專利名稱：一種附著有細菌膜的海參幼苗附著基及其制作方法
一種附著有細菌膜的海參幼苗附著基及其制作方法技術領域
本發(fā)明屬于海水養(yǎng)殖領域，特別是涉及一種附著有細菌膜的海參幼苗附著基及其制作方法。
背景技術：
海參浮游狀態(tài)的樽形幼體變?yōu)楦街鵂顟B(tài)的五觸手幼體的附著變態(tài)過程，是海參發(fā)育過程中最為重要的環(huán)節(jié)，同時也是海參育苗成功與否的關鍵所在。海參要實現(xiàn)附著變態(tài)， 附著基是不可缺少的重要條件。現(xiàn)在普遍使用的附著基主要是透明聚乙烯波紋板、聚乙烯網(wǎng)片等，同時有關海參幼體附著基的專利也有很多，例如專利號為ZL200720013117. 9的海參幼體附著基等。海參的苗種生產中，幼體的低附著變態(tài)率問題嚴重制約了海參養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。對于海參來說，附著基作為其幼體附著變態(tài)的依托，是影響海參養(yǎng)殖業(yè)效率提高的重要因素。
但是現(xiàn)在絕大部分養(yǎng)殖用戶仍習慣于單獨使用聚乙烯波紋板，而海參幼體在聚乙烯波紋板上的附著變態(tài)率較低，一般為20%左右，附著率較低，嚴重影響海參養(yǎng)殖的發(fā)展。 而對于表面附著有細菌等微生物膜的附著基使用較少，究其原因是大部分養(yǎng)殖用戶忽略了細菌等附著基表面微生物膜的作用。現(xiàn)在尚未見一種高活性誘導細菌附著的能大幅度提高海參幼體附著變態(tài)率的聚乙烯波紋板附著基。發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種附著有細菌膜的海參幼苗附著基及其制作方法，它能利用細菌對海參幼體附著基進行優(yōu)化，提高海參幼體的附著變態(tài)率，能滿足現(xiàn)有技術的上述需求。
一種附著有細菌膜的海參幼苗附著基，包括一聚乙烯波紋板，其特征在于該聚乙烯波紋板的兩面分別涂有一環(huán)氧樹脂膠層，在各環(huán)氧樹脂膠層的外面分別粘附一蠣殼粉層，在各蠣殼粉層外分別附著一層由交替單胞菌形成的菌膜。
上述附著有細菌膜的海參幼苗附著基的制作方法，其特征在于首先將購買到的蠣殼粉依次用45目和60目的網(wǎng)篩進行2-3次篩選，得到相應粒徑的蠣殼粉；，將環(huán)氧樹脂膠分別均勻地涂到聚乙烯波紋板的兩面上；再將上述蠣殼粉分別粘附在各環(huán)氧樹脂膠層的外面，分別形成蠣殼粉層，凝固后浸于氫氧化鈉水溶液中，取出后用過濾海水沖洗掉氫氧化鈉；最后將上述涂有環(huán)氧樹脂膠層和蠣殼粉層的聚乙烯波紋板浸入zobell 2216E培養(yǎng)液中，按照菌液與培養(yǎng)液的體積比為(1-4) 20的比例加入交替單胞菌屬細菌(Alteromonas sp.)的菌液，在水溫18-26°C的條件下曝氣培養(yǎng)，形成菌膜，即得到附著有細菌膜的海參幼苗附著基。
上述的交替單胞菌屬細菌(Alteromonas sp.)，選用篩選的單胞菌屬細菌 Lch-I (Alteromonas sp.)，已于2011年12月22日保藏在位于北京朝陽區(qū)北辰西路1號院 3號的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC NO. 5639。
本發(fā)明可以使海參幼體的附著變態(tài)率較只用聚乙烯波紋板提高60%左右。


附圖是本發(fā)明的結構示意圖。
其中，1、聚乙烯波紋板，2、環(huán)氧樹脂膠層，3、蠣殼粉層，4、菌膜。
具體實施方式
下面結合附圖對本發(fā)明附著有細菌膜的海參幼苗附著基及其制作方法做進一步說明。
首先，將購買到的蠣殼粉依次用45目和60目的網(wǎng)篩進行2-3篩選，得到相應粒徑的蠣殼粉。再使用毛刷將環(huán)氧樹脂膠分別均勻地涂到洗刷干凈的聚乙烯波紋板1的兩面上，分別形成環(huán)氧樹脂膠層2，并將上述蠣殼粉分別粘附在各環(huán)氧樹脂膠層2的外面上，分別形成蠣殼粉層3，凝固后浸于質量百分數(shù)為1 % -10%的氫氧化鈉水溶液中，浸泡1-2天， 取出后用過濾海水沖洗掉氫氧化鈉。最后，將上述涂有環(huán)氧樹脂膠層2和蠣殼粉層3的聚乙烯波紋板1浸入濃度為10%-40%的zobell 2216E培養(yǎng)液中，按照菌液與培養(yǎng)液的體積比為(1-4) 20的比例加入交替單胞菌細菌(Alteromonas sp.)的菌液，在水溫18_26°C 的條件下曝氣培養(yǎng)48-96小時，形成菌膜4，并保證菌膜4中的細菌密度超過107cellS/cm2， 即得到附著有細菌膜的海參幼苗附著基。
在海參幼體發(fā)育的附著變態(tài)時期，將附著有細菌膜的海參幼苗附著基取出進行投放。
