專利名稱：生防細菌b579與殺菌劑協同應用技術的制作方法
技術領域：
本發明涉及生防細菌菌株與殺菌劑的協同應用的方法，具體涉及一種枯草芽孢桿 菌菌株與殺菌劑(多菌靈、甲霜靈)的相協同作用及其施用技術。
背景技術：
近年來，隨著棚室農作物種植密度及復種指數的增加，土壤養分失衡，致使黃瓜猝 倒病、立枯病、枯萎病等土傳病害(soil-bronedisease)發生嚴重，每年給農業生產造成的 直接經濟損失達40%-60%，嚴重地塊甚至達到80%以上。引起該病害的病原菌一般為多 寄主微生物，可以侵染數種乃至數百種農作物和雜草植物，具有很強的生活能力和侵染能 力，并且在惡略的環境下有特殊的生存方式，因此被植物界認定為最難防治的病害之一。目 前該病害的防治方法主要是利用抗病品種和化學藥劑防治為主，使用抗病品種可以達到經 濟有效的防治效果，但要獲得一個理想的抗病品種，并不是一件容易的事情，而且抗病品種 往往推廣幾年以后容易喪失抗性。化學藥劑防治是主要的防治手段，但是其效果不令人滿 意，而且嚴重破壞環境，作為病害防治方法之一的生物防治，在某些情況下具有良好的防治 效果，并成為當今研究和開發的熱點。生防細菌在土傳病害的防治中起著非常重要的作用，無論是自然發生的生物防治 現象還是人們用于生物防治的生物類型中，細菌的作用是非常明顯的，其主要優勢在于細 菌的種類和數量眾多，具有驚人的繁殖速度、許多細菌存在于植物根際和地上部，對植物的 生態比較適宜、細菌大多可以人工培養，便于控制，在實踐中易于操作、有些細菌不僅能防 治病害而且可以增加作物產量。因此生防細菌在生物防治中占有重要地位，越來越引起人 們的重視。芽孢桿菌存在于植物根圍，在長期的進化過程中與植物建立了密切的關系，它不 僅可以促進植物生長、抑制病原菌，而且本身繁殖速度快，可以通過人工大量繁殖施入土壤 中，以調節植物根部微生境，限制有害生物、增加有益微生物類群。其生防機制可歸納為 (1)營養基質的競爭和空間位點的排斥。生防細菌通過快速繁殖占領植物根部，減少了病原 菌孢子所必需的營養和空間。(2)分泌的嗜鐵素。由于嗜鐵素結合了根際有限的F:限制 了病原菌對F廣的利用，最終抑制病原菌的生長。(3)產生抗生素。國內外關于芽孢桿菌的研究較多，美國Agraquest公司用枯草芽孢桿菌QST713菌 株開發出活菌殺菌劑seuenade TM,并于2000年通過環保局的登記，用于防治多種作物的 白粉病、霜霉病、疫病、灰霉病等。此外，澳大利亞研究開發的B，subtilis A-13對麥類和胡 蘿卜立枯病和土傳病害具有很好的防病增產作用(David M ffeller,1998)；日本東京技術 研究所的 B. subtilis RB14 和 B. subtilisNB22 分別對 Rhizoctoni solanii 和 Fusarium oxysporum與Pseudomonas solanacearum弓I起的番爺病害也有良好的防效(Orie禾口 Makoto, 1996 ；Makoto和Takashi，1996)。近年來，雖然拮抗細菌的研究工作在我國十分活 躍，但大多停留在拮抗細菌的篩選和對某種病原菌的抑菌效果測定等階段，真正將其商品 化，并應用于實際生產的很少，歸納起來主要原因是這些生防細菌在田間施用后往往定殖能力弱，形不成足夠的生物群體，或者效果不穩定，忽高忽低。因此，探討生防細菌的應用技 術，使其發揮更大的生防效果已成為瓶頸問題。因而為解決生防制劑應用中所面臨的問題，同時減少化學農藥的施用劑量，提出 生防細菌菌株與化學藥劑混合使用，通過施用對植物病原菌有特異性的殺菌劑并引進對該 藥劑不敏感的生防細菌，實現控制植物病害的有益互作。對于提高生防制劑的防治效果，減 少化學農藥的使用劑量及農藥殘留將有一定的幫助。

