專利名稱：一種水產養(yǎng)殖用水體消毒劑及其使用方法
技術領域：
本發(fā)明涉及ー種消毒剤，尤其是ー種水產養(yǎng)殖池塘用消毒剤。
背景技術：
中國是水產養(yǎng)殖大國。據統(tǒng)計，我國水產養(yǎng)殖量占世界水產養(yǎng)殖總量的三分之ニ以上。然而，水產疾病問題一直是阻礙水產養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展的嚴重問題。據不完全統(tǒng)計，我國每年水產養(yǎng)殖病害發(fā)病率在50%以上，損失率高達20%，造成直接經濟損失達100億元以上。近年來，隨著高密度集約化養(yǎng)殖的發(fā)展，水產疾病日趨嚴重，從而給水產養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經濟損失，其中由病毒疾病造成的損失也日益增加。在水產病害防控過程中，通過水體消毒殺滅水體或養(yǎng)殖動物體表的病原微生物(病毒、細菌等)以改善水生動物生存環(huán)境是有效防控水產病害的重要技術手段。目前，常見的水產消毒劑主要有鹵素類(分別有含氯消毒劑、含溴消毒劑和含碘消毒剤)、酚醛醇類、酸堿類、季銨鹽類等幾大類，如中國專利CN03113687. 7 ( —種水產養(yǎng)殖用消毒劑組合物及其應用)、CN00115919. 4 (用于水產養(yǎng)殖業(yè) 的消毒劑)、CN200610015379. 9 ( ニ氧化氯消毒劑),CN200710028424. 9 (復合氧化胺絡合碘消毒劑)、CN200310104184. 8 (水產專用三氯異氰尿酸復合消毒劑)XN200310104181. 4 (水產用雙長鏈季銨絡合碘異噻唑啉酮復合消毒劑)、CN200610031925. 8( —種高效、低成本ニ氧化氯消毒劑的生產方法)、CN200810179622. X( —種新型聚六亞甲基胍復方消毒劑及制備方法)和CN201110185495. 6 (池塘水體復合消毒劑及其應用)等。就目前來看，現有的消毒劑還存在許多不足之處，如含氯消毒劑易受水體有機物和酸堿度變化的影響，且對器具有腐蝕作用，對魚體毒性也較大；季銨鹽類殺菌效果易受水質硬度影響；碘制劑效果易受光線、溫度等條件影響，且易揮發(fā)失效等(黃小麗和鄧永強，2004)。目前生產上所用的大部分消毒劑種類単一、制劑單一、多數是從人藥、獸藥和水處理劑等方面轉向而來，專門針對水產養(yǎng)殖池塘和水產養(yǎng)殖動物開發(fā)的消毒劑還很有限。此夕卜，隨著人們對水產品質量的要求越來越高，開發(fā)高效、低毒、無殘留、無公害的新型水產消毒劑也是大勢所趨。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是針對以上水體消毒劑存在的問題，提供一種既能有效殺滅水產養(yǎng)殖池塘中主要病原微生物，又對養(yǎng)殖動物無不良影響，且無殘留的水產池塘消毒劑產品。為達到以上技術目的，本發(fā)明提供了以下技術方案本發(fā)明提供的水產養(yǎng)殖池塘水體消毒劑的組分及重量百分比范圍分別是單過硫酸氫鉀，45-75% ;氨基磺酸，15-25% ;蘋果酸，3-15% ;氯化鈉，2-10% ;多聚偏磷酸鈉，1-3% ;黃連提取物，4-10%。制備時，將上述組成按重量百分比混合均勻即可。使用時,按照所需濃度配成水溶液使用。池塘徹底消毒時,其使用濃度為水體的1% ;表面消毒時，其使用濃度為O. 5% ;養(yǎng)殖池塘中細菌和病毒的常規(guī)控制時，其使用濃度為O. 5ppm ;疾病高發(fā)期使用時，其使用濃度為lppm。經實驗結果證明，本發(fā)明產品具有如下優(yōu)點(1)原料易得，配制簡單；(2)可有效預防多種水產病菌，包括細菌(弧菌)、病毒和真菌、用于各類海、淡水魚蝦養(yǎng)殖；(3)使用方便、作用迅速，作用方式多祥；(4)對養(yǎng)殖動物安全的，對環(huán)境友好。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發(fā)明作進ー步的詳述。