上述交替單胞菌屬細菌Alteromonas Lch-I來自山東文登海參育苗場采集的附著細菌經(jīng)過純化篩選獲得。上述的hBell 2216E培養(yǎng)液其標準濃度如下蛋白胨5g/L;酵母提取物lg/L ；pH為7. 2。上述交替單胞菌細菌(Alteromonassp.)菌液為在標準濃度的 ZoBell 2216E培養(yǎng)液中25°C、黑暗條件下培養(yǎng)48h的細菌菌液。上述Alteromonas Lch-I 在hBell 2216E固體培養(yǎng)基上形成圓形菌落，表面光滑，扁平凸起，邊緣整齊，菌落直徑約為1 2mm，表面濕潤，白色，不透明，革蘭氏染色呈陰性。上述Alteromonas Lch-I具有很強的附著特性。實施例
下面以采用細菌Alteromonas Lch-Ι為例，具體說明制作過程
首先，將購買到的蠣殼粉依次用45目和60目的網(wǎng)篩篩選三次，得到相應粒徑的蠣殼粉。再使用毛刷將環(huán)氧樹脂膠分別均勻地涂到洗刷干凈的聚乙烯波紋板1上，形成環(huán)氧樹脂膠層2，并將上述蠣殼粉分別粘附在各環(huán)氧樹脂膠層2的外面，分別形成蠣殼粉層 3，待自然凝固后浸于質量百分數(shù)為1 %的氫氧化鈉水溶液中，浸泡兩天，取出后用過濾海水沖洗掉氫氧化鈉，并插入海參筐中，每筐20片。最后將海參筐浸入濃度為10%的^Bell 2216E培養(yǎng)液中，按照菌液與培養(yǎng)液的體積比為3 20的比例加入交替單胞菌Alteromonas Lch-I菌液，在水溫22°C的條件下曝氣培養(yǎng)48小時，形成菌膜4，并保證菌膜4中細菌密度達到107cellS/cm2，即得到附著有細菌膜的海參幼苗附著基。
在海參幼體發(fā)育的附著變態(tài)時期將裝有附著基的海參筐從培養(yǎng)液中取出進行投放。
本實施例所用的交替單胞菌Alteromonas Lch-I也可以改用交替單胞菌屬的其他細菌，取得的效果類似。
權利要求
1.一種附著有細菌膜的海參幼苗附著基，包括一聚乙烯波紋板(1)，其特征在于該聚乙烯波紋板(1)的兩面分別涂有一環(huán)氧樹脂膠層O)，在各環(huán)氧樹脂膠層( 外面分別粘附一蠣殼粉層(3)，在各蠣殼粉層( 外分別附著一層由交替單胞菌(Alteromonas sp.)形成的菌膜。
2.權利要求1所述的附著有細菌膜的海參幼苗附著基的制作方法，其特征在于首先將購買到的蠣殼粉依次用45目和60目的網(wǎng)篩進行2-3次篩選，得到相應粒徑的蠣殼粉；將環(huán)氧樹脂膠分別均勻地涂到聚乙烯波紋板(1)的兩面上；再將上述蠣殼粉分別粘附在各環(huán)氧樹脂膠層O)的外面，分別形成蠣殼粉層(3)，凝固后在氫氧化鈉水溶液中浸泡，取出后用過濾海水沖洗掉氫氧化鈉；最后將上述涂有環(huán)氧樹脂膠層( 和蠣殼粉層(3)的聚乙烯波紋板(1)浸入hBell 2216E培養(yǎng)液中，按照菌液與培養(yǎng)液的體積比為(1-4) 20的比例加入交替單胞菌屬細菌的菌液，在水溫18-26°C的條件下曝氣培養(yǎng)，形成菌膜G)，即得到附著有細菌膜的海參幼苗附著基。
3.如權利要求2所述的附著有細菌膜的海參幼苗附著基的制作方法，其特征在于所述的在氫氧化鈉水溶液中浸泡的時間為1-2天。
4.如權利要求2所述的附著有細菌膜的海參幼苗附著基的制作方法，其特征在于所述的hBell 2216E培養(yǎng)液的濃度為10% -40%。
5.如權利要求2所述的附著有細菌膜的海參幼苗附著基的制作方法，其特征在于所述的在培養(yǎng)液中曝氣培養(yǎng)的時間為48-96小時。
6.如權利要求1所述的交替單胞菌(Alteromonassp.)，其特征在于所述的交替單胞菌Alteromonas sp為交替單胞菌Lch-I，保藏編號為CGMCC NO. 5639。
全文摘要
一種附著有細菌膜的海參幼苗附著基，包括一聚乙烯波紋板，其特征在于該聚乙烯波紋板的兩面分別涂有一環(huán)氧樹脂膠層，在各環(huán)氧樹脂膠層的外面分別粘附一蠣殼粉層，在各蠣殼粉層外再分別附著一層由交替單胞菌(Alteromonas sp.)形成的菌膜。制作時，先將蠣殼粉用45目和60目的網(wǎng)篩篩選；將環(huán)氧樹脂膠涂到聚乙烯波紋板上；再將上述篩選后的蠣殼粉粘附在環(huán)氧樹脂膠層外面，形成蠣殼粉層，凝固后浸泡于氫氧化鈉溶液中，取出后用海水沖凈氫氧化鈉，并投放到已添加交替單胞菌屬(Alteromonas sp.)菌液的ZoBell 2216E培養(yǎng)液中，18-26℃條件下曝氣培養(yǎng)，形成菌膜，即得到附著有細菌膜的海參幼苗附著基。本發(fā)明可以使海參幼體的附著變態(tài)率較聚乙烯波紋板提高60％左右。
文檔編號A01K61/00GK102524127SQ20121000759
公開日2012年7月4日 申請日期2012年1月11日 優(yōu)先權日2012年1月11日
發(fā)明者劉超, 包衛(wèi)洋, 孫景春, 馬甡 申請人:中國海洋大學