專(zhuān)利名稱(chēng)：一種親本青蝦與秋繁苗的區(qū)分方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種親本青蝦與秋繁苗的區(qū)分方法，具體涉及一種通過(guò)中性紅活體染色方法以區(qū)分親本青蝦與秋繁苗的方法，屬于漁業(yè)繁殖技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
青奸，學(xué)名日本沼奸(Macrobrachium nipponense)，隸屬十足目(Decapoda),長(zhǎng)臂蟲(chóng)下科(Palaemonidae)、沼奸屬(Macrobrachium),廣泛分布于全國(guó)各地，是我國(guó)重要的淡水養(yǎng)殖蝦類(lèi)。近年來(lái)，隨著養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的不斷擴(kuò)大，青蝦種質(zhì)資源退化嚴(yán)重，規(guī)格小、性早熟等現(xiàn)象成為制約青蝦養(yǎng)殖業(yè)可持續(xù)發(fā)展的關(guān)鍵問(wèn)題。青蝦性成熟早，繁殖能力強(qiáng)，每年的4-9月份均可產(chǎn)卵繁殖。秋季抱卵，親蝦日常所攝食的營(yíng)養(yǎng)大部分用于胚胎發(fā)育，生長(zhǎng)速度自然減慢；再者，產(chǎn)生的大量秋繁苗與親蝦爭(zhēng)食、爭(zhēng)空間，必然會(huì)相互制約生長(zhǎng)，嚴(yán)重影響青蝦養(yǎng)殖的經(jīng)濟(jì)效益。并且，秋繁苗對(duì)青蝦種質(zhì)資源的保護(hù)有很多不利的影響，很大程度上阻礙了青蝦養(yǎng)殖的持續(xù)、健康發(fā)展。青蝦苗種生產(chǎn)多半是單家獨(dú)戶(hù)自繁自育，種蝦未經(jīng)選育，有些養(yǎng)殖戶(hù)采取一次性放苗、全年捕撈或多年捕撈，造成青蝦三代同塘，近親繁殖的概率增大，青蝦種質(zhì)的退化現(xiàn)象已逐步明顯，具體表現(xiàn)為個(gè)體偏小，懷卵量減少，性成熟提早，抗病力下降等。另一方面，青蝦苗種的無(wú)序流動(dòng)，種質(zhì)混雜，逃苗入河對(duì)天然資源庫(kù)的污染等，蝦苗的雜化是不言而喻的，種質(zhì)的退化和雜化，將導(dǎo)致苗種生產(chǎn)的惡性循環(huán)，苗種的質(zhì)量難以保證。解決青蝦種質(zhì)資源退化的關(guān)鍵是找出一個(gè)合理的辦法區(qū)分青蝦親本與秋繁苗，減少近親繁殖的概率，以達(dá)到青蝦種質(zhì)資源的保護(hù)，實(shí)現(xiàn)青蝦養(yǎng)殖業(yè)的持續(xù)，健康發(fā)展?；铙w染色(vital staining)—般是選用無(wú)毒或毒性很小的染料，在不影響細(xì)胞的正常生命活動(dòng)的前提下而使活細(xì)胞的某些結(jié)構(gòu)著色的一種實(shí)驗(yàn)方法，最早進(jìn)行活體染色的是Paul Ehrlich (1885)他把瞰切下的新鮮組織浸泡在亞甲基藍(lán)(美藍(lán))溶液中，再用顯微鏡來(lái)觀察尚處在生活狀態(tài)下的活細(xì)胞結(jié)構(gòu)。中性紅(Neutral red)，是細(xì)胞活體染色和酸堿性指示劑的一種堿性吩嗪染料。中性紅是一種弱堿性PH指示劑在中性或微堿性環(huán)境中，植物的活細(xì)胞能大量吸收中性紅并向液泡中排泌，由于液泡在一般情況下呈酸性反應(yīng)，因此，進(jìn)入液泡的中性紅便解離出大量陽(yáng)離子而呈現(xiàn)櫻桃紅色，在這種情況下，原生質(zhì)和細(xì)胞壁一般不著色；死細(xì)胞由于原生質(zhì)變性凝固，細(xì)胞液不能維持在液泡內(nèi)，因此，用中性紅染色后，不產(chǎn)生液泡著色現(xiàn)象，相反，中性紅的陽(yáng)離子，卻與帶有一定負(fù)電荷的原生質(zhì)及細(xì)胞核結(jié)合，而使原生質(zhì)與細(xì)胞核染色。中性紅無(wú)毒，常做活體染色的染料，用來(lái)染原生動(dòng)物和顯示動(dòng)植物組織中活細(xì)胞的內(nèi)含物等。陳久的中性紅水溶液，用作顯示尼爾體的常用染料。因此，開(kāi)展中性紅作為活體染料以區(qū)分親本青蝦與秋繁苗的研究，對(duì)與減少近親繁殖的概率，以達(dá)到青蝦種質(zhì)資源的保護(hù)，實(shí)現(xiàn)青蝦養(yǎng)殖業(yè)的持續(xù)，健康發(fā)展起重要的作用。中性紅是弱堿性染料，呈紅色粉末狀，能溶于水(溶解度4%)和酒精(溶解度