發明內容
本發明旨在研究一種生防細菌菌株與化學殺菌劑協同應用的方法。本發明是通過以下技術方案實現上述發明目的。主要包括生防細菌菌株B579與殺菌劑的混合施用的方法，包括防治植物病原微 生物尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum)、立枯絲核菌(Rhizoctonia Solani)、瓜果腐霉菌 (pythium aphanidermatum)效果最佳的化學藥劑的篩選；多菌靈、甲基托布津、福美雙、惡 霉靈、甲霜靈、百菌清、霜霉威七種化學藥劑對生防細菌菌株B579生長的影響；殺菌劑(多 菌靈、甲霜靈)與生防細菌B579的協同作用及其田間施用技術，本發明的特征在于生物制 劑中引入特異性化學藥劑，旨在提高對植物病害的防效，減少化學藥劑的用量，更環保、更 安全、更有效。
具體實施例方式下面進一步詳述本發明。1、化學藥劑對三種植物病原菌的防治效果采用含藥介質法對三種病原菌進行毒力測定。以藥劑濃度的對數值為X，抑菌率的 機率值為Y，計算回歸方程及藥劑的EC5tl值和EC9tl(使50%和90%菌絲生長受到抑制的藥 劑濃度)。1. 1化學藥劑對立枯絲核菌(Rhizoctonia Solani)的毒力測定見表1表1化學藥劑對立枯絲核菌的毒力測定 由以上試驗可知抑制黃瓜立枯病菌效果最好的藥劑依次為多菌靈>福美雙>惡 霉靈> 甲基托布津> 甲霜靈>百菌清(EC5tl)多菌靈>福美雙> 甲基托布津>惡霉靈>甲 霜靈>百菌清(EC9tl)1. 2化學藥劑對瓜果腐霉菌(pythium aphanidermatum)的毒力測定見表2表2化學藥劑對瓜果腐霉菌的毒力測定結果 由表2可知抑制瓜果腐霉菌效果最好的藥劑依次為甲霜靈>惡霉靈>福美雙> 霜霉威(EC5tl)；甲霜靈>福美雙>惡霉靈>霜霉威(EC9tl)151. 3化學藥劑對尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum)的毒力測定見表3表3化學藥劑對尖孢鐮刀菌的毒力測定 由表3可知抑制黃瓜枯萎病菌效果最好的藥劑依次為多菌靈>惡霉靈>福美雙 >百菌清> 甲霜靈> 甲基托布津(EC5tl)；多菌靈>惡霉靈>百菌清>福美雙> 甲霜靈>甲 基托布津(EC9tl)有以上試驗可知對于尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum)、立枯絲核菌(Rhizoctonia Solani)、效果最好的化學藥劑為多菌靈，對于瓜果腐霉菌(pythium aphanidermatum)效果最好的化學藥劑為甲霜靈。2.化學藥劑對生防細菌B579生長的影響采用平板涂布法測試化學藥劑對生防細菌B579生長的影響，將生防細菌在肉汁 胨斜面培養基上28°C培養24-48h后，加入無菌水搖勻，制備成菌懸液，分別在制備好的PDA 帶毒平板上滴加B579懸浮液lOOul，后刮平、涂勻，以無藥培養基為對照，每處理重復3次， 置于28°C培養箱中培養24h觀察菌落生長情況，菌落數與對照無差異為能正常生長，平板 上只有少數菌落，與對照有顯著差異為零星生長，平板上無菌落即為不能生長。