專利名稱：一種適用于鮭魚(yú)類全雌二倍體育種的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及適用于鮭魚(yú)類全雌二倍體育種的方法。
背景技術(shù)：
自從上個(gè)世紀(jì)末以來(lái)，國(guó)內(nèi)曾有過(guò)關(guān)于鯉科魚(yú)類(鯉、鯽等)和虹鱒的三倍體誘導(dǎo)試驗(yàn)報(bào)導(dǎo)，試驗(yàn)方法是靜水壓力法或溫度(低溫、高溫)休克法誘導(dǎo)三倍體，但僅僅是試驗(yàn)室規(guī)模的小型試驗(yàn)，迄今尚無(wú)生產(chǎn)性試驗(yàn)及投入生產(chǎn)的報(bào)導(dǎo)。鮭魚(yú)全雌二倍體的主要用途是制備性逆轉(zhuǎn)雄魚(yú)，因?yàn)槿贫扼w的制備是誘導(dǎo)性逆轉(zhuǎn)雄魚(yú)的前提條件，因此，必須解決全雌二倍體的制備方法。針對(duì)鮭魚(yú)類進(jìn)行的染色體操 作僅有一家國(guó)內(nèi)公司和日本一些相關(guān)科研單位實(shí)施過(guò)熱休克法誘導(dǎo)虹鱒魚(yú)三倍體的實(shí)驗(yàn)。目前，對(duì)于鮭魚(yú)類全雌二倍體育種的方法國(guó)內(nèi)尚無(wú)可與之相比較的技術(shù)實(shí)例。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是要解決現(xiàn)有不存在鮭魚(yú)類全雌二倍體育種方法的問(wèn)題，而提出一種適用于鮭魚(yú)類全雌二倍體育種的方法。本發(fā)明中的一種適用于鮭魚(yú)類全雌二倍體育種的方法按以下步驟進(jìn)行一、首先挑選體健成熟的鮭魚(yú)類雌魚(yú)和雄魚(yú)用人工方法分別采集魚(yú)卵和精液，將魚(yú)卵和精液放置于不同的燒杯中；二、用生理鹽水洗滌魚(yú)卵I次 2次后，將洗滌干凈的魚(yú)卵放入產(chǎn)卵盤(pán)中，加入濃度為IN的NaOH;按人工精漿與精液的體積比為(80 100) :1的比例向燒杯里的精液中加入人工精漿進(jìn)行稀釋后放入培養(yǎng)皿中；將稀釋后的精液施加紫外線照射，照射強(qiáng)度為3000ergs/mm2 4000ergs/mm2,照射時(shí)間為50s 70s,其中，生理鹽水的配制將7. 5g的NaCUO. 2g 的 KCl、0. 2g 的 CaCl2 2H20 和 0. 02g 的 NaHCO3 加入到 IOOOml 蒸餾水制成生理鹽水；人工精漿的配制將7. 6g的NaCl,2. 98g的KC1、0. 37g的CaCl2 2H20、0. 31g的MgCl2 6H20和0. 21g的NaHCO3加入到1000ml蒸餾水制成溶液，再向該溶液中加入濃度為IN的NaOH溶液將該溶液的pH值調(diào)整為8. 2 8. 6，獲得人工精漿；三、按魚(yú)卵與稀釋后并施加紫外線照射的精液體積比為I: (2(T30)的比例向產(chǎn)卵盤(pán)中加入稀釋后并施加紫外線照射的精液進(jìn)行混合后，立即按清水與稀釋后并施加紫外線照射的精液的體積比為I: (3^5)的比例加入溫度為9°C 11°C的清水，用羽毛攪勻之后靜止2mirT3min后，用清水反復(fù)沖洗受精卵4次飛次，洗掉殘余的精液，放入盛有清水的燒杯內(nèi)；四、對(duì)經(jīng)步驟三洗凈后的受精卵在受精后5mirTl0min進(jìn)行熱休克誘導(dǎo)處理，將受精卵放入熱休克誘導(dǎo)處理設(shè)備中，調(diào)節(jié)其內(nèi)部溫度為25 °C 30°C，熱休克誘導(dǎo)處理時(shí)間為18mirT22min,然后將受精卵放入盛有清水的孵化桶中進(jìn)行孵化,孵化溫度為9. 5°C ^10. 5°C ;對(duì)經(jīng)步驟三洗凈后的受精卵在受精后7. 5h^8. 5h用靜水壓力設(shè)備進(jìn)行處理5. 5mirT6. 5min，靜水壓力為550KPa飛50Kpa，然后將受精卵放入盛有清水的孵化桶中進(jìn)行孵化，孵化溫度為9. 