專利名稱：一種大蔥種子的消毒方法
技術領域：
本發明屬于組織培養領域，具體涉及一種大蔥組織培養中的種子消毒方法。
背景技術：
大蔥(Allium fistulosum L.)為百合科蔥屬二年生草本植物，富含|丐、磷、維生素，不僅味道鮮美，而且具有醫療保健功效。據FAO統計，2009年我國栽培大蔥面積達26560 公頃，居世界第一位。近年來，隨著分子生物技術的迅速發展和基因工程的日趨普及，利用轉基因植株生產藥物、疫苗和生物制劑愈加展示出廣闊的應用前景和潛在的經濟效益。在轉基因植株的研究中，無菌苗的篩選和培育是試驗成功的關鍵，而無菌苗一般由種子獲得，因此，種子有效消毒顯得尤為重要。迄今，各種滅菌方法報道頗多(楊嵐等，2008 John H et al.，1985 ； R. L. M. Pierik, 1987 ；Trevor A, 1981 ;吳良歡等，1997，1999)，但是有關大蔥種子消毒的方
法鮮有報道。

發明內容
針對上述現有技術的不足，本發明提供了一種大蔥組織培養中種子消毒的有效方法。本發明是通過以下技術方案來實現的本發明一方面涉及一種大蔥種子消毒方法，其特征在于使用含有吐溫-20的水清洗種子，然后消毒液消毒35分鐘以上，但不超過I小時，所述的消毒液含有1-3%的次氯酸鈉、次氯酸鉀和/或次氯酸，濃度優選為2%。在本發明的一個優選實施方式中，其特征在于水中吐溫-20濃度低于1%，優選低于0. 5%，進一步優選低于0.1%。在本發明的一個優選實施方式中，其特征在于采用含有吐溫-20的水清洗種子的時間介于20-40分鐘之間。在本發明的一個優選實施方式中，其特征在于使用消毒液消毒之前采用消毒酒精漂洗清洗之后的種子。在本發明的一個優選實施方式中，其特征在于所述的漂洗時間為20-40S之間，優選為30s。在本發明的一個優選實施方式中，其特征在于使用消毒液消毒之后再次使用含有吐溫-20的無菌水沖洗種子，最后使用無菌水沖洗至少一次。本發明另一方面涉及采用上述消毒方法消毒之后的種子的培養方法，其特征在于將消毒后的種子接種到培養基上，在光照強10-40umOl.m_2. s'光照周期為10_20h. cf1，室溫下培養。本發明所述方法與現有的大蔥組織培養中的種子消毒方法相比，具有發芽率高、污染率小的優點，并保證了較高的成苗率。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明進一步的說明，但本發明并不局限于此。本實施例均以山東省農業科學院蔬菜研究所提供的章丘大蔥品種種子為試驗材料。應用實施例一本實施例采用六種常用消毒方法對大蔥種子進行消毒處理，并進行了添加吐溫-20對大蔥種子消毒效果的影響研究，通過調查大蔥種子始發期、發芽率、發芽勢、污染率等項目。種子消毒處理方法先將200粒大蔥種子用自來水沖洗30min，然后置于超凈工作臺上用75%酒精漂洗0. 5 lmin，轉入消毒液中進行消毒處理，最后用無菌水沖洗3-5遍， 消毒處理后接種于MS培養基。種子消毒處理設計①2%的次氯酸鈉中消毒20min 2 %的次氯酸鈉中消毒 40min !③2%的次氯酸鈉中消毒60min。@0. 1%的升萊中消毒5min !⑤0. I %的升萊中消毒IOmin ; 0. I %的升萊中消毒15min。添加吐溫-20消毒處理大蔥種子的試驗處理方法先將100粒大蔥種子用自來水沖洗30min，然后置于超凈工作臺上用 75%酒精漂洗0. 5 lmin，轉入2%次氯酸鈉消毒40min，消毒后接種于MS培養基。處理設計①大蔥種子消毒前，用自來水沖洗時在三角瓶中加入1-2滴吐溫-20 ； ②大蔥種子消毒后，用加入吐溫-20的無菌水(無菌水中按10000 I的比例添加吐溫-20)，沖洗3-5遍，最后用無菌水沖洗I遍；③處理I與處理2同時進行；④對照(CK) 正常消毒，不加吐溫-20。大蔥無菌苗培養將消毒處理后的種子，接種于MS培養基(經高壓滅菌)培養，培養基中添加蔗糖 3%，瓊脂0. 9%,pH5. 8-6. O。培養溫度25±1°C，光照強度3000Lx，光照時間每天16h。培養10天時調查統計發芽勢；培養30天時調查統計發芽率、污染率；第一粒種子發芽的時間為種子發芽始期。數據處理采用SPSS軟件。結果與分析如下I)消毒方法對大蔥種子發芽及消毒效果的影響表I六種常用消毒方法的效果比較
權利要求
1.一種大蔥種子消毒方法，其特征在于使用含有吐溫-20的水清洗種子，然后消毒液消毒35分鐘以上，但不超過I小時，所述的消毒液含有1-3%的次氯酸鈉、次氯酸鉀和/或次氯酸，濃度優選為2%。
2.根據權利要求I所述的消毒方法，其特征在于水中吐溫-20濃度低于I%，優選低于0.5%。
3.根據權利要求2所述的消毒方法，其特征在于采用含有吐溫-20的水清洗種子的時間介于20-40分鐘之間。
4.根據權利要求1-3任意一項的消毒方法，其特征在于使用消毒液消毒之前采用消毒酒精漂洗清洗之后的種子。
5.根據權利要求4所述的消毒方法，其特征在于所述的漂洗時間為20-40S之間，優選為 30s。
6.根據權利要求I所述的消毒方法，其特征在于使用消毒液消毒之后再次使用含有吐溫-20的無菌水沖洗種子，最后使用無菌水沖洗至少一次。
7.權利要求1-6任意一項消毒方法消毒之后的種子的培養方法，其特征在于將消毒后的種子接種到培養基上，在光照強10-40umOl.m_2. s—1，光照周期為10_20h. cf1，室溫下培養。
全文摘要
本發明公開了一種大蔥種子消毒方法，使用含有吐溫-20的水清洗種子，然后消毒液消毒35分鐘以上，但不超過1小時，所述的消毒液含有1-3％的次氯酸鈉、次氯酸鉀和/或次氯酸，濃度優選為2％。采用本發明的方法消毒所得的大蔥種子發芽率高、污染率小，保證較高的成苗率。
文檔編號A01H4/00GK102524059SQ20111033577
公開日2012年7月4日 申請日期2011年10月31日 優先權日2011年10月31日
發明者董飛, 陳運起, 高莉敏 申請人:山東省農業科學院蔬菜研究所