所述鑭系元素4 標記的單純皰疹病毒抗原中單純皰疹病毒抗原為單純皰疹病毒Ι+Π 型重組抗原。
7. 根據權利要求4所述的檢測TORCH IgM抗體的試劑盒，其特征在于，所述鑭系元素標記的TORCH抗原是參照相應的鑭系元素標記試劑盒說明書制備而成的。
8. -種采用如權利要求1所述試劑盒檢測TORCH IgM抗體的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟： (1) 用實驗緩沖液配制鑭系元素標記的TORCH抗原，用純化水將濃縮洗液稀釋成工作洗滌液； (2) 將待檢樣本用樣本稀釋液稀釋，然后在包被有與TORCH IgM抗體結合的抗體的固相載體上預設的校準品孔、樣本孔相應位置分別加入TORCH IgM抗體校準品、預先稀釋好的待檢樣本； (3) 將步驟（2)中得到的固相載體在室溫條件下緩慢振蕩孵育； (4) 用步驟（1)中工作洗滌液洗滌步驟（3)中孵育后的固相載體； (5) 分別向步驟（4)中獲得的固相載體上校準品孔和樣本孔中加入步驟（1)中配制好的鑭系元素標記的TORCH抗原，在室溫下孵育； (7) 用步驟（1)中工作洗滌液洗滌步驟（5)中孵育后的抗原固相載體； (8) 分別向步驟（7)中獲得的固相載體上校準品孔和樣本孔中加入增強液的共解離劑部分，繼續孵育，再加入增強液的共增強劑； (9) 孵育結束后，采用相應的鑭系元素窗口程序進行檢測并分析。
9. 根據權利要求8所述的采用試劑盒檢測TORCH IgM抗體的方法，其特征在于，所述步驟（2)中包被有與TORCH IgM抗體結合的抗體的固相載體為包被有鼠抗人IgMy鏈單克隆抗體的固相載體；所述步驟（1)中鑭系元素標記的TORCH抗原為鑭系元素1標記的弓形蟲抗原、鑭系元素2標記的風疹病毒抗原、鑭系元素3標記的巨細胞病毒抗原和鑭系元素4 標記的單純皰疹病毒抗原的組合，所述鑭系元素1、鑭系元素2、鑭系元素3、鑭系元素4分別選自銪、釤、鏑和鋱中的一種，且所述鑭系元素1、鑭系元素2、鑭系元素3、鑭系元素4互不相同；所述步驟（1)中鑭系元素標記的TORCH抗原中TORCH抗原為TORCH天然抗原和TORCH 重組抗原中的至少一種。
10. -種如權利要求1所述檢測TORCH IgM抗體的試劑盒的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟： (1) 制備包被有與TORCH IgM抗體結合的抗體的固相載體，鑭系元素標記的TORCH抗原，TORCH IgM抗體校準品，樣本稀釋液，實驗緩沖液，濃縮洗液以及增強液； (2) 貼標簽； (3) 組裝為試劑盒。
【文檔編號】G01N33/533GK104155449SQ201410363969
【公開日】2014年11月19日申請日期:2014年7月28日優先權日:2014年7月28日
【發明者】譚玉華, 范主橋, 李奕輝, 盧德祥申請人:廣州市豐華生物工程有限公司

完整全部詳細技術資料下載