50C 10. 50C ；五、當(dāng)孵化積溫達(dá)到220度日 230度日，即達(dá)到發(fā)眼卵階段從孵化桶內(nèi)將孵化后的魚(yú)卵取出，去除未受精和未發(fā)育的死魚(yú)卵，再將發(fā)眼卵放入盛有清水的孵化桶中進(jìn)行孵化，孵化溫度為9. 5°C ^12. 5°C，發(fā)眼卵發(fā)育至300度日，稚魚(yú)孵化出膜，即完成鮭魚(yú)類全雌二倍體育種過(guò)程。本發(fā)明全雌二倍體育種的工作原理鮭魚(yú)類的成熟卵細(xì)胞內(nèi)，含有一個(gè)攜帶I倍數(shù)染色體(n)的卵核和I個(gè)攜帶I倍數(shù)染色體(n)的第二極體(第一極體此前已被排出)。當(dāng)精細(xì)胞進(jìn)入卵細(xì)胞時(shí)，在精細(xì)胞的刺激下，第二極體連同他的I倍數(shù)的染色體被排出卵外，攜帶I倍數(shù)染色體(n)的卵核與攜帶I倍數(shù)染色體(n)的精核相互融合，生成具有二倍數(shù)染色體的受精卵，該卵將發(fā)育成二倍體魚(yú)。但當(dāng)精細(xì)胞的遺傳物質(zhì)被紫外線照射后，精細(xì)胞所攜帶的I倍數(shù)染色體失去遺傳能力(該套染色體無(wú)法與卵細(xì)胞內(nèi)的染色體配對(duì)成二倍體)，進(jìn)入卵細(xì)胞后，在適當(dāng)時(shí)機(jī)，采 取適當(dāng)?shù)娜斯ご胧?本發(fā)明采取的是熱休克處理法)，阻止第二極體的排出，就會(huì)生成由卵核、無(wú)效精核、第二極體三方融合成的含有二倍數(shù)染色體(ln、0n、ln)的受精卵，該卵將發(fā)育成全雌二倍體魚(yú)。本發(fā)明的有益效果如下I、紫外線照射鮭魚(yú)精子，使其遺傳物質(zhì)失活。即保持精子的受精能力，但雄性遺傳物質(zhì)已經(jīng)無(wú)法參與子代基因組的構(gòu)建；2、熱休克法阻止受精卵第二極體排出，使受精卵所含有的非同源的全套染色體(遺傳物質(zhì))均來(lái)自于雌性配子(卵子)，從而保持了后代的二倍性，且所有后代均為XX機(jī)制，即均為雌性；3、靜水壓力法阻止第一次卵裂，使受精卵所含有的同源的全套染色體(遺傳物質(zhì))均來(lái)自于雌性配子(卵子)，從而保持了后代的二倍性，且所有后代均為XX機(jī)制，即均為雌性；4、用熱休克法誘導(dǎo)處理受精卵會(huì)得到異源全雌二倍體，用靜水壓力法處理受精卵會(huì)得到同源全雌二倍體。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列舉具體實(shí)施方式
，還包括各具體實(shí)施方式
間的任意組合。
具體實(shí)施方式
一本實(shí)施方式中的一種適用于鮭魚(yú)類全雌二倍體育種的方法按以下步驟進(jìn)行一、首先挑選體健成熟的鮭魚(yú)類雌魚(yú)和雄魚(yú)用人工方法分別采集魚(yú)卵和精液，將魚(yú)卵和精液放置于不同的燒杯中；二、用生理鹽水洗滌魚(yú)卵I次 2次后，將洗滌干凈的魚(yú)卵放入產(chǎn)卵盤(pán)中，加入濃度為IN的NaOH;按人工精漿與精液的體積比為(80 100) :1的比例向燒杯里的精液中加入人工精漿進(jìn)行稀釋后放入培養(yǎng)皿中；將稀釋后的精液施加紫外線照射，照射強(qiáng)度為3000ergs/mm2 4000ergs/mm2,照射時(shí)間為50s 70s,其中，生理鹽水的配制將7. 5g的NaCl、0.2g的KCl、0. 2g的CaCl2 2H20和0. 02g的NaHCO3加入到1000ml蒸餾水制成生理鹽水；人工精漿的配制將 7. 6g 的 NaCl,2. 98g 的 KC1、0. 37g 的 CaCl2 .2H20、0. 31g 的 MgCl2 *6H20和0. 21g的NaHCO3加入到1000ml蒸餾水制成溶液，再向該溶液中加入濃度為IN的NaOH溶液將該溶液的PH值調(diào)整為8. 2^8. 