專利名稱：一種金線蓮組培培養基的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種植物培養基，具體是金線蓮組織培養用的培養基。
背景技術：
金線蓮，拉丁名為Anoectochilus Formosanus Hayata，是蘭科開唇蘭屬植物，兼具賞葉和觀花之功用，是觀賞價值極高的室內花卉珍品，但其主要價值在于藥用。金線蓮素有“金草”、“神藥”、“藥王”、“鳥人參”等美稱。經有關部門測定發現，金線蓮中氨基酸組成、 成分、含量及抗衰老活性微量元素的含量高于野生西洋參。全草藥用，性味甘、淡、平、涼，具有清熱、涼血、祛風利濕、強心利尿、固腎平肝以及降血壓等功效，被稱為“藥中之王”。由于金線蓮的顯著的藥用功效及保健功能已為世人公認，其商品價格多年來一直不菲。金線蓮生長于臺灣、福建、浙江等省海拔200 1800米的溫帶山林下，性喜陰涼、 潮濕，尤其喜歡生長在有常綠闊葉樹木的溝邊、石壁、土質松散的潮濕地帶，要求溫度18 23°C，光照約為正常日照的1/3，最忌陽光直射。由于金線蓮屬植物的種子不具胚乳，無發芽能力，只有在真菌共生下，才促進種子萌發生長，發芽率很低，長期以來其有性繁殖未取得突破性進展；加之其對生長條件要求嚴格、自然條件惡化、野生資源銳減、人為肆意采挖，現已瀕臨滅絕，致使藥源緊缺，國內外市場供不應求。近年來，許多專家學者為保護這一珍貴的藥用植物資源，做了大量的研究工作。野生金線蓮雖然現已瀕臨滅絕，但經過廣大研究者們的努力，諸多專家學者進行了金線蓮的組培快繁和人工栽培技術研究；但由于人工栽培成活率低的原因，目前總體生產規模小而分散、繁殖未能商品化，未形成規范的繁殖和人工栽培體系，其生產也未形成規模化。采用現代組織培養生物技術和人工栽培技術，可使野生金線蓮變家種，不僅能大大加快繁殖速度，使金線蓮的質量均衡一致，更適合規范化管理；而且利于保護其野生資源，解決中藥材來源匱乏的問題，同時還能滿足人民用藥需要，繁榮農村經濟，增加創匯來源，促進我國植物藥產業逐步走向國際化和規范化，促進我國中醫藥事業的發展。因此，金線蓮的組培技術有著重要的現實意義。組培(組織培養)技術的核心是培養基配方，它決定了金線蓮組培過程的生長速度，成活率以及繁殖倍數。

發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一種金線蓮組培培養基，該培養基應具有加快金線蓮組培過程的生長速度、降低感染率以及增多繁殖倍數的特點，并且制作培養基方法簡單、方便、成本低。本發明提供的技術方案是一種金線蓮組培培養基，其中包括的成分及含量為 香蕉或土豆 50-100g/L, NAAO. l-3mg/L, 6BA0. l_5mg/L，白糖 25g/L，花寶 1 號 l_3g/L，
花寶5號l-3g/L，蛋白胨2-4g/L，瓊脂粉5-7g/L，活性炭0. l_3g/L，包括大量元素、微量元素、鐵鹽和有機成分的MS，其余是水，pH值5. 8-6. O ；
所述大量元素為硝酸鉀700-1900mg/L，硝酸銨700_1700mg/L，磷酸二氫鉀70_170mg/L，硫酸鎂 170-400mg/L，氯化鈣 200_450mg/L，
所述微量元素為碘化鉀0. 4-lmg/L，硼酸3-7mg/L，硫酸錳10_25mg/L，硫酸鋅 4-10mg/L，鉬酸鈉 0. 05-0. 5mg/L，硫酸銅 0. 005-0. 05mg/L，氯化鈷 0. 005-0. 05mg/L, 所述鐵鹽為乙二胺四乙酸二鈉17-40mg/L，硫酸亞鐵12-30mg/L， 所述有機成分為肌醇50mg/L，甘氨酸0. 5-2mg/L,鹽酸硫胺素0. 05-0. 5mg/L，鹽酸吡哆醇 0. 05-0. 5mg/L，煙酸 0. 05-0. 5mg/L, 所述的NAA為萘乙酸； 所述的6BA為6-芐氨基腺嘌呤；
所述的花寶1號由硝態氮、氧化磷、氧化鉀組成，配比為7:6:19 ； 所述的花寶5號由硝態氮、氧化磷、氧化鉀組成，配比為30:10:10。該培養基的pH値用NaOH或HCL來調節。所述活性炭的細度為100-200目。本發明提供的培養基，具有以下優點1)所制成的培養基應能使金線蓮組培過程的生長速度加快(3個半月就可長成母苗)，成活率提高(成活率95%以上)以及繁殖倍數增多(增殖倍數大于5倍)。2)制作方法簡單、方便；3)由于該配方以白糖和香蕉(或者土豆) 為主要原料，不僅取材方便，來源廣泛，價格低廉，還極大地節省了生產成本，可進行大面積的推廣。