表4七種化學藥劑對生防細菌B579生長的影響 X 表示不生長，-稍有抑制，+ 表示正常生長由上表可以看出只有福美雙對生防細菌B579生長影響較大，而福美雙近年來由 于比較容易出現藥害，生產上使用較少，而其他6種化學藥劑在低濃度下對B579生長無任 何影響，在高濃度下雖然出現抑制作用，但是生產上使用量根本達不到這么高的濃度，因此 認為以上化學藥劑(福美雙除外)對生防細菌B579生長無影響。3、多菌靈、甲霜靈與生防細菌B579協同作用對立枯絲核菌、瓜果腐霉菌、尖孢鐮 刀菌的毒力測定。采用十字交叉濾紙條及帶毒平板法進行化學藥劑與生防細菌B579聯合毒力測 定，分別設藥劑對照、生防細菌對照及無藥無菌對照，然后測量菌落半徑，計算抑菌率。3. 1化學藥劑多菌靈與B579對立枯絲核菌聯合毒力測定表5.多菌靈與B579協同作用對立枯絲核菌毒力測定結果
6 由上表可知化學藥劑多菌靈在10mg/l和5mg/l下，不論是有、無生防細菌，對立枯 絲核菌的抑制率相同，也就是化學藥劑其主導作用，而隨著濃度的降低，生防細菌的作用逐 漸明顯，24h調查時多菌靈濃度為0. 05-lmg/l時，防效為4. 2% -29%，而加入B579后防效 為37.5% _45.8%，顯然防效提高很多。同樣48h調查時，也有以上趨勢。3. 2.化學藥劑甲霜靈與B579對瓜果腐霉菌聯合獨立測定(24h)表6甲霜靈與B579協同作用對瓜果腐霉菌毒力測定 瓜果腐霉菌生長速度較快，因此只進行24h的結果測量，由表6可以看出，當甲霜 靈濃度在10mg/l時，不論是有生防細菌還是無生防細菌，抑菌率都為100%，而甲霜靈濃度 在低于5mg/l，時，對瓜果腐霉菌的抑菌率與生防細菌有很大關系，未添加生防細菌的抑菌 率明顯低于有生防細菌的處理，生防細菌單獨處理的抑菌率為40. 3%。因此化學藥劑甲霜 靈與生防細菌B579有增效作用。3. 3化學藥劑多菌靈與B579協同防治枯萎病由表7可知化學藥劑多菌靈在10mg/l和5mg/l下，不論是有、無生防細菌存在，對 鐮刀菌的抑制率相同，也就是化學藥劑占主導作用，而隨著化學藥劑濃度的降低，生防細菌 的作用逐漸明顯，24h調查時多菌靈濃度為0. 05-lmg/l時，防效為5. 3 % -21. 1 %，而加入 8579后防效為44.8% -62. 1%，顯然防效提高很多。同樣48h調查時，也有以上趨勢。表7多菌靈與B579對枯萎病菌聯合毒力測定 4.化學藥劑與生防細菌配比后田間試驗既要充分發揮化學藥劑對病原菌的弱化作用，又要充分發揮生防細菌的生防作 用，同時綜合上述試驗結果，我們提出化學藥劑與生防細菌的適合比例，50%多菌靈WP 與B579WP的比例為1 3，該混劑用于防治蔬菜苗期立枯病和枯萎病，25%甲霜靈WP與 B579WP的比例為1 1，該混劑用于防治蔬菜苗期猝倒病。將配比后的混劑進行田間試驗。4. 1多菌靈與生防細菌B579協同作用防治苗期立枯病田間藥效試驗試驗設六個處理，試驗設在為發生立枯病較嚴重地塊，混劑設3個濃度，分別為 1000倍、1500倍、2000倍，同時設兩個單劑為對照，另設清水對照。每個處理重復4次。表8混劑對立枯病的防治效果 由以上試驗結果可以看出，生防細菌在1500倍下對立枯絲核菌的防效為70. 6%， 50%多菌靈在1500倍下防效為61.9%，按照1 3 (化學藥劑生防菌)混合后，在1000 倍、1500倍、2000倍下防效分別為69. 