本發(fā)明提供的水產池塘水體消毒剤，針對養(yǎng)殖蝦塘水化學和病原微生物生理特點，選擇高效的氧化劑單過硫酸氫鉀作為消毒劑主要成分可對細菌和病毒進行有效殺滅；氯化鈉在單過硫酸氫鉀的氧化作用下產生氯氣，并通過與氨基磺酸反應產生NHClSO3H，在水解作用下逐漸產生次氯酸進行水體的消毒反應，達到長久高效消毒的作用；且經消毒后，這些化學物質又轉變成氯化鈉，達到對水體和養(yǎng)殖動物無毒性、無殘留的效果；此外，蘋果酸作為ー種有機酸，添加到水體中可達到降低PH的作用，增強消毒劑的消毒效果；多聚偏·磷酸鈉是ー種表面活性劑，可使消毒活性成分有效深入到有機物中，達到高效殺滅病毒和細菌的作用；黃連提取物的有效成分是鹽酸小檗堿，經試驗驗證可有效殺滅水體中的病毒，且對養(yǎng)殖動物無毒副作用。實施例I :按照以下各組分重量百分比配制ー種水產養(yǎng)殖池塘用水體消毒劑單過硫酸氫鉀，75% ;氨基磺酸，15% ;蘋果酸，3% ;氯化鈉，2% ;多聚偏磷酸鈉，1% ;黃連提取物，4%。將上述組成按重量百分比混合均勻即可。使用以上實施例I所述的水體消毒剤，進行針對氣單胞菌殺滅效果的實驗。將消毒劑配制成濃度為O. 5ppm的消毒液；培養(yǎng)基為牛肉膏液體及固體培養(yǎng)基，pH7. 0±0. 2 ;所用試劑均為分析純。供試菌株為氣單胞菌標準菌株(Aeromonas hydrophila) ATCC7966 (購自中國農業(yè)微生物保藏中心)菌懸液的制備。將每株純培養(yǎng)氣單胞菌用單倍肉湯培養(yǎng)，經過增菌搖床過夜培養(yǎng)，取24h新鮮培養(yǎng)物加甘油置于_80°C冰箱中保存?zhèn)溆谩Ｔ囼炃癐天取出，保存于_80°C冰箱中的菌株，分別接種于營養(yǎng)瓊脂斜面，置28°C溫箱中培養(yǎng)24h后取出，用胰蛋白胨生理鹽水溶液(TPS)洗下菌苔，制成菌懸液，分別取各菌懸液與有機干擾物(3%牛血清白蛋白)以I : I混合后制備成試驗菌懸液,備用。配制試驗用菌懸液，濃度為5X 105 5X 106cfu/ml。將消毒劑用蒸懼水稀釋成濃度為O. lppm、0. 3ppm、0. 5ppm、lppm和2ppm的受試液，取各稀釋度受試液2. 5ml加入到含2. 5ml雙倍濃度營養(yǎng)肉湯的試管中。取O. Iml含菌量約為lX108cfu/ml的菌懸液接種于消毒劑的營養(yǎng)肉湯的試管中，作為試驗組樣本；以同樣方法接種于不含消毒劑的營養(yǎng)肉湯的試管，作為陽性對照組樣本；取2支只含營養(yǎng)肉湯的試管，作為陰性對照組樣本。將試驗組、陽性對照組及陰性對照組樣本放置28°C培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24h，觀察結果。通過細菌的生長與否，確定消毒劑抑制受試菌生長的最低濃度(MIC)。當陽性對照管有細菌生長(混濁)，陰性對照管無菌生長(透明)，試驗用菌懸液的作用濃度為5X105 5X106cfu/ml時，試驗組無菌生長的最高稀釋度所對應的抑菌劑濃度為該樣品對受試菌的MIC。最小殺菌濃度(MBC)的測定可在MIC測定試驗的基礎上進行。MIC測定試驗培養(yǎng)24h后，觀察結果，吸取試驗組無菌生長的各個稀釋度所對應的抗(抑)菌劑O. 5ml，加入含4. 5ml中和劑溶液管中，混勻，作用lOmin。吸取該最終樣液
2.5ml，加入到含2. 5ml雙倍濃度營養(yǎng)肉湯的試管中。同時設立陽性對照組、陰性對照組和中和劑對照組。將各試驗組和對照組放置28°C培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24h，觀察結果。當陽性對照管有細菌生長(混濁)，陰性對照管無菌生長(透明)，中和劑對照管無菌生長(透明)，試驗組無菌生長的最高稀釋度所對應的抗菌劑濃度為該樣品對受試菌的MBC。實驗結果顯示，本發(fā)明消毒劑濃度在O. 3ppm以上吋，即可起到抑制氣單胞菌的作用，當本發(fā)明消毒劑濃度在Ippm以上吋，即可起到殺滅氣單胞菌的作用。說明該發(fā)明的消毒劑在較低濃度條件下對致病菌有較好的殺滅效果。