具體實施例方式杭州鼎韻農業開發有限公司采用本發明提供的培養基，用于金線蓮組培試驗取得顯著效果；曾試用了 50組不同配方的培養基，唯有本發明的效果最為理想。本發明所述的母苗的標準是植株直徑在2. 5mm-3. Omm之間，高度在IOcm左右，重量在1. Og-1. 5g之間。本發明中的PH值為5. 8-6.0，采用NaOH或HCL來調節；優選濃度低一些(如1 的 NaOH 或 HCL。本發明的制作十分簡單，只需把所有原料混合攪拌均勻即可。以下通過具體實施例進一步清楚地闡述本發明；但它們不是對本發明的限定。實施例1(母苗培養基)
選健壯的母苗(取用金線蓮的莖的每1-2節)，培養基的成分及含量是(每升中的重量)NAA lmg/L，6BA lmg/L，白糖 25g/L，花寶 1 號 lg/L，花寶 5 號 lg/L，蛋白胨 2g/ L，瓊脂粉5g/L，香蕉或者土豆70g/L，活性炭(80目)lg/L，包括大量元素、微量元素、鐵鹽和有機成分的MS，其余是水。所述大量元素為硝酸鉀700mg/L，硝酸銨700mg/L，磷酸二氫鉀70mg/L，硫酸鎂 170mg/L，氯化鈣 450mg/L;
微量元素為碘化鉀0. 4mg/L，硼酸;3mg/L，硫酸錳10mg/L，硫酸鋅％ig/L，鉬酸鈉 0. 05mg/L，硫酸銅 0. 005mg/L，氯化鈷 0. 005mg/L ；
鐵鹽為乙二胺四乙酸二鈉17mg/L，硫酸亞鐵12mg/L ；
有機成分為肌醇50mg/L，甘氨酸0.5mg/L，鹽酸硫胺素0.05mg/L，鹽酸吡哆醇 0. 05mg/L，煙酸 0. 05mg/L ；pH值為5. 8，采用1 %的NaOH或HCL來調節。該培養基組培金線蓮，植株大小均衡一致，3個半月就可長成母苗。實施例2 (母苗培養基)
選健壯的母苗(取用金線蓮的莖的每1-2節)，培養基的成分及含量是(每升中的重量) NAAlmg/L，6BAang/L，白糖 25g/L，花寶 1 號 1. 5g/L，花寶 5 號 1. 5g/L，蛋白胨 2. 5g/L， 瓊脂粉5. 5g/L，香蕉或土豆70g/L，活性炭(150目)lg/L，其余是水； 所述的MS包括以下含量的大量元素、微量元素、鐵鹽以及有機成分 大量元素為硝酸鉀1200mg/L，硝酸銨1000mg/L，磷酸二氫鉀100mg/L，硫酸鎂220mg/ L,氯化鈣 300mg/L ；
微量元素為碘化鉀0. 6mg/L，硼酸％ig/L，硫酸錳15mg/L，硫酸鋅6mg/L ，鉬酸鈉 0. 2mg/L，硫酸銅 0. 02mg/L，氯化鈷 0. 2mg/L ；
鐵鹽為乙二胺四乙酸二鈉25mg/L，硫酸亞鐵18mg/L ；
有機成分為肌醇50mg/L，甘氨酸lmg/L，鹽酸硫胺素0. 02mg/L,鹽酸吡哆醇0. 02mg/L, 煙酸 0. 02mg/L ；
PH值為5. 9，采用1 %的NaOH或HCL來調節。該培養基組培金線蓮，植株大小均衡一致，3個半月就可長成母苗。實施例3 (壯苗培養基)
1)取母苗的頂芽1-2節，培養基的成分及含量是(每升中的重量) NAA2mg/L,6BA4mg/L,白糖 25g/L，花寶 1 號 2g/L，花寶 5 號 2g/L，蛋白胨 3. 5g/L，瓊脂粉6g/L，香蕉或土豆85g/L，活性炭(200目)2g/L，包括大量元素、微量元素、鐵鹽和有機成分的MS，其余是水。所述大量元素為硝酸鉀1600mg/L，硝酸銨1500mg/L，磷酸二氫鉀150mg/L，硫酸鎂 320mg/L，氯化鈣 400mg/L ；
微量元素為碘化鉀0. 8mg/L,硼酸5mg/L，硫酸錳20mg/L，硫酸鋅8mg/L，鉬酸鈉 0. %ig/L，硫酸銅 0. 03mg/L,氯化鈷 0. 03mg/L ；
鐵鹽為乙二胺四乙酸二鈉40mg/L，硫酸亞鐵30mg/L ；
有機成分為肌醇50mg/L，甘氨酸1. 5mg/L,鹽酸硫胺素0. 3mg/L,鹽酸吡哆醇0. 3mg/L, 煙酸 0. 2mg/L ；
