專利名稱：北美紅杉樹組織培養方法
技術領域：
本發明涉及一種北美紅杉樹組織培養方法，是一種農林苗木無性快速繁殖技術。
背景技術：
北美紅杉樹是一種大徑級用材種也是重要的園林綠化樹種?，F在國內北美紅杉樹繁殖主要是種子繁殖，而種子主要來源于美國進口，種量有限。北美紅杉樹扦插繁殖生根率低，并且側枝扦插苗因喪失頂端優勢，失去沒有利用價值。因此通過組織培養技術，獲得大量優質北美紅杉樹幼苗，對北美紅杉樹推廣具有重要意義?，F在國內不少學者進行了北美紅杉樹組織培養的研究，但因為生根率低，繁殖周期長或外植體取材局限了其應用。

發明內容
為了克服現在北美紅杉樹組織培養中存在的不足，本發明提供一種北美紅杉樹組織培養方法，該組織培養方法不僅外植體污染率低，誘導率高、增值率高、生根率高，繁殖周期短，而且移栽成活率高。植物組織培養的理論依據是植物細胞全能型，即植物的每個細胞都包含著該物種的全部遺傳信息，從而具備發育成完整植株的遺傳能力，在適宜條件下，任何一個細胞都可以發育成一個新個體。選擇適宜的外植體，在無菌條件下消毒，接種到各類培養上，建立無菌培養體系，提供適宜的溫度、光照和濕度，培育成新個體。本發明解決其技術問題所采用的技術方案是一種北美紅杉樹組織培養方法，利用北美紅杉樹嫩枝，將北美紅杉樹嫩枝清洗后，在無菌條件下，清洗后的北美紅杉樹嫩枝用質量濃度70%的酒精消毒30s后，質量濃度0. 1% HgCl2處理15min，無菌水沖洗4一5次，取Icm長的普通莖尖做外植體，接種誘導培養基，污染率低于5%，培養溫度26土 1°C，濕度70%,光照12h，光照強度2000Lx，培養時間為40天；然后截取I. 5cm的莖段轉接增殖培養基培養，培養溫度26± 1°C，濕度70%，光照12h，光照強度2000Lx ;培養時間為30天；I. 5cm的莖尖轉接生根培養基培養溫度24土 1°C，濕度70%，光照12h，光照強度2000Lx ;培養時間為50天，得生根率為75%以上的組培苗；組培苗洗凈根部培養基，移植于基質中，基質配方為草炭土 珍珠巖3 1，80°C下滅菌I小時，馴化溫度24±1°C，濕度90%，光照12h，光照強度2000LX，10天后逐漸降低濕度，增加光照，20天后移栽大田；
所述的誘導培養基以MS為基礎培養基，添加NAA 0. lmg/L, KT 0.5 mg/L，蔗糖3%，瓊脂
0.6%, pH 6. 8 ；
所述的增殖培養基以MS為基礎培養基，添加NAA 0. 3mg/L, KT 0.5 mg/L, BA 1.0 mg/L,蔗糖 3%，瓊脂 0. 6%，pH 6. 8 ；
所述的生根培養基以1/2MS為基礎培養基，添加NAA 0. 3mg/L, KT 0. 5 mg/L, BA I. 0mg/L,鹿糖 2%,瓊脂 0. 6%, pH 6. 8。本發明的有益效果是本發明以莖尖外植體材料，選擇抗性母株取材，保證了優良性狀的遺傳穩定性；完善了消菌處理方法；同時篩選出了適合激素種類及濃度，解決了目前研究中存在的生產周期長，污染率高，生根率低，移栽成活率低的問題，成功建立了北美紅杉樹的組織培養體系。莖尖分化率達100%，生根率為75%，移栽成活率在95%以上。
