專利名稱：：殺蟲真菌可乳粉劑的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種殺蟲真菌農(nóng)藥，特別涉及一種殺蟲真菌可乳粉劑。
背景技術：
：由于化學農(nóng)藥長期大量的使用，已嚴重破壞生態(tài)、污染環(huán)境，導致害蟲再猖獗。采用不污染環(huán)境、對人畜無毒的生物農(nóng)藥替代化學農(nóng)藥成為害蟲綜合控制的重要手段之一。真菌是最重要的殺蟲微生物類群，殺蟲真菌是唯一同時具有觸殺特性和流行性的病原微生物，其致病機制復雜，昆蟲不易產(chǎn)生抗性，對解決害蟲的抗藥性問題極具潛力。這使得應用真菌殺蟲劑防治害蟲受到國內(nèi)外的廣泛關注。殺蟲真菌農(nóng)藥現(xiàn)有的劑型有粉劑、可濕粉、油懸浮劑等。粉劑是殺蟲真菌最早開發(fā)與使用的劑型，它是將真菌菌絲或孢子與填充劑(如硅藻土、滑石粉、輕質碳酸鈣、高嶺土等)、抗紫外線輻射劑等添加物混合加工而成。粉劑有效克服殺蟲真菌不耐貯存的缺點，但粉劑直接噴粉后，孢子或菌絲段需要依靠從環(huán)境中吸收水分而萌發(fā)或重新生長，而真菌孢子萌發(fā)或重新生長要求高濕度條件，受環(huán)境中濕度變化的影響大，田間應用的穩(wěn)定性較差。因此，殺蟲真菌粉劑難以在干燥條件下使用；另外還容易隨風飄散，產(chǎn)生粉塵，污染環(huán)境。可濕性粉劑具有使用方便，防治范圍廣，對環(huán)境安全和能促進疏水的真菌孢子在水中迅速分散的優(yōu)點，一度成為殺蟲真菌制劑研究的熱點。目前登記注冊的殺蟲真菌可濕性粉劑占注冊真菌農(nóng)藥的40%左右。但可濕粉劑中孢子容易吸水受潮，導致耐儲性低；而且添加的高濃度表面活性劑受潮后與真菌孢子長時間接觸，必然影響真菌孢子萌發(fā)力，導致田間防效不穩(wěn)定。近年來采用的油懸浮劑雖然成功地克服了真菌孢子難以在干燥環(huán)境中使用、殺蟲效果受環(huán)境中濕度影響的缺陷，但使用時需用油或專用稀釋液稀釋后噴藥，受制劑粘度限制只能采用超低容量噴霧機進行噴霧施藥，僅適用于防治集中發(fā)生的少數(shù)重大害蟲，而不適合常年性分散發(fā)生的大多數(shù)農(nóng)業(yè)害蟲防治，不適宜農(nóng)村農(nóng)林害蟲群眾防治的基本植保方式，這極大的制約了殺蟲真菌制劑的推廣使用。因此，研制使用方便、穩(wěn)定耐儲、受環(huán)境影響小的殺蟲真菌油基性新劑型成為殺蟲真菌制劑研究的熱點。Batta(2004)嘗試把孢子加入水中與乳化劑混合加工成油包水的水乳劑，雖然能增加防治效果，但由于制劑中含有水，不能長期保存，IO周后孢子萌發(fā)率降低至80%以下。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種高活性、穩(wěn)定耐儲、使用方便的殺蟲真菌可乳粉劑。該殺蟲真菌可乳粉劑是由下述重量配比的組分組成殺蟲真菌孢子粉或菌絲體4060，表面活性劑占510，植物油占515，穩(wěn)定劑510，分散劑0.11;其中所述殺蟲真菌是綠僵菌、白僵菌、擬青霉、被毛孢或其混合菌；所述表面活性劑是非離子型表面活性劑；所述植物油是棕櫚油、玉米油、大豆油、棉子油和菜籽油中的一種或多種按任意比例的混合物；所述穩(wěn)定劑是黃原膠、羧甲基纖維素、明膠中的一種或多種按任意比例的混合物；所述分散劑是DW1003，葡萄糖脂肪酸酯或其混合物。所述非離子型表面活性劑可以選自司盤Span、吐溫Tween、曲拉通(Tritone)，最好是司盤、吐溫、曲拉通的一種或多種按任意比例的混合物。