一種環丙沙星及其抗體殘留的免疫學檢測試紙卡的制作方法
【專利摘要】本實用新型公開了一種環丙沙星及其抗體殘留的免疫學檢測試紙卡，包括塑料卡殼和封裝于塑料卡殼內的試紙條，所述的塑料卡殼的中部設有加樣孔，該加樣孔的兩側分別設有相對稱的第一觀察窗、第二觀察窗和透氣孔，并且在加樣孔的位置設有手持端，所述的試紙條的底層為PVC板構成的支撐層，附著在支撐層中央的為樣品墊，該樣品墊與塑料卡殼上加樣孔的位置相對應，樣品墊左側依次設有緊密相連的金標抗體結合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊，樣品墊右側依次設有緊密相連的金標抗原結合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊。本實用新型操作簡單，可同時對環丙沙星及其抗體殘留進行批量定性檢測。
【專利說明】一種環丙沙星及其抗體殘留的免疫學檢測試紙卡

【技術領域】
[0001]本實用新型屬于免疫化學檢測【技術領域】，具體涉及一種定性檢測環丙沙星及其抗體殘留的免疫學檢測試紙卡。

【背景技術】
[0002]環丙沙星(Ciprofloxacin，CPFX)屬氟喹諾酮類廣譜抗菌藥物，它是繼諾氟沙星之后獲美國FDA批準上市的第二個喹諾酮類藥物。該藥物對革蘭氏陰性桿菌有很強的殺傷力，能抑制細菌DNA螺旋酶，抗菌譜廣、高效、低毒、組織滲透力強，且藥物吸收迅速、生物利用度高，與其它抗生素無交叉耐藥性，已成為獸醫臨床和水產養殖中最重要的抗感染藥物之一，在畜牧行業中被大量用于治療、預防和促生長。但在實踐過程中由于盲目及不合理應用，導致了耐藥菌株的出現，并且環丙沙星在食源性動物組織中的殘留經食物鏈進入人體后，對人體具有潛在的致癌性，會對人體的健康造成威脅。因此，許多國家和國際組織已對其休藥期和在畜禽產品中的最高殘留限量做出了限制。
[0003]環丙沙星殘留檢測的傳統方法有微生物學法，高效液相色譜法(HPLC)，液質聯用法(LC-MS)和液相色譜一串聯質譜法(LC-MS/MS)等方法。然而應用理化儀器方法時，其靈敏度受樣品前處理、濃縮程度和溶劑的影響較大，測定方法繁瑣、復雜，檢測通量小，需要專業的技術人員和昂貴的儀器設備，不能實現大批量樣品的快速檢測分析。膠體金標記免疫分析法是近年來迅速發展的一種新型分析技術，其特點是簡便快速、成本低、無污染、無需培訓，且所有試劑包含在一根試紙條上，非常適合于現場檢測，具有廣闊的市場前景和應用價值。


【發明內容】

[0004]本實用新型解決的技術問題是提供了一種操作簡便、快速準確、靈敏度高、成本低廉且穩定性好，可進行批量檢測的環丙沙星及其抗體殘留的免疫學檢測試紙卡。
[0005]本實用新型的技術方案是:一種環丙沙星及其抗體殘留的免疫學檢測試紙卡，其特征在于包括塑料卡殼和封裝于塑料卡殼內的試紙條，所述的塑料卡殼的中部設有加樣孔，該加樣孔的兩側分別設有相對稱的第一觀察窗、第二觀察窗和透氣孔，并且在加樣孔的位置設有手持端，所述的試紙條的底層為PVC板構成的支撐層，附著在支撐層中央的為樣品墊，該樣品墊與塑料卡殼上加樣孔的位置相對應，樣品墊左側依次設有緊密相連的金標抗體結合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊，樣品墊右側依次設有緊密相連的金標抗原結合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊。
