專利名稱：一種固態發酵生產富含活性多肽制品的方法及應用的制作方法
技術領域：
本發明屬于食品加工技術領域，涉及一種固態發酵生產富含活性多肽制品的方法及應用。
背景技術：
豆粕粗蛋白含量豐富，氨基酸組成合理，此外，含有脂肪、碳水化合物、維生素等其他營養物質和許多能產生生物效應的活性物質，如大豆低聚糖、大豆異黃酮、大豆活性肽等，是一種良好的植物源蛋白飼料。豆粕中含有多種抗營養因子(anti-nutritional factors, ANF)，如胰蛋白酶抑制因子、脲酶等，研究發現，這些抗營養因子影響了畜禽對營養成分的消化、吸收，影響動物的健康及生產性能。這就需要對抗營養因子進行處理，從而提高豆粕的消化率，提高營養價值，目前為止常用的加工方法概括為物理方法、化學方法以及生物學方法。通過微生物發酵的方法制備蛋白酶，以此水解處理豆粕，豆粕中的大分子蛋白被蛋白酶等水解成小分子的肽，蛋白質的利用率得到了提高。大豆肽具有良好的理化性質，在食品和醫藥方面有著非常廣闊的應用前景，發酵豆粕在動物保健，尤其是在調節幼齡動物的腸道微生物方面效果良好，廣泛應用在畜牧及飼料工業界。此外，微生物發酵豆粕，不需要加熱或添加化學試劑，飼料營養成分被破壞的可能性小，應用安全，實用性強。大豆肽具有獨特的理化性質及多種生物活性。通過微生物發酵的方法能夠有效地去除豆粕中的多種抗營養因子，降低成本，提高產品的利用率，在實際生產和應用中具有廣泛的意義。然而，蛋白酶的制備受環境因子的影響。如①PH的影響。不同pH值的培養基所產生的蛋白酶種類不同，所產蛋白酶的PH值一般相近與參加酶促反應的最適pH值。② 通風量的影響。深層培養的過程，需要通風攪拌，霉菌菌絲的生長和產酶量的多少受到通風量的多少影響，通風量的多少在實際生產中要控制好，一方面要利于菌體的生長，另一方面不會抑制蛋白酶的效果。③溫度的影響。不同的微生物發酵產酶所需的最適溫度不同，菌體的生長、產酶的周期都會受到溫度過高或者過低影響，這樣不利于高活性蛋白酶的產生。 此外，發酵培養基的組成及其他代謝產物的生成也會影響到蛋白酶的發酵生產，因此，實際生產中應該根據所篩選得到的微生物摸索適宜的發酵、水解條件，從而獲得充足的蛋白酶， 進一步提高大豆肽轉化率。

發明內容
本發明的目在于提供一種固態發酵生產富含活性多肽制品的方法及應用。為了實現本發明的目的，發明人通過大量試驗研究，最終獲得了如下技術方案 一種固態發酵生產富含活性多肽制品的方法，包括如下步驟
(1)將豆粕、麩皮和水按1 :0. 15-0. 2 1. 4-1. 6的重量比配制成固態發酵培養基，滅菌，冷卻，以種子液占固體發酵培養基干重質量百分比計，接種活化的黑曲霉(Aspergillusniger, ACCC30787)種子液 8. 5%、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis, ACCCO1746)種子液 1. 4%，并在以下條件下發酵培養外加占固體發酵培養基干重質量百分比為1. ^1WKH2PO4, 發酵溫度^_32°C，發酵時間60-70h ；
(2)發酵結束后，升溫至50-52°C，水解4- ，然后將發酵產物干燥至含水量小于8%，粉碎，過80目篩，得富含活性多肽的飼料制品。優選地，所述的一種固態發酵生產富含活性多肽制品的方法，其中所述的黑曲霉 (Aspergillus niger, ACCC30787)種子液按如下方法制備將斜面菌種轉接到液態活化培養基中，置于搖床中，28-32 0C、200r/min條件下振蕩培養32_40h ；以重量份計，所述的液態活化培養基的配方為=NaNO3 0. 2 份，K2HPO4 0. 1 份，KCl 0. 