6，獲得人工精漿；三、按魚(yú)卵與稀釋后并施加紫外線照射的精液體積比為I: (2(T30)的比例向產(chǎn)卵盤(pán)中加入稀釋后并施加紫外線照射的精液進(jìn)行混合后，立即按清水與稀釋后并施加紫外線照射的精液的體積比為I: (3^5)的比例加入溫度為9°C 11°C的清水，用羽毛攪勻之后靜止2mirT3min后，用清水反復(fù)沖洗受精卵4次飛次，洗掉殘余的精液，放入盛有清水的燒杯內(nèi)；四、對(duì)經(jīng)步驟三洗凈后的受精卵在受精后5mirTl0min進(jìn)行熱休克誘導(dǎo)處理，將受精卵放入熱休克誘導(dǎo)處理設(shè)備中，調(diào)節(jié)其內(nèi)部溫度為25°C 30°C，熱休克誘導(dǎo)處理時(shí)間為18mirT22min,然后將受精卵放入盛有清水的孵化桶中進(jìn)行孵化,孵化溫度為 9.5°C ^10. 5°C ;對(duì)經(jīng)步驟三洗凈后的受精卵在受精后7. 5h^8. 5h用靜水壓力設(shè)備進(jìn)行處理
5.5mirT6. 5min，靜水壓力為550KPa飛50Kpa，然后將受精卵放入盛有清水的孵化桶中進(jìn)行孵化，孵化溫度為9. 50C 10. 50C ；五、當(dāng)孵化積溫達(dá)到220度日 230度日，即達(dá)到發(fā)眼卵階段從孵化桶內(nèi)將孵化后的魚(yú)卵取出，去除未受精和未發(fā)育的死魚(yú)卵，再將發(fā)眼卵放入盛有清水的孵化桶中進(jìn)行孵化，孵化溫度為9. 5°C 12. 5°C，發(fā)眼卵發(fā)育至300度日 320度日，稚魚(yú)孵化出膜，即完成鮭魚(yú)類全雌二倍體育種過(guò)程。本發(fā)明全雌二倍體育種的工作原理鮭魚(yú)類的成熟卵細(xì)胞內(nèi)，含有一個(gè)攜帶I倍數(shù)染色體(n)的卵核和I個(gè)攜帶I倍數(shù)染色體(n)的第二極體(第一極體此前已被排出)。當(dāng)精細(xì)胞進(jìn)入卵細(xì)胞時(shí)，在精細(xì)胞的刺激下，第二極體連同他的I倍數(shù)的染色體被排出卵外，攜帶I倍數(shù)染色體(n)的卵核與攜帶I倍數(shù)染色體(n)的精核相互融合，生成具有二倍數(shù)染色體的受精卵，該卵將發(fā)育成二倍體魚(yú)。但當(dāng)精細(xì)胞的遺傳物質(zhì)被紫外線照射后，精細(xì)胞所攜帶的I倍數(shù)染色體失去遺傳能力(該套染色體無(wú)法與卵細(xì)胞內(nèi)的染色體配對(duì)成二倍體)，進(jìn)入卵細(xì)胞后，在適當(dāng)時(shí)機(jī)，采取適當(dāng)?shù)娜斯ご胧?本發(fā)明采取的是熱休克處理法)，阻止第二極體的排出，就會(huì)生成由卵核、無(wú)效精核、第二極體三方融合成的含有二倍數(shù)染色體(ln、0n、ln)的受精卵，該卵將發(fā)育成全雌二倍體魚(yú)。本發(fā)明的有益效果如下I、紫外線照射鮭魚(yú)精子，使其遺傳物質(zhì)失活。即保持精子的受精能力，但雄性遺傳物質(zhì)已經(jīng)無(wú)法參與子代基因組的構(gòu)建；2、熱休克法阻止受精卵第二極體排出，使受精卵所含有的非同源的全套染色體(遺傳物質(zhì))均來(lái)自于雌性配子(卵子)，從而保持了后代的二倍性，且所有后代均為XX機(jī)制，即均為雌性；3、靜水壓力法阻止第一次卵裂，使受精卵所含有的同源的全套染色體(遺傳物質(zhì))均來(lái)自于雌性配子(卵子)，從而保持了后代的二倍性，且所有后代均為XX機(jī)制，即均為雌性；
4、用熱休克法誘導(dǎo)處理受精卵會(huì)得到異源全雌二倍體，用靜水壓力法處理受精卵會(huì)得到同源全雌二倍體。
具體實(shí)施方式
