專利名稱：玉蟬花的納米組織培養方法
技術領域：
本發明涉及的是玉蟬花的組織培養方法。
背景技術：
鳶尾屬(Iris)為鳶尾科(Iridaceae)多年生草本植物，廣泛分布于北溫帶，以中國至中東(古地中海)為分化中心。中國鳶尾屬資源非常豐富，尤其是主要分布在西南、 西北及東北地區的無髯鳶尾類群。鳶尾的生態適應性廣，抗性較強，適宜在不同生境下栽培，耐粗放管理，繁殖系數較高，特別適合荒山綠化、水土保持、鹽堿地改良，而且具有很高的觀賞價值，根莖可藥用，在初春和秋季霜后，還可以作為牛羊飼料，應用前景極其廣泛。國內對鳶尾的研究起步較晚，且以分類學研究為主，大多數種類仍處于尚未開發利用的野生狀態。玉蟬花{J. ensata)主要分布在日本、朝鮮以及我國東北三省、山東和浙江昌化等地。花藍紫色，花色艷麗，株形優美，是園林綠化和濕地修復的良種，也是繁育花菖蒲品雜交種的重要種質資源，對該物種的保育研究也具有重要的實際意義。與其它根莖類鳶尾相同，玉蟬花兼備有性即種子和無性即分株兩種繁殖方式，然而，利用種子繁殖，速度慢，繁殖效率低，且變異率高，而利用分株繁殖則會導致分株苗生長勢越來越弱，利用組培技術繁育玉蟬花的技術尚未有人研究，優良品種的推廣普及尚未完成，苗木供求矛盾日益加劇，嚴重影響了玉蟬花的園林應用和推廣。

發明內容
本發明針對現有的不足提供了一種玉蟬花的育苗方法。本發明通過以下方法實現上述目的。玉蟬花的納米組織培養方法，其特征在于該方法包括下列步驟
(1)外植體的選擇在玉蟬花開花之前取花葶的莖段和分節點作為外植體；
(2)材料處理方法先用無菌水將外植體沖洗干凈，去除葉鞘，切成具有1-4個腋芽、長 3-5cm段，用0. 5g/L的多菌靈溶液浸泡2_3個小時，紫外燈照射20 min,再用75%乙醇消毒 30秒鐘，用0. 1%升汞水浸泡20分鐘，無菌水沖洗5-6次，取出材料，切成具有一個腋芽、長度為Icm左右的小段，最后用1 次氯酸鈉殺菌30秒，無菌水沖洗5-6次；
(3)初代培養在無菌的條件下將步驟②得到的外植體接種在初代培養基上，該培養基是在MS常規培養基中添加了 3. Omg/L的6-BA、l. 2mg/L的NAA，30mg/L的蔗糖，5mg/ mL-20mg/mL納米助劑，PH 5. 9，培養溫度為M°C，光照周期13h/d，光強度為2100_22001ux， 待培養出的外植體帶芽量長至3個時，即開始下一個階段；
所述的納米助劑的制備方法為將海泡石、蒙脫石粘土混合溶液在0°C下攪拌活化2 h，加入十二烷基硫酸鈉，3 X 104 r / min高剪切3 h，反應溶液冷卻至室溫后減壓抽濾，所得沉淀在105°C下干燥至恒重，得到納米助劑。(5)生根培養將繼代培養的高度超過2. 5cm的新苗剪下接種在生根培養基上，該培養基是在1/2MS常規培養基中添加了 0. 7mg/L的IAA、0. 5mg/L的NAA，0. 2mg/L的GA， 28mg/L的蔗糖，PH 5. 9，培養溫度為M°C，光照周期13h/d，光強度為2100-22001ux，待新苗長至2. 3cm左右時，即開始下一個階段；
(6)煉苗移栽將長高至10-15cm、長根> 5根的組培苗帶瓶移至普通大棚內，放置 1-3天后打開瓶蓋，在25-28°C，濕度70-80%，光強7 100-79001x條件下煉苗3_5天，煉苗完成后取出小苗洗凈根部附著的培養基，移栽到經消毒的重量比腐殖土 草炭珍珠巖 =3:2:2的混合基質中，溫度控制在^°C，前5d濕度控制在90%左右，以后逐漸降低濕度，直至將移栽苗置于自然條件下。有益效果
本發明對玉蟬花采用組織培養技術，具有以下優點
1、本發明針對玉蟬花原產地的氣候特點，提高了組培過程中的光強度和并延長了光照周期，降低了培養溫度，從而使培養環境更接近其原生地的氣候，通過對初代培養基、生根培養基配方的精確篩選，達到了增殖速度快、遺傳性狀穩定、繁殖系數高、試管苗生長旺盛的優良效果。2、在煉苗移栽中通過逐漸提高光照強度，并且在移栽過程中，逐漸降低濕度、嚴格控制溫度，采用合適的基質配方，最終提高了生根試管苗的成活率。3、通過組織培養，其繁殖系數高，能周年繁殖，適合工廠化育苗，大大縮短了育種的時間。4、納米助劑的添加，納米顆粒因為其所具有的巨大表面積會有利于細胞的吞噬吸收，顆粒的納米尺度可能會通過促進細胞的吞噬吸收來影響細胞的生理活動。同時，粘土材料中微量金屬元素對植物的生長有一種類似于激素(生長素和細胞分裂素)的效應，其對高等植物具有促進其生長的功效。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明作進一步的說明，下述各實施例僅用于說明本發明，對本發明并沒有限制。玉蟬花的納米組織培養方法，其特征在于該方法包括下列步驟
(1)外植體的選擇在玉蟬花開花之前取花葶的莖段和分節點作為外植體；