8%、77. 0%、87. 3%，較單獨使用防效明顯提高，所以 化學藥劑50%多菌靈與生防細菌可濕性粉劑以1 3混合后，于黃瓜播種前土壤處理，施用 劑量在1500-2000倍下，能夠有效防治苗期立枯病的發生。4. 2甲霜靈與生防細菌B579協同作用防治苗期猝倒病田間藥效試驗表9混劑對猝倒病的防治效果 由表9可以看出，25 %甲霜靈可濕性粉劑1000倍下，對猝倒病的防效為60. 6 %，生 防細菌1500倍下對猝倒病的防效為48.2%，將25%的甲霜靈與生防細菌1 1混合后，在 1000倍、1500倍、2000倍下對猝倒病的防效分別為62. 4%,81. 8%,69. 7%，較單獨使用防 效明顯提高，所以化學藥劑25%甲霜靈與生防細菌可濕性粉劑以1 1混合后，于黃瓜播種 前進行土壤處理，施用劑量在1500-2000倍下，能夠有效防治苗期猝倒病病的發生。4. 3多菌靈與生防細菌B579協同作用防治枯萎病田間藥效試驗表10混劑對枯萎病的防治效果 由表10可以看出，50%多菌靈可濕性粉劑1500倍對枯萎病的防效為60. 5%，芽孢 桿菌可濕性粉劑對枯萎病防效為57.9%，將兩者1 3混合后，防效雖然有不同程度的提 高，但只有在1000倍下差異最顯著，防效達到71. 0%，因此化學藥劑50%多菌靈與生防細 菌可濕性粉劑以1 3混合后，于發病初期進行藥劑灌溉，施用劑量在1000倍-1500倍，能 夠有效防治枯萎病的發生。5.總結通過對生產上防治蔬菜立枯病、猝倒病、枯萎病的化學藥劑的篩選，可知多菌靈對 立枯病及枯萎病的效果最好，甲霜靈對猝倒病的效果最好，而且這兩種藥劑在IOOppm下對 生防細菌生長無任何影響。因此提出化學藥劑與生防菌混用，既可以發揮化學藥劑速效、弱 化病原菌的作用，又可以發揮生防菌持久、安全等作用，通過室內及田間協同作用試驗，進 一步驗證了化學藥劑及生防菌混合使用具有較強的增效作用，同時確定了該混劑的使用方 法、劑量及施用時期。
權利要求
一種利用生防細菌菌株與殺菌劑協同應用的方法，包括針對三種植物病原菌進行的化學藥劑的篩選，化學藥劑對生防細菌菌株B579生長的影響，以及殺菌劑(多菌靈、甲霜靈)與生防細菌B579的協同作用和施用技術，本發明的特征在于化學藥劑中引入生防菌，提高對植物病害的防效，減少化學藥劑的用量，更環保、更安全、更有效。
全文摘要
本發明涉及一種利用生防細菌B579與殺菌劑協同應用的方法。該方法主要包括用于防治尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum)、立枯絲核菌(RhizoctoniaSolani)、瓜果腐霉菌(pythium aphanidermatum)三種植物病原菌的七種化學藥劑(多菌靈、甲基托布津、福美雙、惡霉靈、甲霜靈、百菌清、霜霉威)的篩選，測試以上藥劑對生防細菌B579生長的影響，以及生防細菌B579與化學藥劑協同應用防治蔬菜立枯病、猝倒病、枯萎病的技術。該方法既可以發揮化學藥劑速效、弱化病原菌的作用，又可以發揮生防菌持久、安全等作用，達到有效控制蔬菜土傳病害的發生，減少化學農藥對環境的污染。
文檔編號A01N37/46GK101904341SQ200910069129
公開日2010年12月8日 申請日期2009年6月4日 優先權日2009年6月4日
發明者劉亦學, 劉曉琳, 劉水芳, 孫淑琴, 張惟, 楊秀榮 申請人:天津市植物保護研究所