05 份，MgSO4 0. 05 份，FeSO4 0. 001份，蔗糖3.0份，蒸餾水100份，自然PH值。優選地，所述的一種固態發酵生產富含活性多肽制品的方法，其中所述的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis, ACCC01746)種子液按如下方法制備將斜面菌種轉接到液態活化培養基中，置于搖床中，33-35°C,200r/min條件下振蕩培養；以重量份計，所述的液態活化培養基的配方為葡萄糖0.2份，NaCl 0.5份，酵母膏0.5份，蛋白胨1份，蒸餾水 100 份，pH7. 0。通過動物試驗研究發現，利用上述方法制備的大豆活性多肽制品在提高仔豬生產性能方面具有顯著的作用。因此，本發明的第二個目的在于提供一種產品新用途，即利用上述方法制備的活性多肽制品在制備動物飼料中的應用。優選地，上述方法制備的活性多肽制品在制備仔豬飼料中的應用。本發明采用分步發酵的方法，依據發酵過程中微生物生長代謝產生蛋白酶的性質和蛋白酶水解的基本性質，對大豆肽的生產工藝進行優化，使得固態發酵的每個階段達到各自的最適培養條件，這樣的固態發酵過程既有利于高活性蛋白酶的生成，又有利于蛋白酶作用于底物蛋白生成大豆肽，從而達到縮短發酵時間、提高大豆肽轉化率的目的，為大豆肽的開發應用提供生產路線。另外，利用本發明的方法制備的大豆活性多肽制品基本不含抗營養因子，分子量小，易吸收，對斷奶仔豬生產性能有較為顯著的促進作用。
具體實施例方式以下是本發明的富含活性多肽制品的具體制備例和應用例，對本發明的技術方案做進一步作描述，但是本發明的保護范圍并不限于這些實施例。凡是不背離本發明構思的改變或等同替代均包括在本發明的保護范圍之內。實施例1活性多肽制品的制備
(1)將豆粕、麩皮和水按1 :0. 18 1. 5的重量比配制成固態發酵培養基，滅菌，冷卻， 以種子液占固體發酵培養基干重質量百分比計，接種活化的黑曲霉(Aspergillus niger, ACCC30787)種子液 8. 5%、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis, ACCCOl746)種子液 1. 4%，并在以下條件下發酵培養外加占固體發酵培養基干重質量百分比為1. 2%的KH2PO4,發酵溫度30°C，發酵時間65h;
其中，黑曲霉(Aspergillus niger, ACCC30787，中國農業微生物菌種保藏管理中心提供)種子液按如下方法制備將斜面菌種轉接到液態活化培養基中，置于搖床中，30°C、200r/min條件下振蕩培養32_40h ；斜面培養基配方NaN03 0. 2g, K2HP04 0. lg, KCl 0. 05g，MgS04 0. 05g, FeS04 0. OOlg，蔗糖 3. 0g，蒸餾水 lOOmL，瓊脂 1. 5 2. 0g，121°C，滅菌 20min ；液態活化培養基的配方為=NaNO3 0. 2g，K2HPO4 0. lg, KCl 0. 05g, MgSO4 0. 05g, FeSO4 0. 001g，蔗糖 3. 0g，蒸餾水 100ml,自然 pH 值，121°C，滅菌 20min。枯草芽孢桿菌(Bacillus subtil is，ACCCO1746，中國農業微生物菌種保藏管理中心提供)種子液按如下方法制備將斜面菌種轉接到液態活化培養基中，置于搖床中，330C、 200r/min條件下振蕩培養觀-301!；斜面培養基配方蛋白胨lg，牛肉提取物0. 3g，NaCl 0. 5g，瓊脂2. 0g，蒸餾水100ml，ρΗ7· 0，121°C，滅菌20min ；。液態活化培養基的配方為葡萄糖 0. 2g，NaCl 0. 5g，酵母膏 0. 5g，蛋白胨 lg，蒸餾水 100ml，ρΗ7· 0，121 °C，滅菌 20min。(2)發酵結束后，升溫至50°C，水解4h，然后將發酵產物干燥至含水量小于8%，粉碎，過80目篩，得富含活性多肽的飼料制品。實施例2活性多肽制品對仔豬生產性能的影響試驗