二 本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟二中按人工精漿與精液的體積比為(85 95) : I的比例向燒杯里的精液中加入人工精漿進(jìn)行稀釋；將稀釋后的精液施加紫外線照射，照射強(qiáng)度為3200ergs/mm2 3800ergs/mm2,照射時(shí)間為55s 65s。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟二中按人工精漿與精液的體積比為90:1的比例向燒杯里的精液中加入人工精漿進(jìn)行稀釋；將稀釋后的精液施加紫外線照射，照射強(qiáng)度為3500ergs/mm2，照射時(shí)間為60s。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至三之一不同的是步驟二中再向該溶液中加入濃度為IN的NaOH溶液將該溶液的pH值調(diào)整為8. 4。其它步驟及參數(shù)與具體
實(shí)施方式一至三之一相同。
具體實(shí)施方式
五本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至四之一不同的是步驟三中按魚(yú)卵與稀釋后并施加紫外線照射的精液體積比為I: (22 28)的比例向產(chǎn)卵盤(pán)中加入稀釋后并施加紫外線照射的精液進(jìn)行混合后，立即按清水與稀釋后并施加紫外線照射的精液的體積比為I: (3. 5^4. 5)的比例加入溫度為9. 50C 10. 5°C的清水。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一至四之一相同。
具體實(shí)施方式
六本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至四之一不同的是步驟三中按魚(yú)卵與稀釋后并施加紫外線照射的精液體積比為1:25的比例向產(chǎn)卵盤(pán)中加入稀釋后并施加紫外線照射的精液進(jìn)行混合后，立即按清水與稀釋后并施加紫外線照射的精液的體積比為1:4的比例加入溫度為10°C的清水。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一至四之一相同。
具體實(shí)施方式
七本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至六之一不同的是步驟四中對(duì)經(jīng)步驟三洗凈后的受精卵在受精后6mirT9min進(jìn)行熱休克處理,將受精卵放入熱休克誘導(dǎo)處理設(shè)備中，調(diào)節(jié)其內(nèi)部溫度為26°C 29°C，熱休克處理時(shí)間為19mirT21min，然后將受精卵放入盛有清水的孵化桶中進(jìn)行孵化，孵化溫度為9. 8°C 10.2°C ;對(duì)經(jīng)步驟三洗凈后的受精卵在受精后7. 8h^8. 2h用靜水壓力設(shè)備進(jìn)行處理5. SmirTe. 2min,靜水壓力為580KPa飛20Kpa，然后將受精卵放入盛有清水的孵化桶中進(jìn)行孵化，孵化溫度為
9.8°C ^10. 2°C。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一至六之一相同。
具體實(shí)施方式
八本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至六之一不同的是步驟四中對(duì)經(jīng)步驟三洗凈后的受精卵在受精后Smin進(jìn)行熱休克處理，將受精卵放入熱休克誘導(dǎo)處理設(shè)備中，調(diào)節(jié)其內(nèi)部溫度為28°C，熱休克處理時(shí)間為20min，然后將受精卵放入盛有清水的孵化桶中進(jìn)行孵化，孵化溫度為10°C ;對(duì)經(jīng)步驟三洗凈后的受精卵在受精后8h用靜水壓力設(shè)備進(jìn)行處理6min，靜水壓力為600KPa，然后將受精卵放入盛有清水的孵化桶中進(jìn)行孵化，孵化溫度為10°C。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一至六之一相同。
具體實(shí)施方式