具體實施例方式I、取北美紅杉樹嫩枝用O. 1%洗衣粉水浸洗30min后，用自來水沖洗Ih備用。2、無菌條件下，北美紅杉樹嫩枝用70%的酒精消毒30s后，O. 1% HgCl2處理15min,無菌水沖洗4一5次，取Icm長的普通莖尖做外植體，接種誘導培養基，污染率低于5%。誘導培養基以MS為基礎培養基，添加NAAO. lmg/L, ΚΤ0. 5 mg/L,蔗糖3%，瓊脂O. 6%，pH6. 8，培養溫度26± 1°C，濕度70%，光照12h，光照強度2000Lx。培養時間為40天，截取I. 5cm的莖段轉接增殖培養基。莖尖分化率達100%。3、增殖培養基以MS為基礎培養基，添加NAAO. 3mg/L, ΚΤ0. 5 mg/L,BAl. O mg/L，蔗 糖3%，瓊脂O. 6%，pH 6.8,培養溫度26± I°C，濕度70%，光照12h，光照強度2000Lx。培養時間為30天，取I. 5cm的莖段轉接增殖培養基，I. 5cm的莖尖轉接生根培養基。4、生根培養基以 1/2MS 為基礎培養基，添加 NAAO. 3mg/L, ΚΤ0. 5 mg/L, BAl. O mg/L，蔗糖2%，瓊脂O. 6%，pH 6. 8，培養溫度24±1°C，濕度70%，光照12h，光照強度2000Lx。培養時間為50天，生根率為75%以上。5、組培苗洗凈根部培養基，移植于基質中，基質配方草炭土珍珠巖3 1，80°C滅菌I小時，馴化溫度24土1°C，濕度90%，光照12h，光照強度2000LX，10天后逐漸降低濕度，增加光照，20天后移栽大田。移栽成活率在95%以上。
權利要求
1.一種北美紅杉樹組織培養方法，其特征是利用北美紅杉樹嫩枝，將北美紅杉樹嫩枝清洗后，在無菌條件下，用質量濃度70%的酒精消毒30s后，質量濃度O. 1% HgCl2處理15min，無菌水沖洗4一5次，取Icm長的普通莖尖做外植體，接種誘導培養基，污染率低于5%，培養溫度26±1 °C，濕度70%，光照12h，光照強度2000Lx，培養時間為40天；然后截取I. 5cm的莖段轉接增殖培養基培養，培養溫度26 土 1°C，濕度70%，光照12h，光照強度2000Lx ;培養時間為30天；1. 5cm的莖尖轉接生根培養基培養溫度24±1°C，濕度70%，光照12h，光照強度2000Lx ;培養時間為50天，得生根率為75%以上的組培苗；組培苗洗凈根部培養基，移植于基質中，基質配方為草炭土 珍珠巖3 1，801下滅菌0.5小時，馴化溫度24± 1°C，濕度90%，光照12h，光照強度2000Lx，10天后逐漸降低濕度，增加光照，20天后移栽大田； 所述的誘導培養基以MS為基礎培養基，添加NAA O. lmg/L, KT 0.5 mg/L，蔗糖3%，瓊脂O.6%, pH 6. 8 ；所述的增殖培養基以MS為基礎培養基，添加NAA O. 3mg/L, KT O. 5 mg/L, BA I. O mg/L,蔗糖 3%，瓊脂 O. 6%，pH 6. 8 ；所述的生根培養基以1/2MS為基礎培養基，添加NAA O. 3mg/L, KT O. 5 mg/L, BA I. Omg/L,鹿糖 2%,瓊脂 O. 6%, pH 6· 8。
2.據權利要求I所述的北美紅杉樹組織培養方法，其特征是所述的北美紅杉樹嫩枝清洗是將北美紅杉樹嫩枝用O. 1%洗衣粉水洗30min后,用自來水沖洗lh。
全文摘要
本發明公開了一種北美紅杉樹的組織培養方法。屬農林苗木無性快速繁殖技術。該方法是將北美紅杉樹嫩枝經消毒，以普通莖尖進行誘導、增殖和生根培養，得到再生苗。實驗證明莖尖經誘導培養，分化率達100％，生根率為75%，移栽成活率在95%以上。本發明的有益效果是以抗性植株為取材母本，普通莖尖為外植體材料,,保證了優良性狀的遺傳穩定性；完善了消菌處理方法；同時篩選出了適合激素種類及濃度,解決了目前研究中存在的生產周期長，污染率高，生根率低，移栽成活率低的問題,成功建立了北美紅杉樹的組織培養體系體系。
文檔編號A01H4/00GK102613083SQ20121009927
公開日2012年8月1日 申請日期2012年4月8日 優先權日2012年4月8日
發明者張翠英, 徐德蘭, 杲春陽, 琚淑明, 田雨, 穆靜, 高明俠 申請人:徐州工程學院