PH值為6. 0，采用1 %的NaOH或HCL來調節。該配方組培金線蓮，植株大小均衡一致，2個半月就可長成成苗用于大棚定植；感染率在4. 55%，增殖倍數6倍。此外組培得到的金線蓮苗成活率96%。2)取剩下莖的每1-2節，使用實施例1所述的培養基，3個半月就可長成母苗。相比之下，壯苗配方可以利用頂芽的增長優勢，比母苗配方早一個月用于大棚定植。實施例4 (壯苗培養基)
1)取母苗的頂芽1-2節，培養基的成分及含量是(每升中的重量) NAA3mg/L, 6BA5mg/L，白糖 25g/L，花寶 1 號 3g/L，花寶 5 號 3g/L，蛋白胨 4g/L，瓊脂粉7g/L，香蕉或土豆100g/L，活性炭(300 g》g/L，包括大量元素、微量元素、鐵鹽和有機成分的MS，其余是水。所述大量元素為硝酸鉀1900mg/L，硝酸銨1700mg/L，磷酸二氫鉀170mg/L，硫酸鎂 400mg/L，氯化鈣 450mg/L ；
微量元素為碘化鉀lmg/L，硼酸7mg/L，硫酸錳25mg/L，硫酸鋅10mg/L，鉬酸鈉0. 5mg/ L,硫酸銅 0. 05mg/L，氯化鈷 0. 05mg/L ；
鐵鹽為乙二胺四乙酸二鈉40mg/L，硫酸亞鐵30mg/L ；
有機成分為肌醇50mg/L，甘氨酸ang/L，鹽酸硫胺素0. 5mg/L,鹽酸吡哆醇0. 5mg/L,煙酸 0. 5mg/L ；
PH值為6. 0，采用1 %的NaOH或HCL來調節。該配方組培金線蓮，植株大小均衡一致，2個半月就可長成成苗用于大棚定植；感染率在4%，增殖倍數在5. 5倍。此外組培得到的金線蓮苗成活率97%。2)取剩下莖的每1-2節，使用實施例3所述的培養基，3個半月就可長成母苗(也可直接用于大棚定植)；相比之下壯苗配方可以利用頂芽的增長優勢比母苗配方早一個月用于大棚定植。
權利要求
1.一種金線蓮組培培養基，其中包括的成分及含量為香蕉或土豆 50-100g/L，NAAO. l-3mg/L, 6BA0. l_5mg/L，白糖 25g/L，花寶 1 號 l_3g/L， 花寶5號l-3g/L，蛋白胨2-4g/L，瓊脂粉5-7g/L，活性炭0. l_3g/L，包括大量元素、微量元素、鐵鹽和有機成分的MS，其余是水，PH值5. 8-6. 0 ；所述大量元素為硝酸鉀700-1900mg/L，硝酸銨700_1700mg/L，磷酸二氫鉀70_170mg/ L，硫酸鎂 170-400mg/L，氯化鈣 200_450mg/L ；所述微量元素為碘化鉀0. 4-lmg/L,硼酸3-7mg/L，硫酸錳10_25mg/L，硫酸鋅 4-10mg/L，鉬酸鈉 0. 05-0. 5mg/L，硫酸銅 0. 005-0. 05mg/L，氯化鈷 0. 005-0. 05mg/L ； 所述鐵鹽為乙二胺四乙酸二鈉17-40mg/L，硫酸亞鐵12-30mg/L ； 所述有機成分為肌醇50mg/L，甘氨酸0. 5-2mg/L,鹽酸硫胺素0. 05-0. 5mg/L,鹽酸吡哆醇 0. 05-0. 5mg/L,煙酸 0. 05-0. 5mg/L ； 所述的NAA為萘乙酸； 所述的6BA為6-芐氨基腺嘌呤；所述的花寶1號由硝態氮、氧化磷、氧化鉀組成，配比為7:6:19 ； 所述的花寶5號由硝態氮、氧化磷、氧化鉀組成，配比為30:10:10。
2.根據權利要求1所述的一種金線蓮組培培養基，其特征在于該培養基的PH値用 NaOH或HCL來調節。
3.根據權利要求2所述的一種金線蓮組培培養基，其特征在于所述活性炭的細度為 100-200 目。
全文摘要
本發明涉及一種金線蓮組織培養用的培養基。所要解決的技術問題是提供的培養基應具有加快金線蓮組培過程的生長速度、降低感染率以及增多繁殖倍數的特點，并且制作培養基方法簡單、方便、成本低。技術方案是一種金線蓮組培培養基，其中包括的成分及含量為香蕉或土豆50-100g/L；NAA0.1-3mg/L；6BA0.1-5mg/L；白糖25g/L；花寶1號1-3g/L；花寶5號1-3g/L；蛋白胨2-4g/L；瓊脂粉5-7g/L；活性炭0.1-3g/L；包括大量元素、微量元素、鐵鹽和有機成分的MS，其余是水，pH值5.8-6.0。
文檔編號A01H4/00GK102499074SQ201110294979
公開日2012年6月20日 申請日期2011年9月30日 優先權日2011年9月30日
發明者王瑩, 王雁 申請人:杭州鼎韻農業開發有限公司