實施例2:按照以下各組分重量百分比配制ー種水產養(yǎng)殖池塘用水體消毒劑單過硫酸氫鉀，50% ;氨基磺酸，15% ;蘋果酸，15% ;氯化鈉，10% ;多聚偏磷酸鈉，3% ;黃連提取物，7%。 將上述組成按重量百分比混合均勻即可。使用實施例2所述的水體消毒剤，2010年5月在杭州蕭山某對蝦池塘進行對蝦養(yǎng)殖的實驗。對蝦放苗放養(yǎng)前15天，按照I %濃度配制消毒液對池塘進行全面消毒。然后按正常步驟投放對蝦苗種及進行養(yǎng)殖。放苗后每15天，按照O. 5ppm濃度配制消毒劑對蝦塘進行常規(guī)消毒。實驗共進行123天，實驗過程中對蝦生長正常，全程未發(fā)現病毒性疾病及對蝦猝死現象。實踐證明使用該消毒劑對提高對蝦養(yǎng)殖成功率，減少對蝦病害發(fā)生有非常有效的作用。使用實施例2所述的水體消毒剤，進行針對水霉菌抑制效果的實驗。挑取保藏于試管的水霉菌絲轉接于馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(即PDA，馬鈴薯塊200-300g、葡萄糖20g、瓊脂20g、水IOOOmL)平板上，25°C下培養(yǎng)48h。待鋪滿整個培養(yǎng)皿后，用O. Olmol/L的PBS緩沖液洗滌3次，經4層紗布過濾，加入pH值為7. 4的M199細胞培養(yǎng)液，分別調整孢子濃度為1*104、1*106、1*108個/mL，待用。以不同梯度濃度的消毒劑2mL加至18mL，經溶化，56°C的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基使之均勻，迅速傾倒于培養(yǎng)皿中待凝固后用于實驗，即藥物PDA平板濃度為原濃度的1/10。采用多點接種方法，每點接種IuL水霉孢子菌懸液于凝固的培養(yǎng)基上。設空白對照組，25°C下培養(yǎng)5d。孵育期內每24h觀察I次，肉眼判定無菌落生長的培養(yǎng)皿內的最低藥物濃度為MIC (最低抑菌濃度)。每個濃度設2個對照，同時設不加藥液的空白PDA培養(yǎng)基為對照。將經馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)48h后，鋪滿平板的水霉用無菌刀片切成約l、2、3cm2的小塊，將切好的水霉小塊放入盛有各種濃度消毒劑倍釋液的試管中浸泡O. 17、0.5、l、2h。用無菌鑷子取出浸泡過的水霉小塊置于馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上，25°C下培養(yǎng)觀察5d。孵育期每24h觀察一次，肉眼判定無水霉菌落生長的，表示此種消毒劑在該濃度該作用時間下對水霉具有殺滅作用。每個濃度設2個對照，同時設經生理鹽水浸泡過的水霉塊空白對照。實驗結構顯示濃度為O. 5ppm以上的消毒劑溶液對水霉病菌絲有明顯的抑制作用。實施例3 按照以下各組分重量百分比配制ー種水產養(yǎng)殖池塘用水體消毒劑單過硫酸氫鉀，45% ;氨基磺酸，25% ;蘋果酸，15% ;氯化鈉，2% ;多聚偏磷酸鈉，3% ;黃連提取物，10%。
將上述組成按重量百分比混合均勻即可。使用實施例3所述的水體消毒劑，進行針對草魚呼腸孤病毒(Grass carpreovirus,GCRV)殺滅效果的實驗。草魚呼腸孤病毒用草魚腎臟(CIK)細胞培養(yǎng)，維持液為無血清DMEM培養(yǎng)基(含TPCK處理胰酶2g/ml、2%胎牛血清)。按Reed-Meuench計算病毒對細胞半數感染劑量(TCID50)。用維持液2倍系列稀釋消毒劑12個稀釋度，加入到CIK細胞96孔培養(yǎng)板中，26°培養(yǎng)箱培養(yǎng)，每天觀察細胞病變。確定對細胞無毒性的消毒劑最高稀釋度。用維持液2倍系列稀釋I : 2、1 : 4、1 : 8、1 : 16、1 : 32五個濃度，共稀釋三組。消毒劑每組的5個濃度分別與草魚呼腸孤病毒(100TCID50/0. Iml)按9 : I的比例混合作用，每組作用時間不同，分別5min、10min、30min。