該殺蟲真菌可乳粉劑中還可以加入重量份0.21.0的抗氧化劑，抗氧化劑是BHA、BHT、維生素E中的一種或多種按任意比例的混合物。為增強該該殺蟲真菌可乳粉劑的滲透性，還可以加入重量份是0.51.0的滲透劑，氮酮、801、804中的一種或多種按任意比例的混合物。該殺蟲真菌可乳粉劑中還可以加入重量份是(0.010.05)的化學農(nóng)藥作為增效劑，如天然除蟲菊酯、氰戊菊酯、三氟氯氰菊酯、高效氯氰菊酯等。以上助劑的選取是以相容增效為原則。本發(fā)明適用于真菌通過液體一固體發(fā)酵獲得的孢子、菌絲體或其混合物的加工制作。真菌可乳粉劑加工方法流程1)按比例配制含表面活性劑、滲透劑、抗氧化劑的植物油；2)采用高速噴霧攪拌技術，按所述重量份數(shù)將步驟l)所述植物油均勻地包裹在干燥的真菌孢子表面上，形成一薄層保護性油膜；3)按所述比例把步驟2)所得真菌油孢子粉與穩(wěn)定劑、分散劑在攪拌器中混合均勻即可得到本發(fā)明。本發(fā)明針對目前真菌制劑中干粉制劑田間防效不穩(wěn)定和貯存期短，而油懸浮劑不便常規(guī)噴霧、真菌生物農(nóng)藥常量噴霧劑型缺乏的現(xiàn)狀，依據(jù)真菌生物農(nóng)藥的生物學特性，依據(jù)微生物農(nóng)藥相容增效的配伍原理，按照優(yōu)化配方將表面活性劑、穩(wěn)定劑、分散劑等助劑成分混合配制而成穩(wěn)定的可乳粉劑，使用時按比例直接加水稀釋后采用常量噴霧器進行常規(guī)噴霧即可。本發(fā)明的殺蟲真菌可乳粉劑具有以下優(yōu)點1、穩(wěn)定耐儲。選用的表面活性劑等助劑與真菌相容，以真菌可乳粉劑的形式貯存和運輸，儲運方便，能有效延長真菌孢子貯存時間，便于制劑長期貯存。2、高活性。本發(fā)明真菌孢子表面的油膜起到保護膜的作用，并維持孢子低的干燥減量，減少真菌孢子與環(huán)境中氧氣和水分的接觸，油膜中抗氧化劑進一步降低孢子與氧的作用，使真菌孢子在儲存期代謝處于低的水平而保持高活性。殺蟲真菌可乳粉劑直接加水稀釋后形成水包油、油包孢子的水乳劑(c/o/w)，受環(huán)境影響小，防效穩(wěn)定。施用后，油能有效吸收紫外線，降低紫外線對真菌孢子的損傷，提高了活性，有效提高田間防效穩(wěn)定性。3、施藥方便。可直接加水后采用手動噴霧器進行常量噴霧，簡化了真菌制劑的施用方法；因為與真菌菌絲體或孢子相容的表面活性劑一方面穩(wěn)定分散劑，另一方面使分散劑易與油孢子混勻，兌水后孢子能均勻穩(wěn)定地分散在水中，便于常規(guī)噴霧器施藥，特別適合農(nóng)民一家一戶小面積使用。同時也可以與相容增效的多種化學農(nóng)藥混合使用。4、加工生產(chǎn)工藝簡單，容易與其他相容增效的農(nóng)藥復配使用。5、使用成本低。在田間可用水代替油或專用稀釋液稀釋分散有效成分。本發(fā)明既保存油懸浮劑的貨架期長的優(yōu)點，又克服傳統(tǒng)粉劑不耐貯存以及油懸浮劑的使用不便等缺陷，適合我國廣大農(nóng)戶使用，為農(nóng)林果樹、蔬菜害蟲的生物防治提供一種真菌農(nóng)藥的新劑型。為了證明本發(fā)明在儲存時間、耐紫外線特性、耐干燥、熱穩(wěn)定性等方面的優(yōu)越性，做了以下實驗實驗一、真菌可乳粉劑的儲存穩(wěn)定性分別取實施例1所配制的真菌可乳粉劑和干孢子粉5g，裝入2個50ml的燒杯中分別在溫度為26土rC，濕度為95%、75%、55%、35%的環(huán)境放置10天，每個樣品分別混勻，取出0.lg分別放入1.5ml的離心管，在高溫(55°C)恒溫水浴鍋處理4小時后用0.05%吐溫一80滅菌水配成3X107spores/ml濃度的孢子懸浮液，用移液器取lOOul均勻涂布在放有直徑為9mm玻璃紙圓片的1/4SDA平板上，26土1。