專利名稱：利用原葉體增殖途徑快速繁育鳥巢蕨種苗的方法
技術領域：
本發明屬于農業生物技術領域，具體涉及一種利用原葉體增殖途徑快速繁育鳥巢蕨種苗的方法。該方法利用鳥巢蕨孢子誘導形成的原葉體，通過增殖、孢子體誘導、孢子體生根、移栽等過程，獲得大量可用于生產栽培的種苗。
背景技術：
鳥巢蕨(Aspleniumnidus)又名山蘇花、雀巢蕨、雀巢養齒，屬于鐵角蕨類，是多年生常綠附生蕨類植物。產于亞洲、非洲和澳洲。鳥巢蕨具有四季常青、株形豐滿、淡雅秀麗、葉色蔥綠等特點，是布置廳堂、會場和制作花籃的良好觀葉材料，切葉用量大，也是家庭園藝造景常用的材料。近年來又用作葉菜栽培，為地道的原生蔬菜，其嫩芽鮮綠，炒食質 脆爽口，無苦澀味，頗受消費者的喜愛，未來的應用潛力大。在自然條件下，鳥巢蕨的繁殖方法通常用分株繁殖法，也可采用孢子繁殖法，但是孢子繁殖要求條件高，很難分化出苗。而利用組織培養進行鳥巢蕨的繁殖可以得到大規模的整齊瓶苗，且繁殖系數高，近年來關于鳥巢蕨的組織培養均通過小苗分化小苗的方式進行增殖，該方法增殖系數較低，分化出的小苗不整齊，先分化的小苗容易老化，不利于批量出苗。

發明內容
本發明的目的是提供一種利用原葉體增殖途徑快速繁育鳥巢蕨種苗的方法，以原葉體形式進行增殖，可獲得大量的原葉體，通過增殖、孢子體誘導、孢子體生根、移栽等過程，獲得大量可用于生產栽培的種苗。該方法獲得的孢子體生理年齡一致，生長整齊，適合工廠化育苗和規模化栽培。本發明所采用的技術方案一種利用原葉體增殖途徑快速繁育鳥巢蕨種苗的方法，包括原葉體培養過程、增殖培養過程、孢子體誘導過程、生根誘導過程、移栽和管理過程，其步驟如下I、原葉體培養過程取帶未散開孢子的鳥巢蕨葉片，清洗消毒后用無菌紙吸干水分，取出孢子接種到孢子萌發培養基培養40 60 d，待孢子萌發并長成綠色的原絲體(此時，在培養基的表面可以看到許多綠色的小點);將孢子萌發后形成的原絲體接種于發育培養基上，25 30 d后原絲體發育成原葉體。所述孢子萌發培養基是以MS培養基為基本培養基，并添加BA O. 5mg/L、蔗糖30 g/L、卡拉膠6.5 g/L, pH 5.8。所述發育培養基是以MS培養基為基本培養基，并添加 6-BA I. O mg/L、NAA O. 02 mg/L、鹿糖 30 g/L、卡拉膠 6. 5 g/L, pH 5.8。2、增殖培養過程將原葉體團切割成I cm3的小塊，接種到增殖培養基上進行繼代增殖培養，每40d繼代I次，增殖系數可達10以上。所述增殖培養基是以MS培養基為基本培養基，并添加
6-BA 2. O mg/L、NAA O. 01 mg/L、鹿糖 30 g/L、卡拉膠 6. 5 g/L, pH 5.8。
3、孢子體誘導過程將經過繼代增殖培養的原葉體切成O. 5 cm3的小塊，接種到孢子體誘導培養基上，20 d后，原葉體精子器和頸卵器發育成熟，再培養，直至在原葉體團中分化出大量孢子體。所述孢子體誘導培養基是以MS培養基為基本培養基，并添加6-BA 3.0 mg/L,NAA 0.01 mg/L、鹿糖 30 g/L、卡拉膠 6. 5 g/L, pH 5.8。4、生根誘導過程待孢子體的葉片伸長到2 3 cm時，將孢子體從原葉體團中單個分離出來，接種到生根培養基上，培養30 d后，在苗的基部形成棕色的根，根上有根毛和叉根，生根率95%。所述生根培養基是以1/2MS培養基為基本培養基，并添加NAA 0.5 mg/L、IBA 0.3 mg/L、蔗糖 30 g/L、卡拉膠 6. 5 g/L, pH 5.8。 5、移栽和管理過程A.