作用一定時間后,用維持液做10倍系列稀釋，加入到96孔CIK細胞板中滴定樣品中的殘留病毒量，每個稀釋度3孔，26°培養(yǎng)箱培養(yǎng)3d，觀察細胞病變。根據Reed-Meuench法確定消毒劑每一濃度不同時間的病毒感染滴度(TCID50)。在測試消毒劑滅活病毒實驗的同時，測試50%乙醇滅活病毒的作用，方 法與消毒劑的測試方法相同。試驗結果顯示，O. 5ppm及以上濃度的消毒劑對草魚呼腸孤病毒(Grass carp reovirus, GCRV)有明顯的殺滅效果。2倍系列稀釋的消毒劑與草魚呼腸孤病毒作用5min、10min和30min，觀察細胞病變判斷指標確定各組的病毒感染滴度。計算消毒劑對草魚呼腸孤病毒的平均滅活對數值，確定消毒劑實驗室消毒合格的濃度和作用時間。結果顯示消毒劑作用于草魚腎(CIK)細胞的最大無毒濃度為I : 200。I : 2、1 : 4和I : 8稀釋的消毒劑與草魚呼腸孤病毒作用5min、IOmin和30min的平均滅活對數值>4.00。實驗結果表明該消毒劑I : 2、I 4、I 8與病毒作用5min后可以100%殺草魚呼腸孤病毒。上述實施例中，上述黃連提取物可以選擇亳州市乾元動物藥業(yè)有限責任公司生產的類似產品(含鹽酸小檗堿30% )。實驗結果顯示，本發(fā)明提供的水產養(yǎng)殖池塘水體消毒劑針對性強，具有高效、低毒、無殘留、無公害的特點。以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內，所做的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發(fā)明保護的范圍之內。
權利要求
1.一種水產養(yǎng)殖池塘水體消毒劑，各組分按重量百分比包括 單過硫酸氫鉀，45-75% ； 氨基磺酸，15-25% ； 蘋果酸，3-15% ； 氯化鈉，2-10% ； 多聚偏磷酸鈉，1-3% ； 黃連提取物，4-10%。
2.根據權利要求I所述的水產養(yǎng)殖池塘水體消毒劑，其特征在于，各組分按重量百分比包括 單過硫酸氫鉀，75% ； 氨基磺酸，15% ； 蘋果酸，3% ； 氯化鈉，2% ； 多聚偏磷酸鈉，I % ; 黃連提取物，4%。
3.根據權利要求I所述的水產養(yǎng)殖池塘水體消毒劑，其特征在于，各組分按重量百分比包括 單過硫酸氫鉀，50% ； 氨基磺酸，15% ； 蘋果酸，15% ； 氯化鈉，10% ； 多聚偏磷酸鈉，3% ； 黃連提取物，7%。
4.根據權利要求I所述的水產養(yǎng)殖池塘水體消毒劑，其特征在于，各組分按重量百分比包括 單過硫酸氫鉀，45% ； 氨基磺酸，25% ； 蘋果酸，15% ； 氯化鈉，2% ； 多聚偏磷酸鈉，3% ； 黃連提取物，10%。
5.權利要求1-4所述的水產養(yǎng)殖池塘水體消毒劑的使用方法，其特征在于，池塘徹底消毒時，其使用濃度為水體的1%。
6.權利要求1-4所述的水產養(yǎng)殖池塘水體消毒劑的使用方法，其特征在于，表面消毒時，其使用濃度為水體的O. 5%。
7.權利要求1-4所述的水產養(yǎng)殖池塘水體消毒劑的使用方法，其特征在于，養(yǎng)殖池塘中細菌和病毒的常規(guī)控制時，其使用濃度為O. 5ppm。
8.權利要求1-4所述的水產養(yǎng)殖池塘水體消毒劑的使用方法，其特征在于，疾病高發(fā)期使用時，其使用濃度為lppm。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種水產養(yǎng)殖池塘用消毒劑。本發(fā)明提供的水產養(yǎng)殖池塘水體消毒劑各組分按重量百分比包括單過硫酸氫鉀，45-75％；氨基磺酸，15-25％；蘋果酸，3-15％；氯化鈉，2-10％；多聚偏磷酸鈉，1-3％；黃連提取物，4-10％。本發(fā)明提供的水產養(yǎng)殖池塘水體消毒劑具有高效、低毒、無殘留、無公害的特點。
文檔編號A01N59/00GK102835424SQ201210363610
公開日2012年12月26日 申請日期2012年9月25日 優(yōu)先權日2012年9月25日
發(fā)明者許丹, 呂利群, 沈曉寶 申請人:上海海洋大學