C恒溫培養(yǎng)，設置未處理對照，24小時后取玻璃紙圓片用棉藍染色后鏡檢，計數(shù)200_300個孢子，記錄萌發(fā)的孢子數(shù)，計算萌發(fā)率，每一處理三個重復。表1真菌可乳粉劑與干孢子粉的熱穩(wěn)定性<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>從表1可以看出未加熱處理的真菌可乳粉劑與干孢子粉熱穩(wěn)定性無明顯差異，而真菌可乳粉劑在相對濕度》75%環(huán)境中貯存一段時間后，其耐熱性明顯高于干孢子粉。如在75%、95%的環(huán)境濕度常溫貯存10天后，經(jīng)過55"C恒溫處理4小時，真菌可乳粉劑的萌發(fā)率分別為80.6%、67.1%，顯著高于干孢子粉65.5%、42.4%的萌發(fā)率水平，孢子的熱穩(wěn)定性與孢子的貯存時間正相關，說明真菌可乳粉劑耐貯性優(yōu)于干孢子粉。實驗二、本發(fā)明的耐紫外線特性取實施例6所配制的綠僵菌真菌可乳粉劑7g與100ml分散劑混合后，加水稀釋300倍，用移液器取100ul均勻涂抹在放有直徑為9mm玻璃紙圓片的1/4SDAY平板上，在干燥器中晾干(無水膜)后置于距30w的紫外燈35cm的地方垂直照射60S后，取出放入26"C恒溫箱內(nèi)進行培養(yǎng)，以孢子濃度為3X107SpOreS/ml的綠僵菌油懸浮劑、水分散劑和干孢子粉為對照。不同時間取出玻璃紙圓片棉藍染色后鏡檢，計數(shù)200—300個孢子，記錄萌發(fā)的孢子數(shù)，計算萌發(fā)率，第一次6h檢測，以后每隔3h檢査一次各自的萌發(fā)率。從圖l看出可乳粉耐紫外線能力接近綠僵菌油懸浮劑，經(jīng)紫外線處理60s后，它們的36h的萌發(fā)率分別為82.0%和93.3%，顯著高于綠僵菌水分散劑和干孢子粉，紫外線處理綠僵菌水分散劑和干孢子粉60s，培養(yǎng)36h后的萌發(fā)率分別為為42.1%與28.3%。實驗三、本發(fā)明的耐干燥特性取實施例6所配制的的綠僵菌可乳粉劑加水100ml稀釋300倍后噴霧于東亞飛蝗膜翅上，分別放在溫度為26'C、相對濕度為100%、90%、80%、70%的容器中，設干孢子粉與孢子濃度為3X107spores/ml水分散劑作對照，36h后用棉藍染色后鏡檢，計數(shù)200—300個孢子，記錄萌發(fā)的孢子數(shù)，計算萌發(fā)率。重復3次。表2不同劑型綠僵菌孢子在不同濕度條件下的萌發(fā)率(％)劑型相對濕度100%90%80%70%可乳粉劑91.8±3.556.2±5.119.5±2.10.7干孢子粉92.3±1.819.4±1.80-水分散劑93.9±2.223.7±2.00-從表2以看出在飽和濕度下，幾種制劑的萌發(fā)率沒有顯著差異；環(huán)境濕度為90%時可乳粉萌發(fā)率為56.2%，顯著高于綠僵菌干孢子粉和水分散劑在相同濕度環(huán)境中的的萌發(fā)率(19.4%、23.7%),在環(huán)境濕度70%時，干孢子粉不萌發(fā)，說明的耐旱能力高于綠僵菌水分散劑及其干孢子粉。實驗四不同殺蟲真菌孢子的熱穩(wěn)定性按表3分別配制綠僵菌、白僵菌和擬青霉的含不同表面活性劑的殺蟲真菌可乳粉劑，各取0.2g殺蟲真菌可乳粉劑裝入1.5ml的離心管中，在高溫(55°C)恒溫水浴鍋處理1小時，用接種環(huán)挑取少許接種在1/4SDA平板中的直徑為9mm玻璃紙圓片上，均勻涂布，26土rC恒溫培養(yǎng)，設不加表面活性劑處理對照，24小時取玻璃紙圓片用棉藍染色后鏡檢，計數(shù)200—300個孢子，記錄萌發(fā)的孢子數(shù)，計算萌發(fā)率，每一處理三個重復。