試驗選用觀日齡斷奶、平均體重7 士 0. Ikg的長白豬($ )X大白豬(早)二元雜交仔豬48頭，按單因素試驗設計原則，設3個處理組(參見表1 )，每個處理4個重復，每個重復 4頭豬(公母各半)，在預飼3天后，進行為期5周的試驗。表1試驗分組與飼糧配制
權利要求
1.一種固態發酵生產富含活性多肽制品的方法，包括如下步驟(1)將豆粕、麩皮和水按1:0. 15-0. 2 1. 4-1. 6的重量比配制成固態發酵培養基，滅菌，冷卻，以種子液占固體發酵培養基干重質量百分比計，接種活化的黑曲霉(Aspergillus niger, ACCC30787)種子液 8. 5%、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis, ACCCO1746)種子液 1. 4%，并在以下條件下發酵培養外加占固體發酵培養基干重質量百分比為1. ^1WKH2PO4, 發酵溫度^_32°C，發酵時間60-70h ；(2)發酵結束后，升溫至50-52°C，水解4- ，然后將發酵產物干燥至含水量小于8%，粉碎，過80目篩，得富含活性多肽的飼料制品。
2.根據權利要求1所述的一種固態發酵生產富含活性多肽制品的方法，其特征在于 所述的黑曲霉(Aspergillus niger, ACCC30787)種子液按如下方法制備將斜面菌種轉接到液態活化培養基中，置于搖床中，28-32°C、200r/min條件下振蕩培養32_40h;以重量份計，所述的液態活化培養基的配方為=NaNO3 0.2份，K2HPO4 0.1份，KCl 0.05份，MgSO4 0. 05 份，FeSO4 0.001份，蔗糖3.0份，蒸餾水100份，自然pH值。
3.根據權利要求1所述的一種固態發酵生產富含活性多肽制品的方法，其特征在于 所述的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis, ACCC01746)種子液按如下方法制備將斜面菌種轉接到液態活化培養基中，置于搖床中，33-35°C、200r/min條件下振蕩培養；以重量份計，所述的液態活化培養基的配方為葡萄糖0.2份，NaCl 0.5份，酵母膏0.5份，蛋白胨1份，蒸餾水100份，pH7. 0。
4.根據權利要求1-3任一項所述方法制備的活性多肽制品在制備動物飼料中的應用。
5.根據權利要求1-3任一項所述方法制備的活性多肽制品在制備仔豬飼料中的應用。
全文摘要
本發明涉及一種固態發酵生產富含活性多肽制品的方法及應用，該方法以豆粕、麩皮為原料配制固態發酵培養基，經滅菌，冷卻后接種活化的黑曲霉、枯草芽孢桿菌種子液，外加KH2PO4后發酵培養，發酵溫度28-32℃，時間60-70h，發酵結束后，升溫至50-52℃水解，然后將發酵產物干燥至含水量小于8%，粉碎，過80目篩，得富含活性多肽的飼料制品。利用本發明的方法制備的大豆活性多肽制品基本不含抗營養因子，分子量小，易吸收，對斷奶仔豬生產性能有較為顯著的促進作用。
文檔編號A23K1/16GK102550874SQ20121001565
公開日2012年7月11日 申請日期2012年1月18日 優先權日2012年1月18日
發明者吳雷, 張麗琍, 張超, 祁斌 申請人:安徽燕之坊食品有限公司