九本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至八之一不同的是步驟五中孵化積溫達(dá)到222度日 228度日，孵化溫度為10°C 12°C，發(fā)眼卵發(fā)育至305度日 315度日，稚魚(yú)孵化出膜。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一至八之一相同。
具體實(shí)施方式
十本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至八之一不同的是步驟五中孵化積溫達(dá)到225度日，孵化溫度為irc，發(fā)眼卵發(fā)育至310度日，稚魚(yú)孵化出膜。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一至八之一相同。為了驗(yàn)證本發(fā)明的有益效果，進(jìn)行了以下實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)一一種適用于鮭魚(yú)類全雌二倍體育種的方法按以下步驟進(jìn)行
一、首先挑選體健成熟的鮭魚(yú)雌魚(yú)和雄魚(yú)用人工方法分別采集魚(yú)卵和精液，將魚(yú)卵和精液放置于不同的燒杯中；二、用生理鹽水洗滌魚(yú)卵2次后，將洗滌干凈的魚(yú)卵放入產(chǎn)卵盤(pán)中，加入濃度為IN的NaOH ;按人工精漿與精液的體積比為90:1的比例向燒杯里的精液中加入人工精漿進(jìn)行稀釋后放入培養(yǎng)皿中；將稀釋后的精液施加紫外線照射，照射強(qiáng)度為3500ergs/mm2，照射時(shí)間為60s，其中，生理鹽水的配制:將7. 5g的NaCl、0. 2g的KC1、0. 2g的CaCl2 CH2O和0. 02g的NaHCO3加入到IOOOml蒸餾水制成生理鹽水；人工精漿的配制將7. 6g的NaCl、2. 98g的KCl、0. 37g 的 CaCl2 2H20、0. 31g 的 MgCl2 6H20 和 0. 21g 的 NaHCO3 加入到 IOOOml 蒸餾水制成溶液，再向該溶液中加入濃度為IN的NaOH溶液將該溶液的pH值調(diào)整為8. 4，獲得人工精漿，所用紫外線照射裝置為一個(gè)0. 48m3的有機(jī)玻璃(I X 0. 6 X 0. 8m3)頂部安裝紫外線燈管，下方是可調(diào)節(jié)高度的電動(dòng)搖床；三、按魚(yú)卵與稀釋后并施加紫外線照射的精液體積比為1:25的比例向產(chǎn)卵盤(pán)中加入稀釋后并施加紫外線照射的精液進(jìn)行混合后，立即按清水與稀釋后并施加紫外線照射的精液的體積比為1:4的比例加入溫度為10°C的清水，用羽毛攪勻之后靜止2min后，用清水反復(fù)沖洗受精卵5次，洗掉殘余的精液，放入盛有清水的燒杯內(nèi)；四、對(duì)經(jīng)步驟三洗凈后的受精卵在受精后Smin進(jìn)行熱休克處理，將受精卵放入熱休克誘導(dǎo)處理設(shè)備中，調(diào)節(jié)其內(nèi)部溫度為28°C，熱休克處理時(shí)間為20min，然后將受精卵放入盛有清水的孵化桶中進(jìn)行孵化，孵化溫度為10°C;所用熱休克誘導(dǎo)處理設(shè)備為一個(gè)Im3大的玻璃缸體，下方有循環(huán)水泵、加熱棒、增氧泵和控溫裝置；五、當(dāng)孵化積溫達(dá)到220度日，即達(dá)到發(fā)眼卵階段從孵化桶內(nèi)將孵化后的魚(yú)卵取出，去除未受精和未發(fā)育的死魚(yú)卵，再將發(fā)眼卵放入盛有清水的孵化桶中進(jìn)行孵化，孵化溫度為12°C，發(fā)眼卵發(fā)育至300度日，稚魚(yú)孵化出膜，即完成鮭魚(yú)全雌二倍體育種過(guò)程。經(jīng)實(shí)驗(yàn)一驗(yàn)證，采用本發(fā)明方法進(jìn)行鮭魚(yú)全雌二倍體育種，全雌率可達(dá)85%，為鮭魚(yú)類全雌二倍體育種，提供了一種行之有效的方法，填補(bǔ)了國(guó)內(nèi)此領(lǐng)域研究的空白。
權(quán)利要求
