專利名稱：一種木耳液體凍干菌種的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及食用菌菌種培養(yǎng)領(lǐng)域，具體地說是一種木耳液體凍干菌種的生產(chǎn)方法。
背景技術(shù)：
木耳人工栽培所使用的菌種多采用固體發(fā)酵法制備，但該法生產(chǎn)周期長、勞動強(qiáng)度大、勞動效率低、易受雜菌污染，同固體菌種相比，液體菌種具有周期短、菌齡整齊發(fā)菌快、接種方便、不易污染等優(yōu)點(diǎn)，是未來食用菌制種的發(fā)展方向。但液體菌種也有不易儲藏和運(yùn)輸?shù)娜秉c(diǎn)，限制了液體制種技術(shù)在食用菌栽培領(lǐng)域的應(yīng)用。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)任務(wù)是提供一種木耳液體凍干菌種的生產(chǎn)方法。
本發(fā)明的技術(shù)任務(wù)是按以下方式實(shí)現(xiàn)的，該生產(chǎn)方法步驟如下
1)在無菌條件下，將木耳母種在斜面培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為溫度M 32°C， 時間5 8天，待菌絲布滿斜面為止；
2)將斜面菌絲移種到搖瓶液體培養(yǎng)基靜置培養(yǎng)1 2天后再進(jìn)行振蕩培養(yǎng)擴(kuò)增；
3)將培養(yǎng)成熟的搖瓶菌種按5 10%的接種量接種到發(fā)酵罐進(jìn)行培養(yǎng)擴(kuò)增；
4)將發(fā)酵罐培養(yǎng)成熟的菌液進(jìn)行離心或過濾處理收集菌絲球，并對菌絲球進(jìn)行破碎處理；
5)向破碎好的菌絲體添加凍干保護(hù)劑，并在冰箱內(nèi)預(yù)凍0. 5 2小時；
6)將預(yù)凍好的菌絲體在冷凍干燥機(jī)內(nèi)干燥18 30小時后分割成塊即為凍干菌種。
所述的斜面培養(yǎng)基由以下重量份配比的原料制成
馬鈴薯10 25份，蔗糖1 5份，瓊脂1 2. 5份。
所述的液體培養(yǎng)基制備方法如下
將適量馬鈴薯、麩皮放入水中熬汁，然后在上述液體中加入適量葡萄糖、硫酸鎂、 硫酸二氫鉀和維生素&，混合均勻后獲得液體培養(yǎng)基；
所述的各原料的重量份配比如下
馬鈴薯10 20份，葡萄糖1 5份，硫酸鎂0. 01 0. 08份，硫酸二氫鉀0. 05 0. 2份，維生素B1 0. 01 0. 1份，麩皮1 10份。
所述的搖瓶液體種子培養(yǎng)條件為溫度25 32°C、搖床轉(zhuǎn)速100 200r/min，裝液量為100 180ml/500ml三角瓶，培養(yǎng)周期為4 7天。
所述的發(fā)酵罐液體種子培養(yǎng)條件為溫度25 32°C、轉(zhuǎn)速100 180r/min，通氣量0. 02 0. IMpa,培養(yǎng)周期為4 7天。
所述的凍干保護(hù)劑為脫脂乳、谷氨酸鈉、D-山梨醇、維生素C、蔗糖、葡萄糖及海藻糖中的一種或兩種以上的混合物。
本發(fā)明的木耳液體凍干菌種的生產(chǎn)方法和現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明液體培養(yǎng)部分形成的菌絲球大小均一、菌體量大且菌絲球個數(shù)多，凍干后的菌粉接種固體培養(yǎng)基后能夠正常萌發(fā)，且萌發(fā)點(diǎn)多、發(fā)菌快、出菇周期短，接種24h菌絲布滿料面，3-15天長滿菌袋；另外， 本發(fā)明生產(chǎn)的液體凍干菌室溫下可以保存半年活力不衰退，接種方便，將凍干菌粉溶于適量無菌水中即可噴曬接種，長期保持菌種性能穩(wěn)定，便于工業(yè)化生產(chǎn)，具有較高的推廣應(yīng)用價值。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1
