專利名稱：一種南美白對蝦抗菌肽制劑及其在水產養殖中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種含有南美白對蝦抗菌肽的制劑，屬于動物營養學領域。
背景技術：
水產動物疾病的防治是長期以來困擾水產養殖者的難題，特別是傳統魚病學上 行之有效的一些藥物紛紛被禁用或限用，以及化學消毒劑和抗生素等藥物的廣泛和長期 使用，許多病原產生了抗藥性和藥物耐受現象。因此，開發一種全新的抗病藥物已成為 魚病學研究的熱點。根據抗菌肽結構和生物活性等方面的特點可以看出，這些肽類具有 廣譜抗菌 作用，并且抗菌機理獨特，病原菌不易對抗菌肽產生耐藥性，屬無毒副作用， 無殘留的一類環保型制劑。本發明的目的是提供一種新型綠色環保飼料免疫添加劑，它能有效地增強水產 養殖動物機體免疫功能，提高水產養殖動物抗病能力。

發明內容
本發明南美白對蝦抗菌肽制劑其抗菌肽為Pen-3a，Genbank序列號為Y14926， 其mRNA基因序列如序列表所示。本發明南美白對蝦抗菌肽制劑，抗菌肽效價為400mg/g，以玉米蛋白為載體。
具體實施例方式本發明的目的是這樣實現的飼料中添加的南美白對蝦抗菌肽被對蝦吸收后， 主要儲存在大顆粒血細胞(LGH)的細胞質顆粒中。當血細胞受微生物刺激，抗菌物質就 從血細胞的細胞質顆粒中釋放出來，這樣通過對抗菌肽經胞吐作用從對蝦顆粒血細胞中 釋放的過程進行調控，能夠提高微生物與血細胞接觸部位血漿的抗菌活性，從而防止微 生物感染。本發明因從動物營養免疫學角度，提高水產養殖動物免疫抗病能力，起到預防 疾病的作用，因而無需使用抗生素類藥物，減少藥物殘留。實施例1以大腸桿菌為實驗菌種，采用制片擴散法和液體生長抑制法測定南美白對蝦抗 菌肽抗菌活性。結果表明，抗菌肽對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌均有不同程度的抗菌 活性，對氨芐青霉素不敏感的強致病性細菌，如枯草芽孢桿菌、蘇云金芽孢桿菌和綠膿 桿菌等都有很好的抗菌活性，對抗氨芐青霉素的大腸桿菌也具抑菌活性，且隨抗菌肽含 量的提高抑菌效果不斷加強。實施例2在南美白對蝦的養殖實驗中，進行本抗菌肽制劑與金霉素的對比研究，結果顯 示，養殖100天后，添加抗菌肽制劑4mg/kg組較添加0.5mg/kg金霉素組成活率增加 13.3%,收獲量增加12.8%，添加4mg/kg抗菌肽制劑組較添加10mg/kg金霉素組成活率增加16.7%。表明南美白對蝦抗菌肽能顯著提高對蝦的成活率、提高對蝦產量。南美白對蝦抗菌肽(Pen_3a)mRNA序列表<110>山東省淡水水產研究所<120>—種南美白對蝦抗菌肽制劑及其在水產養殖中的應用<141>2009-09-15<160>1<210>1 <211>703<212>RNA<213> 南美白對蟲下(Penaeus vannamei)<400>tcgagcctcacctgcagagaccgacgctccgagcccgggttccctcctgcgtccgccatg 60cgcctcgtggtctgcctggtcttcttggcctccttcgccctggtctgccaaggccaagtg 120tacaagggcggttacacgcgcccgatacccaggccaccacccttcgtgagacctttgcca 180ggagggcctattggtccatacaacggttgccctgtctcatgccggggaatttccttctca 240caagcgcgttcttgctgctcccggttagggcgttgctgtcacgtgggaaagggatattcc 300ggttgatggagaacacgatgaaaacctcgcttgacaacctgttgattgatacttgtatgt 360gaagagactgtgatcctgattttgcactgtgttttctcgttcaatattcttactctggct 420tgtggaatggatgtagttatttgaccctatgtttttttttaagacttttccatgaatgca 480cgatgaatgaaagcttgcgtgatatgaatgagtgcatccacttttcaacgtcccagcagg 540tggcgccgtattcatgatttgtgacacacgaggaagtaaatccatgccatctgcctttcg 600ttgtaatttttagtgagtatggatctgtgtgtgggtgatttttacaaatctctcaaagga 660cttttagaaatgttactcctttacaaataaaattggtatcttg70權利要求
1.一種南美白對蝦抗菌肽制劑，抗菌肽效價為400mg/g，以玉米蛋白為載體。
2.按照權利要求1所述制劑，其中抗菌肽為Pen-3a，分子大小為5.48 6.62KU(1U= IDa),是一類富含陽離子的分子，等電點為9.34 9.84。其氨基酸序列為pE VYKGGYTRPIPRPPPFVRPLPGGPIGPYNGCPVSCRGISFSQARSCCSRLGRCCHV GKGYS*注“*”代表C端酰胺化；pE代表焦谷氨酸；“P” “C”分別代表脯氨酸和半胱氨酸殘基。
3.按照權利要求2中所述抗菌肽氨基酸序列，Pen-3a的N端有一個富含脯氨酸的區 域，同時存在焦谷氨酸，C端以酰胺化形式存在，由三個分子內二硫鍵來維持穩定。
全文摘要
本發明公布一種南美白對蝦抗菌肽制劑及其在水產養殖中的應用。南美白對蝦抗菌肽制劑是通過將南美白對蝦抗菌肽的基因克隆到載體上，然后進入酵母細胞中表達、發酵制備而成。本發明南美白對蝦抗菌肽制劑能促進南美白對蝦生長，提高南美白對蝦免疫抗病能力。可做為綠色、環保的新型飼料免疫添加劑，減少乃至消除抗生素在水產品中的蓄積，提高水產品質量。
文檔編號A23K1/18GK102018101SQ200910018200
公開日2011年4月20日 申請日期2009年9月15日 優先權日2009年9月15日
發明者周嗣泉, 宋理平, 師吉華, 張延華, 潘曉玲, 王愛英, 胡斌, 軒子群, 馬國紅, 馬汝芳 申請人:山東省淡水水產研究所