[0006]本實用新型所述的塑料卡殼上加樣孔的形狀為漏斗狀橢圓形開口，塑料卡殼的兩端開有透氣孔，且透氣孔為多個，呈扇形排列，并且透氣孔、第一觀察窗、第二觀察窗和加樣孔處于塑料卡殼的同一水平面上。
[0007]本實用新型所述的樣品墊左側的硝酸纖維素膜上噴涂有環丙沙星-OVA包被原印制的檢測線T線及羊抗鼠IgG溶液印制的質控線C線，兩者間距5mm，其中環丙沙星-OVA包被原印制的檢測線T線位于靠近樣品墊的一側，且環丙沙星-OVA包被原印制的檢測線T線及羊抗鼠IgG溶液印制的質控線C線與塑料卡殼上第一觀察窗的位置相對應。本實用新型所述的樣品墊左側的金標抗體結合墊上灌注有膠體金標記的抗環丙沙星單克隆抗體。
[0008]本實用新型所述的樣品墊右側的硝酸纖維素膜上噴涂有抗環丙沙星單克隆抗體印制的檢測線T線及羊抗鼠IgG溶液印制的質控線C線，兩者間距5mm，其中抗環丙沙星單克隆抗體印制的檢測線T線位于靠近樣品墊的一側，且抗環丙沙星單克隆抗體印制的檢測線T線及羊抗鼠IgG溶液印制的質控線C線與塑料卡殼上第二觀察窗的位置相對應。本實用新型所述的樣品墊右側的金標抗原結合墊上灌注有膠體金標記的環丙沙星載體蛋白。
[0009]本實用新型具有如下有益效果:
[0010](I)操作簡單、方便快捷。使用快速檢測試紙卡時無需其它任何儀器或試劑，只需將處理后的樣品溶液用滴管滴入試紙卡加樣孔內4-6滴，3-5 min即可觀察結果。
[0011](2)能同時檢測環丙沙星及其抗體殘留，結果形象、直觀。當第一觀察窗硝酸纖維素膜上C線顯示一條紅色“ I ”印跡時，表示環丙沙星含量呈陽性，當C線和T線同時出現兩條紅色“ II ”印跡時，表示環丙沙星含量呈陰性；當第二觀察窗硝酸纖維素膜上C線顯示一條紅色“ I ”印跡時，表示抗體含量呈陽性，當C線和T線同時出現兩條紅色“ II”印跡時，表示抗體含量呈陰性。結果形象直觀，簡單準確，不容易出現誤判。
[0012](3)塑料卡殼上的透氣孔使溶液“爬坡”順暢，顯色時間短。透氣孔使塑料卡殼內非常狹窄的空間與外界保持空氣流通，保證反應膜正常發揮毛吸作用，使檢測物能夠快速地定向移動至透氣孔，避免了阻滯或者不完全泳動等現象，提高了顯色效率。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0013]圖1是本實用新型的結構示意圖，圖2是本實用新型中試紙條的側視圖。
[0014]圖面說明:1、塑料卡殼，2、第一觀察窗，3、第二觀察窗，4、加樣孔，5、透氣孔，6、手持端，7、支撐層，8、樣品墊，9、金標抗體結合墊，10、金標抗原結合墊，11、硝酸纖維素膜，12、質控線C線，13、環丙沙星-OVA包被原印制的檢測線T線，14、抗環丙沙星單克隆抗體印制的檢測線T線，15、吸收墊。

【具體實施方式】