表3不同真菌孢子可乳粉劑的耐熱性測試結果(55°C，l小時)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>從表3可以看出三種不同的殺蟲真菌孢子在不同表面活性劑的可乳粉劑中經(jīng)高溫處理后孢子萌發(fā)率無明顯差異，說明可乳粉適用于不同類型真菌。實驗五、綠僵菌不同配方可乳粉劑防效測定以殺蝗綠僵菌為試驗菌株，按表4用植物油配制含不同表面活性劑的20%綠僵菌(含100億孢子/克)可乳粉劑。從室內(nèi)詞養(yǎng)的東亞飛蝗種群中，挑選34齡體重基本相同的若蟲，放入種有麥苗的直徑為35cmX50cm網(wǎng)籠中，每處理50頭。不同綠僵菌可乳粉劑用水300倍稀釋后按5000ul/籠的用量常量噴霧。設20%綠僵菌油懸浮劑以色拉油3倍稀釋后按50ul/籠的用量超低容量噴霧為對照。重復3次。調節(jié)養(yǎng)蟲室室溫至28'C，相對濕度30-60%，三天后更換新鮮麥苗。每天定時觀察，記載各處理的死蟲數(shù)，用DPS軟件計算LT9()。表4不同配方的綠僵菌可乳粉劑的毒力測定制劑表面活性劑分散劑~~滲透劑抗氧化劑~~LT90(d)~~注Span:司盤；T:Tween;Tr:TritoneX100。從表4可以看出上述①⑤不同20%綠僵菌可乳粉劑用300倍水稀釋后超常量容量噴霧防治東亞飛蝗的LT9。與對照綠僵菌懸浮劑沒有顯著差異(p二0.05)，說明綠僵菌可乳粉劑在高溫、低濕的環(huán)境條件下殺蟲效果穩(wěn)定，防效與綠僵菌油懸浮劑一致。實驗六、綠僵菌可乳粉劑對菜青蟲的防效用植物油和含200億孢子/克綠僵菌孢子粉配制含20%綠僵菌、15%表面活性劑(包括5XSpan和5XTween和曲拉通5X)、0.8%紫外光保護劑和0.5%丁基烴基甲苯的綠僵菌可乳粉劑。用0.5%的吐溫水溶液配置含量為1.6xl07包子/ml的孢子懸浮液。選取2-3齡菜青蟲幼蟲作為供試昆蟲，綠僵菌可乳粉劑用水稀釋不同倍數(shù)后采用不同方式噴霧。設1.0><107孢子/ml綠僵菌孢子水懸浮液(CK)和不施藥(CKO)對照。調節(jié)養(yǎng)蟲室室溫至25士3。C，相對濕度30-60%，以清潔甘藍葉飼喂幼蟲。每天定時觀察，記載各處理的死蟲數(shù)，并計算施藥后10天的校正死亡率。S(25%)7%119.4±1.7aT(2~5%)7%0.70.88.7±1.5aS(3%)+T(4%)3%0.50.76.5±1.labS(2%)+T(3%)+Tr(1%)5%0.30.67.7±1.3aS(2.5%)+T(2.5%)+Tr(5%)3%0.10.57.9±0.9a03%0010.5±1.7a①②③④⑤g<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>從表5可以看出綠僵菌可乳粉劑用水稀釋不同倍數(shù)后采用常量噴霧施藥方式防治蔬菜害蟲,在施藥后第8天的校正死亡率分別為92.4%、86.9%、82.6%，都明顯高于1.0Xl(^孢子/ml綠僵菌孢子水懸浮液69.1%校正死亡率，說明綠僵菌可乳粉劑在高溫、低濕的條件采用常量噴霧方法能有效防治菜青蟲、小菜蛾、斜紋夜蛾等蔬菜害蟲，防效優(yōu)于綠僵菌水懸浮劑。說明書附圖圖1紫外線對不同劑型綠僵菌孢子萌發(fā)的影響具體實施例實施例1~12，如下表6取各種含量的組分，先配制含表面活性劑、滲透劑、抗氧化劑的植物油，再采用高速噴霧攪拌技術，將上述植物油均勻地包裹在干燥的真菌孢子表面上，形成一薄層保護性油膜；最后將真菌油孢子粉與穩(wěn)定劑、分散劑在攪拌器中混合均勻即可。