1.一種適用于鮭魚(yú)類全雌二倍體育種的方法，其特征在于它是通過(guò)以下步驟實(shí)現(xiàn)的 一、首先挑選體健成熟的鮭魚(yú)類雌魚(yú)和雄魚(yú)用人工方法分別采集魚(yú)卵和精液，將魚(yú)卵和精液放置于不同的燒杯中； 二、用生理鹽水洗滌魚(yú)卵I次 2次后，將洗滌干凈的魚(yú)卵放入產(chǎn)卵盤(pán)中，加入濃度為IN的NaOH ;按人工精漿與精液的體積比為(80 100) : I的比例向燒杯里的精液中加入人工精漿進(jìn)行稀釋后放入培養(yǎng)皿中；將稀釋后的精液施加紫外線照射，照射強(qiáng)度為3000ergS/mm2 4000ergs/mm2,照射時(shí)間為50s 70s,其中，生理鹽水的配制將7. 5g的NaCl、0. 2g的KCl、0. 2g的CaCl2 *2H20和0. 02g的NaHCO3加入到1000ml蒸餾水制成生理鹽水；人工精漿的配制將 7. 6g 的 NaCl,2. 98g 的 KC1、0. 37g 的 CaCl2 .2H20、0. 31g 的 MgCl2 *6H20 和 0. 21g的NaHCO3加入到1000ml蒸餾水制成溶液，再向該溶液中加入濃度為IN的NaOH溶液將該溶液的PH值調(diào)整為8. 2^8. 6，獲得人工精漿； 三、按魚(yú)卵與稀釋后并施加紫外線照射的精液體積比為I:(20^30)的比例向產(chǎn)卵盤(pán)中加入稀釋后并施加紫外線照射的精液進(jìn)行混合后，立即按清水與稀釋后并施加紫外線照射的精液的體積比為I: (3^5)的比例加入溫度為9°C 11°C的清水，用羽毛攪勻之后靜止.2mirT3min后，用清水反復(fù)沖洗受精卵4次飛次，洗掉殘余的精液，放入盛有清水的燒杯內(nèi)； 四、對(duì)經(jīng)步驟三洗凈后的受精卵在受精后5mirTl0min進(jìn)行熱休克誘導(dǎo)處理，將受精卵放入熱休克誘導(dǎo)處理設(shè)備中，調(diào)節(jié)其內(nèi)部溫度為25°C 30°C，熱休克誘導(dǎo)處理時(shí)間為18mirT22min,然后將受精卵放入盛有清水的孵化桶中進(jìn)行孵化，孵化溫度為.9.5°C ^10. 5°C ;對(duì)經(jīng)步驟三洗凈后的受精卵在受精后7. 5h^8. 5h用靜水壓力設(shè)備進(jìn)行處理.5. 5mirT6. 5min，靜水壓力為550KPa飛50Kpa，然后將受精卵放入盛有清水的孵化桶中進(jìn)行孵化，孵化溫度為9. 50C 10. 50C ； 五、當(dāng)孵化積溫達(dá)到220度日 230度日，即達(dá)到發(fā)眼卵階段從孵化桶內(nèi)將孵化后的魚(yú)卵取出，去除未受精和未發(fā)育的死魚(yú)卵，再將發(fā)眼卵放入盛有清水的孵化桶中進(jìn)行孵化，孵化溫度為9. 5°C ^12. 5°C，發(fā)眼卵發(fā)育至300度日，稚魚(yú)孵化出膜，即完成鮭魚(yú)類全雌二倍體育種過(guò)程。
2.如權(quán)利要求I所述的一種適用于鮭魚(yú)類全雌二倍體育種的方法，其特征在于步驟二中按人工精漿與精液的體積比為(85 95) :1的比例向燒杯里的精液中加入人工精漿進(jìn)行稀釋；將稀釋后的精液施加紫外線照射，照射強(qiáng)度為3200ergS/mnT3800ergS/mm2，照射時(shí)間為55s 65s。
3.如權(quán)利要求I所述的一種適用于鮭魚(yú)類全雌二倍體育種的方法，其特征在于步驟二中按人工精漿與精液的體積比為90:1的比例向燒杯里的精液中加入人工精漿進(jìn)行稀釋；將稀釋后的精液施加紫外線照射，照射強(qiáng)度為3500ergs/mm2，照射時(shí)間為60s。
4.如權(quán)利要求1、2或3所述的一種適用于鮭魚(yú)類全雌二倍體育種的方法，其特征在于步驟二中再向該溶液中加入濃度為IN的NaOH溶液將該溶液的pH值調(diào)整為8. 4。
