專利名稱：一種蝦苗顯微注射方法
技術領域：
本發明涉及一種顯微注射方法，具體是一種在顯微鏡下完成幼小蝦苗微量體積注射的方法。
背景技術：
蝦屬節肢動物甲殼類，體長而扁，分頭胸部和腹部，體表有石灰質的外骨骼，甲殼質地堅厚。在水產養殖研究領域，常常需要將外源物質(如外源基因、DNA片段、RNA片段和蛋白質等)快速簡便的注射到蝦體內。但蝦類動物個體較小，尤其是剛孵化的蝦苗，體長僅有幾毫米，外殼潤滑，活潑好動，彈躍迅捷，不易進行抓捕和注射操作。目前，常用的一次性注射器型號規格一般使用毫升級注射器。對蝦苗個體而言， 注射體積大，針頭粗，穿刺創口面積大，注射后極易造成動物個體的死亡。用于細胞穿刺的顯微注射儀使用納米級毛細管作為注射針材料，穿刺創口小，細胞損傷小，可實現納升級注射。但是，整個顯微注射裝置組件繁多，裝備精密，不易隨身攜帶，不能直接用于活體蝦苗體內注射。

發明內容
本發明的目的就是針對現有技術的不足，提供一種活體蝦苗體內穿刺和微量液體的高精度注射方法。本發明方法包括以下步驟
步驟(1).取外源注射樣品，利用手動微操作儀和納升微量注射器，將定量液體吸取在納升微量注射器的顯微注射針內；
步驟O).將蝦苗置于水平臺面上，吸干甲殼外水分，然后將蝦苗置于鋪有紗布的培養皿中，蝦體腹部朝上，將培養皿移至顯微鏡視野中，調節焦距使注射動物圖像清晰；
步驟(3).調節顯微注射針的針頭進入顯微鏡視野，并確定針頭和蝦體在立體顯微鏡的同一視野內；通過手動微操作儀調節顯微注射針位置，確定腹膜皮下組織注射穿刺點，穿刺點位置為蝦體頭胸部與腹部交接處；
步驟顯微注射針的針頭進入穿刺點的腹膜皮下組織進行體內藥液的微量注射， 手動微操作儀上預先設定每次注射量和注射速度；微量注射方法采用微流體輸送方法，以自動送料的形式將注射液體從顯微注射針壓到注射針口，輸送到穿刺點的腹膜皮下組織區域；
步驟(5).根據手動微操作儀界面顯示結果，確認注射完成后，注射液體進入蝦體內后停留1 3秒鐘，等待注射液體擴散；調節手動微操作儀，使顯微注射針退出穿刺點的腹膜皮下組織；
步驟(6).培養皿水平移出顯微鏡視野，將蝦苗放回水體中。本發明方法利用手動微操作儀和納升微量注射器以自動送料的形式將注射液體從顯微注射針壓到注射針口，輸送到蝦體腹膜皮下組織區域。注射過程中，液體試劑的輸送、吸持定位、注射針進針、腹膜穿刺、體內藥液定量注射、注射針退出動物體內等顯微操作過程完全實現在立體顯微鏡的同一視野內的精確控制，實現微量液體的高精度注射。本發明操作方法簡單、注射創口小、注射成功率高。
具體實施例方式
一種蝦苗顯微注射方法，具體步驟包括
步驟(1).取外源注射樣品，利用手動微操作儀和納升微量注射器，將定量液體吸取在納升微量注射器的顯微注射針內；
步驟O).將蝦苗置于水平臺面上，吸干甲殼外水分，然后將蝦苗置于鋪有紗布的培養皿中，蝦體腹部朝上，輕輕按住頭胸甲的額部以及蝦體尾部，固定蝦體防止其彈跳，將培養皿移至顯微鏡視野中，調節焦距使注射動物圖像清晰；
步驟(3).調節顯微注射針的針頭進入顯微鏡視野，并確定針頭和蝦體在立體顯微鏡的同一視野內；通過手動微操作儀調節顯微注射針位置，確定腹膜皮下注射穿刺點，穿刺點位置為蝦體頭胸部與腹部交接處；
步驟顯微注射針的針頭進入穿刺點的腹膜皮下組織進行體內藥液的微量注射， 手動微操作儀上預先設定每次注射量和注射速度；微量注射方法采用微流體輸送方法，以自動送料的形式將注射液體從顯微注射針壓到注射針口，輸送到穿刺點的腹膜皮下組織區域；
步驟(5).根據手動微操作儀界面顯示結果，確認注射完成后，注射液體進入蝦體內后停留1 3秒鐘，等待注射液體擴散；調節手動微操作儀，使顯微注射針退出穿刺點的腹膜皮下組織；
步驟(6).培養皿水平移出顯微鏡視野，輕輕放開蝦苗，將蝦苗放回水體中。
權利要求
1. 一種蝦苗顯微注射方法，其特征在于該方法的具體步驟是 步驟(1).取外源注射樣品，利用手動微操作儀和納升微量注射器，將定量液體吸取在納升微量注射器的顯微注射針內；步驟O).將蝦苗置于水平臺面上，吸干甲殼外水分，然后將蝦苗置于鋪有紗布的培養皿中，蝦體腹部朝上，將培養皿移至顯微鏡視野中，調節焦距使注射動物圖像清晰；步驟(3).調節顯微注射針的針頭進入顯微鏡視野，并確定針頭和蝦體在立體顯微鏡的同一視野內；通過手動微操作儀調節顯微注射針位置，確定腹膜皮下組織注射穿刺點，穿刺點位置為蝦體頭胸部與腹部交接處；步驟顯微注射針的針頭進入穿刺點的腹膜皮下組織進行體內藥液的微量注射， 手動微操作儀上預先設定每次注射量和注射速度；微量注射方法采用微流體輸送方法，以自動送料的形式將注射液體從顯微注射針壓到注射針口，輸送到穿刺點的腹膜皮下組織區域；步驟(5).根據手動微操作儀界面顯示結果，確認注射完成后，注射液體進入蝦體內后停留1 3秒鐘，等待注射液體擴散；調節手動微操作儀，使顯微注射針退出穿刺點的腹膜皮下組織；步驟(6).培養皿水平移出顯微鏡視野，將蝦苗放回水體中。
全文摘要
本發明涉及一種蝦苗顯微注射方法。現有注射方法穿刺創口面積大，注射后極易造成動物個體的死亡。本發明方法首先利用手動微操作儀和納升微量注射器，將定量液體吸取在顯微注射針內；然后蝦苗置于鋪有紗布的培養皿中，將培養皿移至顯微鏡視野中，調節顯微注射針的針頭進入顯微鏡視野，通過手動微操作儀調節顯微注射針位置，確定腹膜皮下注射穿刺點，顯微注射針的針頭進入穿刺點的腹膜皮下組織進行體內藥液的微量注射；確認注射完成后，停留1～3秒鐘，退出顯微注射針；最后培養皿水平移出顯微鏡視野，將蝦苗放回水體中。本發明操作方法簡單、注射創口小、注射成功率高。
文檔編號A01K61/00GK102499148SQ20111034137
公開日2012年6月20日 申請日期2011年11月2日 優先權日2011年11月2日
發明者俞炎琴, 楊衛軍, 肖金星, 錢葉青, 馬文明 申請人:浙江大學舟山海洋研究中心