專利名稱：一種二十年生木荷大樹高效離體繁殖方法
技術領域：
本發明涉及植物離體組織培養快速繁殖的方法，具體為二十年生木荷大樹的高效離體組培快繁方法。
背景技術：
木荷(Schima superba)屬山茶科木荷屬，為亞熱帶地帶性常綠大喬木,作為速生景觀防火特色樹種廣泛分布于南方12個省區。木荷生長迅速，少病蟲害，對土壤條件要求不嚴，耐旱力強，同時樹冠濃密，葉片厚革質、含水量大、含油脂少、燃點較高、萌芽力強，是南方生物防火林帶構建的當家樹種和優良的高抗生態防護樹種(70%以上的生物防火林帶和大量的生態防護林由木荷構建而成)；木荷樹干端直，木材堅重致密，結構均勻，力學性質良好，是木地板、木制家具、木制玩具、木制工藝品等優質木制工藝用材樹種，如浙江70% 的木制玩具用材都來自木荷。大徑階木荷工藝材銷價在1500元/m3以上。木荷已列為國家林業局珍貴用材發展名錄；木荷栽培容易、早期速生，宜與杉木、馬尾松等混交培育大徑階優質用材，是杉木、馬尾松二代跡地更新的優良替代樹種，廣為南方各省重視和喜愛，每年用種量都達到數萬kg，是亞熱帶地區第一大珍貴優質闊葉用材造林樹種。國內外學者對該樹種開展了一系列的研究工作，如有良種選育、播種、組織培養育苗，生物防火機理、防火林帶構建配套等技術。在現有繁殖技術中，組織培養的方法已有報道，但報道中研究對象為種子、二至十年生樹木頂芽和嫩枝莖段，采用原有方法對江蘇省林業科學研究院種源試驗林的二十年生大樹開展組織培養研究未能成功。原因是利用原有方法培養時，發現外植體啟動培養困難、增殖系數偏低、容易發生褐變和玻璃化苗、生根率低等問題。說明原方法對二十年生木荷大樹進行組織培養的關鍵技術環節有明顯缺陷。

發明內容
為了克服現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種適合木荷大樹的高效離體組培快繁方法，為優良品種選育、良種規模化繁殖提供技術支撐。本發明是通過以下技術方案來實現的一種二十年生木荷大樹的高效離體繁殖方法，按下列步驟進行(I):準備基本培養基每升基本培養基中含有四水硝酸鈣371-556mg，硝酸銨268_400mg，硫酸鉀600-900mg，七水硫酸鎂248-370mg，磷酸二氫鉀115_170mg，二水氯化鈣70_96mg，四水硫酸錳22. 5mg,七水硫酸鋅8. 6mg,硼酸6. 2mg,五水硫酸銅O. 25mg, 二水鑰酸鈉O. 25mg,七水硫酸亞鐵41. Omg,乙二胺四乙酸鈉56. Omg,維生素B1 I. Omg,維生素B6 O. 5mg, VB5 O. 5mg,甘氨酸2. Omg,肌醇90mg,鹿糖20000mg,卡拉膠6500mg。(2):外植體的接種采用經選育的二十年生木荷優良單株腋芽莖段為外植體，經70%酒精消毒20-30s，再用添加Tween-20 1-2滴/IOOml的O. I %的升汞溶液消毒9_13min，用無菌水沖洗3-5次，作為外植體進行培養；(3):芽苗培養在超凈的工作臺上，無菌條件下，將外植體接種在經消毒的含有啟動培養基的培養瓶中，先將其置于黑暗條件下7-12d后，再置于普通日光燈為光源、光照強度為1500-20001x下，每日光照16h，溫度23_25°C、濕度為50% -60 %，培養40d，分化長成試管 芽苗。所述的啟動培養基由以下重量含量的原料組成每升基本培養基含玉米素(ZT)O. 5-1. 5mg ;6-芐基嘌呤(BA) I. 0-2. 5mg ；吲哚丁酸(IBA)O.01-0. Img ；(4):增殖培養將上述(2)步中長成的芽苗，剪切轉接于經消毒的含有增殖培養基的培養瓶中進行增殖培養，不斷增殖，視繁殖規模達1000瓶進入下一步。所述的增殖培養基為每升基本培養基含玉米素(ZT)I. 0-1. 5mg ；6-芐基嘌呤 I. 5-2. 5mg ；吲哚丁酸(IBA)O. 01-0. 05mg ；朽1樣酸(Citric acid) 80_100mg ;(5):壯苗培養將(3)中培養的試管芽苗，剪切接種于經消毒的含有壯苗培養基的培養瓶中進行壯苗培養，32d后進入下一步。所述的壯苗培養基為每升基本培養基含玉米素(ZT)O. 5-1. Omg ;6-芐基嘌呤 I. 0-1. 5mg ；吲哚丁酸(IBA)O.05-0. Img ；朽1樣酸(Citric acid) 80_100mg。(6)生根培養將(4)步中的試管壯苗，剪除基部愈傷組織和部分葉片，保留3-4片葉片，接種于經消毒的含有生根培養基的培養瓶中進行生根培養12-15d。所述的生根處理產生根原基培養基為每升基本培養基含α -萘乙酸(NAA) O. 3-0. 5mg ；吲哚丁酸(IBA)O. 5-1. Omg ；朽1樣酸(Citric acid) 100_150mg ；硝酸鑭(La(NO3)3· 6H20) 8-1 Omg。(7):移栽