出瓶將株高在4cm以上的生根苗連瓶放置在室外煉苗，一周后將苗移出培養瓶外，洗凈小苗根部的培養基，進行移栽；B.基質分別取草炭土、椰糠和河沙，按體積比計草炭土 椰糠河沙=3:2:1的比例配成基質，提前澆透水，并覆蓋薄膜保濕；C.移栽將已經濕透的基質進行淺翻，然后耙平，并用竹簽打孔，孔深O. 5 cm，將小苗輕輕放到孔中，并用周圍的基質填充，稍壓實，并用噴霧的方法淋水；D.管理移栽后7 10 d，覆蓋薄膜保濕，基質濕度保持80% 90%左右，然后逐漸降低到70% ;空氣濕度90%以上，然后逐漸降低到60% 70% ;遮陰60% 70%，然后逐漸減少到30% ；E.施肥15 20 d后幼苗生新根，晴天上午采用O. 2% O. 3%尿素溶液噴霧后，并用清水淋洗，每7 d施肥I次；F.病蟲害防治利用500倍多菌靈、500倍百菌清、800倍甲霜靈復合防病，利用菊酯類殺蟲劑除蟲。本發明工藝流程簡單，以原葉體形式進行增殖，可獲得大量的原葉體，通過增殖、孢子體誘導、孢子體生根、移栽等過程，獲得大量可用于生產栽培的種苗，且獲得的種苗生理年齡一致，生長整齊，適合工廠化育苗和規模化栽培。


圖I是鳥巢蕨原葉體增殖效果圖。圖2是鳥巢蕨原葉體誘導出孢子體效果圖。圖3是鳥巢蕨孢子體生長效果圖。圖4是鳥巢蕨孢子體生根效果圖。
具體實施例方式下面結合實施例，對本發明的具體實施方式
作進一步詳細描述。以下實施例用于說明本發明，但不用來限制本發明的范圍。實施例一I、原葉體培養過程
取帶未散開孢子的鳥巢蕨葉片,用洗漆劑溶液浸泡10 min,流失沖洗10 min,在超凈工作臺用O. 1% HgCl2滅菌8 min，無菌水沖洗4次后，用無菌紙吸干水分，用解剖刀將孢子刮出，接種到孢子萌發培養基(MS基本培養基+ΒΑ0. 5 mg/L+蔗糖30 g/L+卡拉膠6. 5 g/L,pH 5. 8)，培養約6 8周后孢子萌發并長成綠色的原絲體，在培養基的表面可以看到許多綠色的小點；將孢子萌發后形成的原絲體接種于發育培養基(MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA O. 02mg/L+鹿糖30 g/L+卡拉膠6. 5 g/L, pH 5. 8), 4周后,原絲體發育成原葉體。2、增殖培養過程將原葉體團切割成I cm3的小塊，接種到增殖培養基(MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA
0.01 mg/L+蔗糖30 g/L+卡拉膠6. 5 g/L, pH 5. 8)上進行繼代增殖培養，每40 d繼代I次，原葉體在適當的培養基上可快速增殖，增殖系數可達10以上(圖I)。3、孢子體誘導過程 將經過繼代增殖培養的原葉體切成O. 5 cm3的小塊，接種到孢子體誘導培養基(MS+6-BA 3. O mg/L+NAA O. 01 mg/L+蔗糖 30 g/L+卡拉膠 6. 5 g/L, pH 5.8)上，20d 后，原葉體精子器和頸卵器發育成熟，再培養10 d，幼孢子體大量出現，隨著培養進程的推進，在原葉體團中分化出大量孢子體(圖2)。將本發明所述孢子體誘導培養基為實驗組，其他培養基(分別為 MS+6-BA I. O mg/L +IAA O. 02 mg/L、MS+6_BA I. O mg/L +IBA O. 02 mg/L、MS+6-BA 1.0 mg/L，其他條件與實驗組相同)為對照組進行誘導實驗對比，所得結果見表1，實驗組分化率最高，其分化率為96%。表I鳥巢蕨原葉體分化孢子體的頻率
權利要求