I.8%)。它的堿性溶液中呈現(xiàn)黃色，在強(qiáng)堿性溶液中呈藍(lán)色，而在弱酸性溶液中呈紅色，所以能用作指示劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服上述不足之處，提供一種青蝦中性紅活體染色方法，并提供最適的染色時(shí)間及染色濃度，以達(dá)到穩(wěn)定的染色并不影響健康青蝦的活力。利用本發(fā)明提供的中性紅最適染色時(shí)間及染色濃度可區(qū)分青蝦親本與秋繁苗，對(duì)實(shí)現(xiàn)青蝦家系選育提供理論基礎(chǔ)，減少近親繁殖的概率，以達(dá)到青蝦種質(zhì)資源的保護(hù)，實(shí)現(xiàn)青蝦養(yǎng)殖業(yè)的持續(xù)，健康發(fā)展，為青蝦良種繁育奠定理論基礎(chǔ)。按照本發(fā)明提供的技術(shù)方案，一種親本青蝦與秋繁苗的區(qū)分方法，步驟為
(1)中性紅溶液的配置取中性紅粉末，倒入試驗(yàn)缸，邊攪拌邊注入自來(lái)水，注水速度為40 60 dm3/h，攪拌速度為10(T200r/min，配制成中性紅水質(zhì)量比為I 4000 7000的中性紅溶液；
(2)青蝦飼養(yǎng)取健康的青蝦在步驟(I)配置的中性紅溶液中飼養(yǎng)6tT5d，飼養(yǎng)過(guò)程中不斷充氧并喂食，每天喂食兩遍。步驟(I)中注水速度為50 dm3/h,攪拌速度為150 r/min。所述中性紅水質(zhì)量比為I 4000 5000。所述中性紅水質(zhì)量比為I : 4000、I 4500或I : 5000。步驟(2)所述飼養(yǎng)時(shí)間為5d，溶氧量為5 7 mg/L。所述溶氧量為6. 5 mg/L。利用中性紅作為活性染色劑安全的證明見(jiàn)實(shí)質(zhì)審查參考資料I。本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明以中性紅為材料,成功摸索出了中性紅青蝦活體染色的最適染料濃度及最適染色時(shí)間，獲得了一種效果較好的青蝦活體染色方法，可用于區(qū)分青蝦親本及秋繁苗，減少近親繁殖的概率，以達(dá)到青蝦種質(zhì)資源的保護(hù)，實(shí)現(xiàn)青蝦養(yǎng)殖業(yè)的持續(xù)，健康發(fā)展，為青蝦良種繁育奠定理論基礎(chǔ)并促進(jìn)其他活體染料在青蝦活體染色中的應(yīng)用。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明公開(kāi)了中性紅青蝦活體染色的最適染料濃度及染色時(shí)間。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類(lèi)似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法及應(yīng)用已經(jīng)通過(guò)較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對(duì)本文所述的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來(lái)實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。實(shí)施例I
(1)中性紅溶液的配置取中性紅粉末,倒入試驗(yàn)缸,邊攪拌邊注入自來(lái)水,注水速度為4(T60 dm3/h，攪拌速度為10(T200r/min ;配制中性紅水質(zhì)量比為1:4000、1:4500、1:5000、1:6000及1:7000濃度的中性紅染料以確定最佳的中性紅染料濃度；
(2)青蝦飼養(yǎng)取健康的青蝦在步驟(I)配置的中性紅溶液中飼養(yǎng)染色，在染色過(guò)程中仍不斷充氧并喂食；不同時(shí)間梯度的青蝦中性紅活體染色時(shí)間為6小時(shí)、I天、2天、3天及5天；飼養(yǎng)過(guò)程中不斷充氧并喂食(溶癢量為6. 5mg/L)，每天喂食2遍；
實(shí)驗(yàn)青奸在1:4000、1:4500及1:5000濃度的中性紅染料中染色5天，實(shí)驗(yàn)青奸具有較好的染色效果，全身呈明顯紅色；撈出后清水中飼養(yǎng)2個(gè)后，紅色仍清晰可見(jiàn)，且實(shí)驗(yàn)青蝦活力較好，可用于區(qū)分親本青蝦與秋繁苗的研究；但相對(duì)來(lái)說(shuō)實(shí)驗(yàn)青蝦在1:4500染料濃度中的染色效果更好。其他染色時(shí)間段的實(shí)驗(yàn)青蝦在清水中飼養(yǎng)一段時(shí)間后均出現(xiàn)褪色現(xiàn)象，直至與普通青蝦無(wú)明顯差別為止，無(wú)法應(yīng)用于區(qū)分親本青蝦與秋繁苗的研究。