在無菌條件下，將木耳母種在斜面培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為溫度M°C，時間5 天，待菌絲布滿斜面為止；將斜面菌絲移種到搖瓶液體培養(yǎng)基靜置培養(yǎng)1天后再進(jìn)行振蕩培養(yǎng)擴(kuò)增，培養(yǎng)條件為溫度25°C、搖床轉(zhuǎn)速lOOr/min，裝液量為100ml/500ml三角瓶，培養(yǎng)周期為4天；將培養(yǎng)成熟的搖瓶菌種按5%的接種量接種到發(fā)酵罐進(jìn)行培養(yǎng)擴(kuò)增，培養(yǎng)條件為溫度25°C、轉(zhuǎn)速lOOr/min，通氣量0. 02Mpa,培養(yǎng)周期為4天；將發(fā)酵罐培養(yǎng)成熟的菌液進(jìn)行離心或過濾處理收集菌絲球，并對菌絲球進(jìn)行破碎處理；向破碎好的菌絲體添加凍干保護(hù)劑，并在冰箱內(nèi)預(yù)凍0. 5小時；將預(yù)凍好的菌絲體在冷凍干燥機(jī)內(nèi)干燥18小時后分割成塊即為凍干菌種。
上述斜面培養(yǎng)基的原料重量配比如下
馬鈴薯10kg，蔗糖1kg，瓊脂1kg。
上述液體培養(yǎng)基制備方法如下
將IOkg馬鈴薯、Ikg麩皮放入沸水中熬汁，然后在上述熬好的汁液中加入Ikg葡萄糖、0. Olkg硫酸鎂、0. 05kg硫酸二氫鉀和0. Olkg維生素B1,混合均勻后獲得液體培養(yǎng)基。
實(shí)施例2
在無菌條件下，將木耳母種在斜面培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為溫度32°C，時間8 天，待菌絲布滿斜面為止；將斜面菌絲移種到搖瓶液體培養(yǎng)基靜置培養(yǎng)2天后再進(jìn)行振蕩培養(yǎng)擴(kuò)增，培養(yǎng)條件為溫度32°C、搖床轉(zhuǎn)速200r/min，裝液量為180ml/500ml三角瓶，培養(yǎng)周期為7天；將培養(yǎng)成熟的搖瓶菌種按10%的接種量接種到發(fā)酵罐進(jìn)行培養(yǎng)擴(kuò)增，培養(yǎng)條件為溫度32°C、轉(zhuǎn)速180r/min，通氣量0. IMpa，培養(yǎng)周期為7天；將發(fā)酵罐培養(yǎng)成熟的菌液進(jìn)行離心或過濾處理收集菌絲球，并對菌絲球進(jìn)行破碎處理；向破碎好的菌絲體添加凍干保護(hù)劑，并在冰箱內(nèi)預(yù)凍2小時；將預(yù)凍好的菌絲體在冷凍干燥機(jī)內(nèi)干燥30小時后分割成塊即為凍干菌種。
上述斜面培養(yǎng)基的原料重量配比如下
馬鈴薯25kg，蔗糖^g，瓊脂2. 5kgo
上述液體培養(yǎng)基制備方法如下
將20kg馬鈴薯、IOkg麩皮放入沸水中熬汁，然后在上述熬好的汁液中加入5kg葡萄糖、0. 08kg硫酸鎂、0. 2kg硫酸二氫鉀和0. Ikg維生素B1,混合均勻后獲得液體培養(yǎng)基。
實(shí)施例3
在無菌條件下，將木耳母種在斜面培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為溫度^°C，時間7 天，待菌絲布滿斜面為止；將斜面菌絲移種到搖瓶液體培養(yǎng)基靜置培養(yǎng)1. 5天后再進(jìn)行振蕩培養(yǎng)擴(kuò)增，培養(yǎng)條件為溫度、搖床轉(zhuǎn)速150r/min，裝液量為140ml/500ml三角瓶，培養(yǎng)周期為5天；將培養(yǎng)成熟的搖瓶菌種按8%的接種量接種到發(fā)酵罐進(jìn)行培養(yǎng)擴(kuò)增，培養(yǎng)條件為溫度^TC、轉(zhuǎn)速140r/min，通氣量0. 06Mpa，培養(yǎng)周期為5天；將發(fā)酵罐培養(yǎng)成熟的菌液進(jìn)行離心或過濾處理收集菌絲球，并對菌絲球進(jìn)行破碎處理；向破碎好的菌絲體添加凍干保護(hù)劑，并在冰箱內(nèi)預(yù)凍1. 2小時；將預(yù)凍好的菌絲體在冷凍干燥機(jī)內(nèi)干燥19小時后分割成塊即為凍干菌種。
上述斜面培養(yǎng)基的原料重量配比如下
馬鈴薯Ukg，蔗糖:3kg，瓊脂1. 5kgo
上述液體培養(yǎng)基制備方法如下
將15kg馬鈴薯、6kg麩皮放入沸水中熬汁，然后在上述熬好的汁液中加入3kg葡萄糖、0. 04kg硫酸鎂、0. 12kg硫酸二氫鉀和0. 05kg維生素B1,混合均勻后獲得液體培養(yǎng)基。
上述三個實(shí)施例中的凍干菌種培養(yǎng)時，先溶于無菌水，然后接種于木耳栽培料袋， 培養(yǎng)M小時菌絲布滿料面，15天長滿菌袋，出菇量較固體菌種提高15%。
權(quán)利要求