實施例13，在上表所述共12個實施例的基礎上，各例分別增加抗氧化劑(BHA、BHT、維生素E中的一種或多種按任意比例的混合物)，重量(千克)分別是0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、0.85、0.45、0.65。表6配制可乳粉劑所用的組分及其含量(重量千克)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>實施例14，在上表所述共12個實施例的基礎上，各例分別增加滲透劑(氮酮、801、804中的一種或多種按任意比例的混合物)，重量(千克)分別是O.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、0.85、0.45、0.65、0.55、0.75、0.95。實施例15，在上表所述共15個實施例的基礎上，各例分別增加重量份是(0.10.5)的化學農(nóng)藥增效劑(天然除蟲菊酯、三氟氯氰菊酯、高效氯氰菊酯中的一種或多種按任意比例的混合物)，重量(千克)分別是0.1、0.2、0.3、0.4、0.5。實施例16，在上表所述共12個實施例的基礎上，各例按所述重量份數(shù)同時增加抗氧化劑、滲透劑、化學農(nóng)藥增效劑的兩種或三種。權利要求1、一種殺蟲真菌可乳粉劑，其特征是由下述重量配比的組分組成殺蟲真菌孢子粉或菌絲體占40～60，表面活性劑占5～10，植物油占5～15，穩(wěn)定劑5～10，分散劑0.1～1；其中所述殺蟲真菌是綠僵菌、白僵菌、擬青霉、被毛孢或其混合菌；所述表面活性劑是非離子型表面活性劑；所述植物油是棕櫚油、玉米油、大豆油、棉子油和菜籽油中的一種或多種按任意比例的混合物；所述穩(wěn)定劑是黃原膠、羧甲基纖維素、明膠中的一種或多種按任意比例的混合物；所述分散劑是DW1003，葡萄糖脂肪酸酯或其混合物。2、如權利要求1所述的殺蟲真菌可乳粉劑，其特征是加入重量份O.2l.O的抗氧化劑。3、如權利要求2所述的殺蟲真菌可乳粉劑，其特征是所述抗氧化劑是BHA、BHT、維生素E中的一種或多種按任意比例的混合物。4、如權利要求1所述的殺蟲真菌可乳粉劑，其特征是加入重量份是0.51.0的滲透劑。5、如權利要求4所述的殺蟲真菌可乳粉劑，其中所述滲透劑是氮酮、801、804中的一種或多種按任意比例的混合物。6、如權利要求1所述的殺蟲真菌可乳粉劑，其中所述非離子型表面活性劑是SPAN、TWEEN、曲拉通的一種或多種按任意比例的混合物。全文摘要本發(fā)明提供了一種殺蟲真菌可乳粉劑，由下述重量配比的組分組成殺蟲真菌孢子粉或菌絲體40～60，植物油占5～15，表面活性劑占5～10，穩(wěn)定劑5～10，分散劑0.1～1；其中所述殺蟲真菌是綠僵菌、白僵菌、擬青霉、被毛孢或其混合菌；所述表面活性劑是非離子型表面活性劑；所述植物油是棕櫚油、玉米油、大豆油、棉子油和菜籽油中的一種或多種按任意比例的混合物；所述穩(wěn)定劑是黃原膠、羧甲基纖維素、明膠中的一種或多種按任意比例的混合物；所述分散劑是DW1003，葡萄糖脂肪酸酯或其混合物。本發(fā)明儲運方便，能有效延長真菌孢子貯存時間，便于制劑長期貯存；制劑活性較高；施用后，油能有效吸收紫外線，降低紫外線對真菌孢子的損傷，有效提高田間防效穩(wěn)定性；加工生產(chǎn)工藝簡單，容易與其他相容增效的農(nóng)藥復配使用。文檔編號A01P7/00GK101564047SQ20091010397公開日2009年10月28日申請日期2009年5月27日優(yōu)先權日2009年5月27日發(fā)明者彭國雄,殷幼平,王中康,寧謝申請人:重慶大學