5.如權(quán)利要求4所述的一種適用于鮭魚(yú)類全雌二倍體育種的方法，其特征在于步驟三中按魚(yú)卵與稀釋后并施加紫外線照射的精液體積比為I: (22 28)的比例向產(chǎn)卵盤(pán)中加入稀釋后并施加紫外線照射的精液進(jìn)行混合后，立即按清水與稀釋后并施加紫外線照射的精液的體積比為I: (3. 5^4. 5)的比例加入溫度為9. 50C 10. 5°C的清水。
6.如權(quán)利要求4所述的一種適用于鮭魚(yú)類全雌二倍體育種的方法，其特征在于步驟三中按魚(yú)卵與稀釋后并施加紫外線照射的精液體積比為1:25的比例向產(chǎn)卵盤(pán)中加入稀釋后并施加紫外線照射的精液進(jìn)行混合后，立即按清水與稀釋后并施加紫外線照射的精液的體積比為1:4的比例加入溫度為10°C的清水。
7.如權(quán)利要求5所述的一種適用于鮭魚(yú)類全雌二倍體育種的方法，其特征在于步驟四中對(duì)經(jīng)步驟三洗凈后的受精卵在受精后6mirT9min進(jìn)行熱休克處理，將受精卵放入熱休克誘導(dǎo)處理設(shè)備中，調(diào)節(jié)其內(nèi)部溫度為26°C 29°C，熱休克處理時(shí)間為19mirT21min，然后將受精卵放入盛有清水的孵化桶中進(jìn)行孵化，孵化溫度為9. 8°C ^lO. 2V ;對(duì)經(jīng)步驟三洗凈后的受精卵在受精后7. 8h^8. 2h用靜水壓力設(shè)備進(jìn)行處理5. SmirTe. 2min,靜水壓力為580KPa飛20Kpa，然后將受精卵放入盛有清水的孵化桶中進(jìn)行孵化，孵化溫度為9. 8 0C 10. 2。。。
8.如權(quán)利要求5所述的一種適用于鮭魚(yú)類全雌二倍體育種的方法，其特征在于步驟四中對(duì)經(jīng)步驟三洗凈后的受精卵在受精后8min進(jìn)行熱休克處理，將受精卵放入熱休克誘導(dǎo)處理設(shè)備中，調(diào)節(jié)其內(nèi)部溫度為28°C，熱休克處理時(shí)間為20min，然后將受精卵放入盛有清水的孵化桶中進(jìn)行孵化，孵化溫度為10°C ;對(duì)經(jīng)步驟三洗凈后的受精卵在受精后8h用靜水壓力設(shè)備進(jìn)行處理6min，靜水壓力為600KPa，然后將受精卵放入盛有清水的孵化桶中進(jìn)行孵化，孵化溫度為I (TC。
9.如權(quán)利要求7所述的一種適用于鮭魚(yú)類全雌二倍體育種的方法，其特征在于步驟五中孵化積溫達(dá)到222度日 228度日，孵化溫度為10°C 12°C，發(fā)眼卵發(fā)育至305度日 315度日，稚魚(yú)孵化出膜。
10.如權(quán)利要求7所述的一種適用于鮭魚(yú)類全雌二倍體育種的方法，其特征在于步驟五中孵化積溫達(dá)到225度日，孵化溫度為11°C，發(fā)眼卵發(fā)育至310度日，稚魚(yú)孵化出膜。
全文摘要
一種適用于鮭魚(yú)類全雌二倍體育種的方法，它涉及適用于鮭魚(yú)類全雌二倍體育種的方法，本發(fā)明要解決現(xiàn)有不存在鮭魚(yú)類全雌二倍體育種方法的問(wèn)題。本發(fā)明中一種適用于鮭魚(yú)類全雌二倍體育種的方法通過(guò)如下步驟來(lái)實(shí)現(xiàn)一、人工方法分別采集魚(yú)卵和精液；二、用生理鹽水清洗魚(yú)卵并用人工精漿稀釋精液；三、魚(yú)卵受精四、孵化全雌二倍體；五、孵化得到稚魚(yú)。采用本發(fā)明方法進(jìn)行鮭魚(yú)全雌二倍體育種，全雌率可達(dá)85%，本發(fā)明可應(yīng)用于鮭魚(yú)類全雌二倍體育種生產(chǎn)領(lǐng)域。
文檔編號(hào)A01K61/00GK102715118SQ201210247240
公開(kāi)日2012年10月10日 申請(qǐng)日期2012年7月17日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月17日
發(fā)明者徐革鋒, 戶國(guó), 王炳謙, 谷偉 申請(qǐng)人:中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所