(2)材料處理方法先用無菌水將外植體沖洗干凈，去除葉鞘，切成具有1-4個腋芽、長 3-5cm段，用0. 5g/L的多菌靈溶液浸泡2_3個小時，紫外燈照射20 min,再用75%乙醇消毒 30秒鐘，用0. 1%升汞水浸泡20分鐘，無菌水沖洗5-6次，取出材料，切成具有一個腋芽、長度為Icm左右的小段，最后用1 次氯酸鈉殺菌30秒，無菌水沖洗5-6次；
(3)初代培養在無菌的條件下將步驟②得到的外植體接種在初代培養基上，該培養基是在MS常規培養基中添加了 3. Omg/L的6-BA、l. 2mg/L的NAA，30mg/L的蔗糖，5mg/ mL-20mg/mL納米助劑，PH 5. 9，培養溫度為M°C，光照周期13h/d，光強度為2100_22001ux， 待培養出的外植體帶芽量長至3個時，即開始下一個階段；
所述的納米助劑的制備方法為將海泡石、蒙脫石粘土混合溶液在0°C下攪拌活化2 h，加入十二烷基硫酸鈉，3 X 104 r / min高剪切3 h，反應溶液冷卻至室溫后減壓抽濾，所得沉淀在105°C下干燥至恒重，得到納米助劑。
(5)生根培養將繼代培養的高度超過2. 5cm的新苗剪下接種在生根培養基上， 該培養基是在1/2MS常規培養基中添加了 0. 7mg/L的IAA、0. 5mg/L的NAA，0. 2mg/L的GA， 28mg/L的蔗糖，PH 5. 9，培養溫度為M°C，光照周期13h/d，光強度為2100-22001ux，待新苗長至2. 3cm左右時，即開始下一個階段；
(6)煉苗移栽將長高至10-15cm、長根> 5根的組培苗帶瓶移至普通大棚內，放置 1-3天后打開瓶蓋，在25-28°C，濕度70-80%，光強7 100-79001x條件下煉苗3_5天，煉苗完成后取出小苗洗凈根部附著的培養基，移栽到經消毒的重量比腐殖土 草炭珍珠巖 =3:2:2的混合基質中，溫度控制在^°C，前5d濕度控制在90%左右，以后逐漸降低濕度，直至將移栽苗置于自然條件下。經過上述步驟的培養，玉蟬花的愈傷組織的萌動率達到了 98%，增殖倍數達到了 4. 55倍，生根率達到了 100%，而移栽成活率達到了 98%。
權利要求
1. 一種玉蟬花的納米組織培養方法，其特征在于該方法包括下列步驟(1)外植體的選擇在玉蟬花開花之前取花葶的莖段和分節點作為外植體；(2)材料處理方法先用無菌水將外植體沖洗干凈，去除葉鞘，切成具有1-4個腋芽、長 3-5cm段，用0. 5g/L的多菌靈溶液浸泡2_3個小時，紫外燈照射20 min,再用75%乙醇消毒 30秒鐘，用0. 1%升汞水浸泡20分鐘，無菌水沖洗5-6次，取出材料，切成具有一個腋芽、長度為Icm左右的小段，最后用1 次氯酸鈉殺菌30秒，無菌水沖洗5-6次；(3)初代培養在無菌的條件下將步驟②得到的外植體接種在初代培養基上，該培養基是在MS常規培養基中添加了 3. Omg/L的6-BA、l. 2mg/L的NAA，30mg/L的蔗糖，5mg/ mL-20mg/mL納米助劑，PH 5. 9，培養溫度為M°C，光照周期13h/d，光強度為2100_22001ux， 待培養出的外植體帶芽量長至3個時，即開始下一個階段；所述的納米助劑的制備方法為將海泡石、蒙脫石粘土混合溶液在0°C下攪拌活化2 h，加入十二烷基硫酸鈉，3 X 104 r / min高剪切3 h，反應溶液冷卻至室溫后減壓抽濾，所得沉淀在105°C下干燥至恒重，得到納米助劑；(5)生根培養將繼代培養的高度超過2.5cm的新苗剪下接種在生根培養基上，該培養基是在 1/2MS 常規培養基中添加了 0. 7mg/L 的 IAA、0. 5mg/L 的 NAA，0. 2mg/L 的 GA，28mg/ L的蔗糖，PH 5. 9，培養溫度為M°C，光照周期13h/d，光強度為2100-22001UX，待新苗長至 2. 3cm左右時，即開始下一個階段；(6)煉苗移栽將長高至10-15cm、長根>5根的組培苗帶瓶移至普通大棚內，放置 1-3天后打開瓶蓋，在2548°C，濕度70-80 %，光強7 100-79001x條件下煉苗3_5天，煉苗完成后取出小苗洗凈根部附著的培養基，移栽到經消毒的重量比腐殖土 草炭珍珠巖 =3:2:2的混合基質中，溫度控制在^°C，前5d濕度控制在90%左右，以后逐漸降低濕度，直至將移栽苗置于自然條件下。
全文摘要
本發明公開了一種玉蟬花的納米組織培養方法，主要通過組織培養過程中初代培養、繼代培養、增殖培養、生根培養添加了納米助劑，達到了增殖速度快、遺傳性狀穩定、繁殖系數高、試管苗生長旺盛的優良效果，玉蟬花的愈傷組織的萌動率達到了98%，增殖倍數達到了4.55倍，生根率達到了100%，而移栽成活率達到了98%。
文檔編號A01H4/00GK102524082SQ20121007036
公開日2012年7月4日 申請日期2012年3月17日 優先權日2012年3月17日
發明者李玉弟 申請人:常熟市尚湖農業生態園有限公司