分類：生物化工 點擊量：673
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一.主要設備:(1)工業用離心機一臺;(2)恒溫水浴鍋(10L--50L)(可自制)1臺;(3)冰柜1臺;(4)攪拌機1臺;(5)玻璃器皿:1000ml,500ml燒杯各3只,50ml燒杯2只,50ml,500ml量杯各1個;(6)塑料桶若干個。 二.主要試劑:(工業純度)檸檬酸鈉,檸檬酸,葡萄糖,乙醇90%，氯仿,丙酮,氯化鈉,磷酸氫二鈉,磷酸二氫鈉,去離子水或蒸餾水,葡萄糖凝酸膠SephadexG--100和DEAE--纖維素. 三.試劑的配制: 1.抗凝劑配方:(1)檸檬酸鈉30g,檸檬酸10g葡萄糖25g加水至1升,一般此種是每7ml血液,加1ml(抗凝劑).(2)40g/升檸檬酸鈉溶液:在1升水中加入0.9克的氯化鈉. 2.生理鹽水:(0.9%)在91克水中加入0.9克的氯化鈉. 3.磷酸鹽緩沖溶液的配制:PH7.6,0.2M磷酸鹽緩沖溶液,一般用Na2HPO4.H2O,35.61克/升和NaH2PO4.2H2O31.21克/升,前者加87.0ml,后者加13.0ml混合后即為PH=7.6緩沖溶液,如果用K2HPO4.3H2O為45.644g/升,NaH2PO4.2H2O為31.21克/升,仍是前者87.0ml,后者13.0ml混合后即得. 4.冷卻劑:在本工藝中有使用-15度低溫,一般用如下配方:用33克食鹽加入100克雪或碎冰,以此比例配成混合體可達-21.3度。 四.工藝流程： (一)除血紅蛋白 1.血液抗凝處理,在新鮮牛,馬,豬血中迅速加入ACD1號抗凝劑,并緩慢攪勻,每7毫升血液中加入抗凝劑1毫升或2號抗凝劑. 2.把抗凝處理的血液放入離心機,以3000r/min離心約15--20分鐘,用吸管把上清液(黃色血清)小心吸去拋掉,下層的紅血球用2--3倍生理鹽水洗2--3次,在每一次洗滌中,用離心機以3000r/min離心,7--8分鐘,反復操作后,得到洗滌血紅細胞,洗滌后的血紅細胞在-15度下冷凍可保存半年并不影響產率和比活,在血液量大,處理不完時必須這樣做. 3.在洗凈的紅血球中加入等體積去離子水,劇烈攪拌30分鐘,使紅血球細胞壁砍碎,以使其內的SOD浸出.最好在0--4度靜止過夜后,把溶血進行有機提取. 4.接著向溶血中緩緩加入0.2--0.25倍體積的預冷(-15度)95%乙醇和0.1--0.15倍預冷氯仿,攪拌10--
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