1.一種木耳液體凍干菌種的生產(chǎn)方法，屬于食用菌菌種培養(yǎng)領(lǐng)域，其特征在于該生產(chǎn)方法步驟如下1)在無菌條件下，將木耳母種在斜面培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為溫度M 32°c，時間 5 8天，待菌絲布滿斜面為止；2)將斜面菌絲移種到搖瓶液體培養(yǎng)基靜置培養(yǎng)1 2天后再進(jìn)行振蕩培養(yǎng)擴(kuò)增；3)將培養(yǎng)成熟的搖瓶菌種按5 10%的接種量接種到發(fā)酵罐進(jìn)行培養(yǎng)擴(kuò)增；4)將發(fā)酵罐培養(yǎng)成熟的菌液進(jìn)行離心或過濾處理收集菌絲球，并對菌絲球進(jìn)行破碎處理；5)向破碎好的菌絲體添加凍干保護(hù)劑，并在冰箱內(nèi)預(yù)凍0.5 2小時；6)將預(yù)凍好的菌絲體在冷凍干燥機(jī)內(nèi)干燥18 30小時后分割成塊即為凍干菌種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的木耳液體凍干菌種的生產(chǎn)方法，其特征在于所述的斜面培養(yǎng)基由以下重量份配比的原料制成馬鈴薯10 25份，蔗糖1 5份，瓊脂1 2. 5份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的木耳液體凍干菌種的生產(chǎn)方法，其特征在于所述的液體培養(yǎng)基制備方法如下將適量馬鈴薯、麩皮放入水中熬汁，然后在上述液體中加入適量葡萄糖、硫酸鎂、硫酸二氫鉀和維生素B1,混合均勻后獲得液體培養(yǎng)基；所述的各原料的重量份配比如下馬鈴薯10 20份，葡萄糖1 5份，硫酸鎂0. 01 0. 08份，硫酸二氫鉀0. 05 0. 2 份，維生素B1 0.01 0. 1份，麩皮1 10份。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的木耳液體凍干菌種的生產(chǎn)方法，其特征在于所述的搖瓶液體種子培養(yǎng)條件為溫度25 32°C、搖床轉(zhuǎn)速100 200r/min，裝液量為100 180ml/500ml 三角瓶，培養(yǎng)周期為4 7天。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的木耳液體凍干菌種的生產(chǎn)方法，其特征在于所述的發(fā)酵罐液體種子培養(yǎng)條件為溫度25 32°C、轉(zhuǎn)速100 180r/min，通氣量0. 02 0. IMpa,培養(yǎng)周期為4 7天。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的木耳液體凍干菌種的生產(chǎn)方法，其特征在于所述的凍干保護(hù)劑為脫脂乳、谷氨酸鈉、D-山梨醇、維生素C、蔗糖、葡萄糖及海藻糖中的一種或兩種以上的混合物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種木耳液體凍干菌種的生產(chǎn)方法，屬于食用菌菌種培養(yǎng)領(lǐng)域，該生產(chǎn)方法步驟如下在無菌條件下，將木耳母種在斜面培養(yǎng)基中培養(yǎng)，待菌絲布滿斜面為止；將斜面菌絲移種到搖瓶液體培養(yǎng)基靜置后再進(jìn)行振蕩培養(yǎng)擴(kuò)增；將培養(yǎng)成熟的搖瓶菌種接種到發(fā)酵罐進(jìn)行培養(yǎng)擴(kuò)增；將發(fā)酵罐培養(yǎng)成熟的菌液進(jìn)行離心或過濾處理收集菌絲球，并對菌絲球進(jìn)行破碎處理；向破碎好的菌絲體添加凍干保護(hù)劑，并在冰箱內(nèi)預(yù)凍；將預(yù)凍好的菌絲體在冷凍干燥機(jī)內(nèi)干燥后分割成塊即為凍干菌種。本發(fā)明液體培養(yǎng)部分形成的菌絲球大小均一、菌絲球個數(shù)多，且萌發(fā)點(diǎn)多、發(fā)菌快、出菇周期短；本發(fā)明生產(chǎn)的液體凍干菌保存半年活力不衰退，接種方便。
文檔編號A01G1/04GK102498926SQ20111029590
公開日2012年6月20日 申請日期2011年10月8日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月8日
發(fā)明者馮志彬, 王東濤 申請人:金鄉(xiāng)縣益佳康生物科技有限責(zé)任公司