1.一種利用原葉體增殖途徑快速繁育鳥巢蕨種苗的方法，其特征在于，包括原葉體培養過程、增殖培養過程、孢子體誘導過程、生根誘導過程、移栽和管理過程，其步驟如下 .1)、原葉體培養過程 取帶未散開孢子的鳥巢蕨葉片，清洗消毒后用無菌紙吸干水分，取出孢子接種到孢子萌發培養基培養40 60 d，待孢子萌發并長成綠色的原絲體；將孢子萌發后形成的原絲體接種于發育培養基上，25 30 d后原絲體發育成原葉體；所述孢子萌發培養基是以MS培養基為基本培養基，并添加BA 0.5 mg/L、蔗糖30 g/L、卡拉膠6.5 g/L, pH 5. 8 ;所述發育培養基是以MS培養基為基本培養基，并添加6-BA 1.0 mg/L、NAA O. 02 mg/L、蔗糖30 g/L、卡拉膠 6. 5 g/L, pH 5. 8 ； .2)、增殖培養過程 將原葉體團切割成I cm3的小塊，接種到增殖培養基上進行繼代增殖培養，每40d繼代I次；所述增殖培養基是以MS培養基為基本培養基，并添加6-BA 2. O mg/L、NAA O. 01 mg/L、鹿糖 30 g/L、卡拉膠 6. 5 g/L, pH 5. 8 ； .3)、孢子體誘導過程 將經過繼代增殖培養的原葉體切成O. 5 cm3的小塊，接種到孢子體誘導培養基上，20d后，原葉體精子器和頸卵器發育成熟，再培養，直至在原葉體團中分化出大量孢子體；所述孢子體誘導培養基是以MS培養基為基本培養基，并添加6-BA 3. O mg/L、NAA O. 01 mg/L、鹿糖 30 g/L、卡拉膠 6. 5 g/L, pH 5. 8 .4)、生根誘導過程 待孢子體的葉片伸長到2 3 cm時，將孢子體從原葉體團中單個分離出來，接種到生根培養基上，培養30 d后，在苗的基部形成棕色的根；所述生根培養基是以1/2MS培養基為基本培養基，并添加 NAA O. 5 mg/L、IBA O. 3 mg/L、鹿糖 30 g/L、卡拉膠 6. 5 g/L, pH 5. 8 ； .5)、移栽和管理過程 A.出瓶將株高在4cm以上的生根苗連瓶放置在室外煉苗，一周后將苗移出培養瓶夕卜，洗凈小苗根部的培養基，進行移栽； B.基質分別取草炭土、椰糠和河沙，按重量比計草炭土椰糠河沙=3:2:1的比例配成基質，提前澆透水，并覆蓋薄膜保濕； C.移栽將已經濕透的基質進行淺翻，然后耙平，并用竹簽打孔，孔深0.5cm，將小苗輕輕放到孔中，并用周圍的基質填充，稍壓實，并用噴霧的方法淋水； D.管理移栽后7 10d，覆蓋薄膜保濕，基質濕度保持80% 90%左右，然后逐漸降低到70% ;空氣濕度90%以上，然后逐漸降低到60% 70% ;遮陰60% 70%，然后逐漸減少到 30% ； E.施肥15 20d后幼苗生新根，晴天上午采用O. 2% O. 3%尿素溶液噴霧后，并用清水淋洗，每7 d施肥I次； F.病蟲害防治利用500倍多菌靈、500倍百菌清、800倍甲霜靈復合防病，利用菊酯類殺蟲劑除蟲。
全文摘要
本發明屬于農業生物技術領域，涉及一種利用原葉體增殖途徑快速繁育鳥巢蕨種苗的方法，包括原葉體培養過程、增殖培養過程、孢子體誘導過程、生根誘導過程、移栽和管理過程。本發明工藝流程簡單，以原葉體形式進行增殖，可獲得大量的原葉體，通過增殖、孢子體誘導、孢子體生根、移栽等過程，獲得大量可用于生產栽培的種苗，且獲得的種苗生理年齡一致，生長整齊，適合工廠化育苗和規模化栽培。
文檔編號A01G31/00GK102715092SQ20121023963
公開日2012年10月10日 申請日期2012年7月6日 優先權日2012年7月6日
發明者徐立, 李志英, 李騰敏 申請人:中國熱帶農業科學院熱帶作物品種資源研究所