[0015]結合附圖詳細描述實施例。一種環丙沙星及其抗體殘留的免疫學檢測試紙卡，包括塑料卡殼I和封裝于塑料卡殼I內的試紙條，所述的塑料卡殼I的中部設有加樣孔4，該加樣孔4的兩側分別設有相對稱的第一觀察窗2、第二觀察窗3和透氣孔5，并且在加樣孔4的位置設有手持端6，所述的試紙條的底層為PVC板構成的支撐層7，附著在支撐層7中央的為樣品墊8，該樣品墊8與塑料卡殼I上加樣孔4的位置相對應；樣品墊8左側依次設有緊密相連的金標抗體結合墊9、硝酸纖維素膜11和吸收墊15，其中硝酸纖維素膜11上噴涂有環丙沙星-OVA包被原印制的檢測線T線13和羊抗鼠IgG溶液印制的質控線C線12，兩者間距5mm，且環丙沙星-OVA包被原印制的檢測線T線13和羊抗鼠IgG溶液印制的質控線C線12與塑料卡殼I上第一觀察窗2的位置相對應，金標抗體結合墊9上灌注有膠體金標記的抗環丙沙星單克隆抗體；樣品墊8右側依次設有緊密相連的金標抗原結合墊10、硝酸纖維素膜11和吸收墊15，其中硝酸纖維素膜11上噴涂有抗環丙沙星單克隆抗體印制的檢測線T線14和羊抗鼠IgG溶液印制的質控線C線12，兩者間距5mm，且抗環丙沙星單克隆抗體印制的檢測線T線14和羊抗鼠IgG溶液印制的質控線C線12與塑料卡殼I上第二觀察窗3的位置相對應，金標抗原結合墊10上灌注有膠體金標記的環丙沙星載體蛋白。
[0016]本實用新型所述的塑料卡殼I上加樣孔4的形狀為漏斗狀橢圓形開口，所述的塑料卡殼I的兩端開有呈扇形排列的透氣孔5，并且透氣5孔、第一觀察窗2、第二觀察窗3和加樣孔4處于塑料卡殼I的同一水平面上。
[0017]本實用新型所述的支撐層7是由聚氯乙烯樹脂與穩定劑及輔料配合制成的PVC板。本實用新型所述的吸收墊15是由吸水能力極強的植物長纖維為原材料制成的純白濾紙。本實用新型所述的樣品墊8、金標抗體結合墊9和金標抗原結合墊10是由玻璃纖維棉制作而成的。本實用新型所述的樣品墊8與金標抗體結合墊9和金標抗原結合墊10的疊壓寬度分別為l_2mm，吸收墊15與硝酸纖維素膜11的疊壓寬度為l_2mm。
[0018]本實用新型所述的試紙卡的制備方法:
[0019]I)硝酸纖維素膜的制備:將硝酸纖維素膜置于X-only單向噴點儀平臺上，環丙沙星-OVA包被原或抗環丙沙星單克隆抗體放于A池，RaMIgG放于B池，展平壓緊，開機后將抗原和二抗分別點射于硝酸纖維素膜上，形成檢測線T線和質控線C線。室溫自然干燥后，將其浸入封閉液(質量濃度為1%的BSA的PBS緩沖液，pH 7.4)中30min，37°C烘干后，加入干燥劑，4 °C密封保存。
[0020]2)結合墊的制備:將玻璃纖維棉裁成4mm寬的細條，放入含質量濃度為5%的BSA，質量濃度為2%的蔗糖，質量濃度為0.8%的NaCl和質量濃度為0.05%的似乂的PBS處理液中20min，37°C恒溫烘干，然后將金標抗體或金標抗原灌注已處理好的玻璃纖維棉上，真空凍干4h，即為結合墊。
[0021]3)樣品墊的制備:玻璃纖維棉要用含質量濃度為2%的BSA，質量濃度為1%的蔗糖，質量濃度為0.5%的硼酸鈉和質量濃度為0.1%的似乂的PBS處理后，干燥備用，即為樣品墊。
[0022]4)吸收墊的制備:將吸水能力極強的植物長纖維為原材料制作的純白濾紙用切割機切成4 mm寬的細條，并用膠膜進行一側封閉，干燥備用。
[0023]5)試紙條的制備:在支撐板(PVC板)上，將硝酸纖維素膜、結合墊、樣品墊和吸收墊等按一定工藝組裝在一起，用CM4000切割機制成4_寬的試紙條，放入帶干燥劑的密閉容器中儲存。
[0024]6)試紙卡的組裝:按一定工藝將試紙條封裝于帶有加樣孔、第一觀察窗、第二觀察窗和透氣孔的特制的塑料卡殼中，即為本實用新型的試紙卡。