將(5)步生長的帶有根小苗，取出清洗，移栽到含有泥炭、黃土、珍珠巖體積比為泥炭黃心土 珍珠巖=2 I I的基質中，澆透水，保持溫度25-28 °C，相對濕度85%以上，前IOd遮光70%，后逐漸見光，25d后生根成活，生根率達96%以上，50d左右，全光照。上述二十年生木荷大樹高效離體繁殖方法，所有培養基其pH值均調至5. 8左右，所述的基本培養基配方見表I。表I每升基本培養基中含有物質種類和質量
權利要求
1.一種二十年生木荷大樹高效離體繁殖方法，其特征是按下列步驟進行 (1)、準備基本培養基，每升基本培養基中含有四水硝酸鈣371-556mg，硝酸銨268-400mg，硫酸鉀600_900mg，七水硫酸鎂248_370mg，磷酸二氫鉀115_170mg，二水氯化鈣70-96mg,四水硫酸錳22. 5mg,七水硫酸鋅8. 6mg,硼酸6. 2mg,五水硫酸銅O. 25mg, 二水鑰酸鈉O. 25mg,七水硫酸亞鐵41. Omg,乙二胺四乙酸鈉56. Omg,維生素BI I. Omg,維生素B6O. 5mg, VB5 O. 5mg,甘氨酸 2. Omg,肌醇 90mg,鹿糖 20000mg,卡拉膠 6500mg。
(2)、采用經選育的二十年生木荷大樹優良單株的腋芽莖段為外植體，經70%酒精消毒20-35s,再用添加吐溫20 1-2滴/IOOml的O. I %的升汞溶液滅菌9_13min，用無菌水沖洗3-5 次； (3)、在超凈的工作臺上，無菌條件下，將消毒的外植體接種在經消毒的含有啟動培養基的培養瓶中，先將其置于黑暗條件下7-12d后，再置于普通日光燈為光源、光照強度為1500-20001x下，每日光照16h，溫度23_25°C、濕度為50% -60%，培養40d，分化長成試管芽苗； 所述的啟動培養基為每升基本培養基含玉米素O. 5-1. 5mg、6-芐基嘌呤I. 0-2. 5mg和吲哚丁酸O. 01-0. Img ； (4)、將從(2)步中長成的芽苗，剪切，轉接于經消毒的含有增殖培養基的培養瓶中進行增殖培養，不斷增殖，視繁殖規模達1000瓶進入下一步； 所述的增殖培養基為每升基本培養基含玉米素I. ο-l. 5mg、6-節基嘌呤I. 5-2. 5mg、吲哚丁酸O. 01-0. 05mg和檸檬酸80-100mg ； (5)、將(3)步中培養的試管芽苗，剪切、接種于經消毒的含有壯苗培養基的培養瓶中進行壯苗培養，32d后進入下一步； 所述的壯苗培養基為每升基本培養基含玉米素O. 5-1. 0mg、6-芐基嘌呤I. 0-1. 5mg、吲哚丁酸O. 05-0. Img和檸檬酸80-100mg ； (6)、將(4)步中的試管壯苗，剪除基部愈傷組織和部分葉片，保留3-4片葉片，接種于經消毒的含有生根培養基的培養瓶中，進行生根培養12-15d ； 所述的生根培養基為每升基本培養基含α-萘乙酸O. 3-0. 5mg、吲哚丁酸O. 5-1. Omg、朽1 樣酸 100_150mg 和硝酸倆 8-lOmg ； (7)、將(5)步中生長的帶有根的小苗，取出清洗，移栽到含有泥炭、黃土、珍珠巖體積比為泥炭黃心土 珍珠巖=2 I I的基質中，澆透水，保持溫度25-28°C，相對濕度85%以上，前IOd遮光70%，后逐漸見光，25d后生根成活，生根率達96%以上，50d左右，全光照。
全文摘要
一種二十年生木荷大樹高效離體繁殖方法，采用二十年生木荷大樹上生長的腋芽莖段為外植體，經消毒滅菌后，接種于啟動培養基中，先放置于黑暗條件下培養7-12d，再放置于普通日光燈下，每日光照16h，溫度23-25℃、濕度50％-60％，培養40d分化長成試管芽苗；將長成的試管芽苗剪切、轉接于經高壓滅菌的增殖培養基中進行增殖培養，然后再將增殖的試管芽苗剪切后接種于經高壓滅菌的壯苗培養基中進行壯苗培養，32d后剪除基部愈傷組織和部分葉片，保留3-4片葉片，接種于經高壓滅菌的生根培養基中進行生根培養12-15d，取出清洗，移栽到含有泥炭、黃心土、珍珠巖的混合基質中，其體積比為泥炭∶黃心土∶珍珠巖＝2∶1∶1，25d后生根成活，生根率達96％以上。
文檔編號A01H4/00GK102613089SQ20121012192
公開日2012年8月1日 申請日期2012年4月25日 優先權日2012年4月25日
發明者周志春, 董筱昀, 蔣澤平, 黃利斌 申請人:江蘇省林業科學研究院