[0025]本實用新型所述的試紙卡的使用方法:
[0026]I)樣品前處理:
[0027]將動物組織樣品切碎、研磨后稱取5g樣品于20ml離心管中，再加入乙腈5ml，于旋禍儀禍動10min，6000r/min離心5min ;取Iml上清液，加入4ml的樣品稀釋液振蕩搖勾Imin ;取500 μ I用于樣品分析。
[0028]2)樣品滴加:
[0029]將試紙卡平放后，用滴管將樣品溶液滴入試紙卡加樣孔內4-6滴，3-5min后即可觀察結果。
[0030]3)檢測結果分析:
[0031]陰性:若第一觀察窗或第二觀察窗硝酸纖維素膜上質控線C線和檢測線T線同時出現兩條紅色“ II ”印跡時，判為陰性。
[0032]陽性:若第一觀察窗或第二觀察窗硝酸纖維素膜上質控線C線顯示一條紅色“ I ”印跡，而檢測線T線不顯色，判為陽性。
[0033]無效:若第一觀察窗或第二觀察窗硝酸纖維素膜上質控線C線不顯示紅色條帶，則無論檢測線T線是否出現紅色印跡，該試紙卡均判為無效。
[0034]以上實施例僅為說明本實用新型的技術思想，不能以此限定本實用新型的保護范圍，凡是按照本實用新型提出的技術思想，在技術方案基礎上所做的任何改動，均落入本實用新型保護范圍之內。
【權利要求】
1.一種環丙沙星及其抗體殘留的免疫學檢測試紙卡，其特征在于包括塑料卡殼和封裝于塑料卡殼內的試紙條，所述的塑料卡殼的中部設有加樣孔，該加樣孔的兩側分別設有相對稱的第一觀察窗、第二觀察窗和透氣孔，并且在加樣孔的位置設有手持端，所述的試紙條的底層為PVC板構成的支撐層，附著在支撐層中央的為樣品墊，該樣品墊與塑料卡殼上加樣孔的位置相對應，樣品墊左側依次設有緊密相連的金標抗體結合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊，其中硝酸纖維素膜上噴涂有環丙沙星-OVA包被原印制的檢測線T線及羊抗鼠IgG溶液印制的質控線C線，兩者間距5_，環丙沙星-OVA包被原印制的檢測線T線位于靠近樣品墊的一側，且環丙沙星-OVA包被原印制的檢測線T線和羊抗鼠IgG溶液印制的質控線C線與塑料卡殼上第一觀察窗的位置相對應，金標抗體結合墊上灌注有膠體金標記的抗環丙沙星單克隆抗體，樣品墊右側依次設有緊密相連的金標抗原結合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊，其中硝酸纖維素膜上噴涂有抗環丙沙星單克隆抗體印制的檢測線T線及羊抗鼠IgG溶液印制的質控線C線，兩者間距5_，抗環丙沙星單克隆抗體印制的檢測線T線位于靠近樣品墊的一側，且抗環丙沙星單克隆抗體印制的檢測線T線和羊抗鼠IgG溶液印制的質控線C線與塑料卡殼上第二觀察窗的位置相對應，金標抗原結合墊上灌注有膠體金標記的環丙沙星載體蛋白。
2.根據權利要求1所述的環丙沙星及其抗體殘留的免疫學檢測試紙卡，其特征在于:所述的塑料卡殼的兩端開有呈扇形排列的透氣孔，并且透氣孔、第一觀察窗、第二觀察窗和加樣孔處于塑料卡殼的同一水平面上。
【文檔編號】G01N33/577GK204241484SQ201420707029
【公開日】2015年4月1日 申請日期:2014年11月24日 優先權日:2014年11月24日
【發明者】吳世秀, 柳東陽, 王秋霞, 姜金慶, 孫亞偉 申請人:河南科技學院