在1:6000及1:7000濃度的中性紅染料中染色的所有實(shí)驗(yàn)青蝦，無(wú)論染色時(shí)間長(zhǎng)短，在清水中實(shí)驗(yàn)一段時(shí)間后均出現(xiàn)褪色現(xiàn)象，直至與普通青蝦無(wú)明顯差別為止，無(wú)法應(yīng)用于區(qū)分親本青蝦與秋繁苗的研究。固最適的青奸中性紅染色染料濃度為1:4000,1:4500及1:5000也可用于親本青蝦與秋繁苗的區(qū)分；最適的中性紅染料染色時(shí)間為5天。實(shí)驗(yàn)青蝦在此染料濃度及染色時(shí)間內(nèi)染色可獲得較為穩(wěn)定的染色效果，可用開(kāi)展區(qū)分親本青蝦與秋繁苗的研究，對(duì)與減少近親繁殖的概率，以達(dá)到青蝦種質(zhì)資源的保護(hù)，實(shí)現(xiàn)青蝦養(yǎng)殖業(yè)的持續(xù)，健康發(fā)展起重要的作用。實(shí)施例2
(I)中性紅溶液的配置取中性紅粉末,倒入試驗(yàn)缸,邊攪拌邊注入自來(lái)水,注水速度為40 60 dm3/h，攪拌速度為10(T200r/min，配制成中性紅水質(zhì)量比為1:4000,1 ;4500、
1:5000、1:6000及1:7000濃度的中性紅染料。(2)青蝦飼養(yǎng)取健康的青蝦在步驟(I)配置的中性紅溶液中飼養(yǎng)，飼養(yǎng)過(guò)程中不斷充氧并喂食，每天喂食兩遍。青蝦中性紅活體染色挑取健康的青蝦，飼養(yǎng)于已配制而成的每個(gè)不同濃度梯度(每個(gè)濃度梯度15只)的中性紅染液中。青蝦不同時(shí)間梯度的染色實(shí)驗(yàn)分別于6小時(shí)，I天，2天，3天及5天從每個(gè)不同濃度梯度的中性紅然也中取出3只蝦，飼養(yǎng)于清水中并充氧(溶癢量為6. 5mg/L)。每天進(jìn)行換水并投喂螺絲，標(biāo)準(zhǔn)為青蝦不餓，并每天記錄活體染色青蝦的健康，蛻皮及褪色現(xiàn)象。青蝦最適的中性紅活體染色濃度為1:4000，1:4500及1:5000的中性紅染料濃度也可獲得較為穩(wěn)定的染色效果；最適的中性紅活體染色時(shí)間為5天。實(shí)驗(yàn)青蝦在此染料濃度及染色時(shí)間內(nèi)染色可獲得較為穩(wěn)定的染色效果，可用開(kāi)展區(qū)分親本青蝦與秋繁苗的研究，對(duì)與減少近親繁殖的概率，以達(dá)到青蝦種質(zhì)資源的保護(hù)，實(shí)現(xiàn)青蝦養(yǎng)殖業(yè)的持續(xù)，健康發(fā)展起重要的作用。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。實(shí)施例3 —種親本青蝦與秋繁苗的區(qū)分方法
(1)中性紅溶液的配置取中性紅粉末，倒入試驗(yàn)缸，邊攪拌邊注入自來(lái)水，注水速度為50 dm3/h，攪拌速度為150r/min，配制成中性紅水質(zhì)量比為I : 4000的中性紅溶液；
(2)青蝦飼養(yǎng)取健康的青蝦在步驟(I)配置的中性紅溶液中飼養(yǎng)5d，飼養(yǎng)過(guò)程中不斷充氧并喂食，每天喂食兩遍；溶氧量為6. 5 mg/L ο
權(quán)利要求
1.一種親本青蝦與秋繁苗的區(qū)分方法，其特征是步驟為 (1)中性紅溶液的配置取中性紅粉末，倒入試驗(yàn)缸，邊攪拌邊注入自來(lái)水，注水速度為40 60 dm3/h，攪拌速度為10(T200r/min，配制成中性紅水質(zhì)量比為I 4000 7000的中性紅溶液； (2)青蝦飼養(yǎng)取健康的青蝦在步驟(I)配置的中性紅溶液中飼養(yǎng)6tT5d，飼養(yǎng)過(guò)程中不斷充氧并喂食，每天喂食兩遍。
2.如權(quán)利要求I所述親本青蝦與秋繁苗的區(qū)分方法，其特征是步驟(I)中注水速度為50 dm3/h，攬拌速度為 150 r/min。
3.如權(quán)利要求f2之一所述親本青蝦與秋繁苗的區(qū)分方法，其特征是所述中性紅水質(zhì)量比為I : 4000 5000。
4.如權(quán)利要求3所述親本青蝦與秋繁苗的區(qū)分方法，其特征是所述中性紅水質(zhì)量比為 I 4000、I 4500 或 I 5000。
5.如權(quán)利要求Γ4之一所述親本青蝦與秋繁苗的區(qū)分方法，其特征是步驟(2)所述飼養(yǎng)時(shí)間為5d，溶氧量為5 7 mg/L。
6.如權(quán)利要求5所述親本青蝦與秋繁苗的區(qū)分方法，其特征是所述溶氧量為6.5 mg/L0
全文摘要
本發(fā)明涉及一種親本青蝦與秋繁苗的區(qū)分方法，具體涉及一種通過(guò)中性紅活體染色方法以區(qū)分親本青蝦與秋繁苗的方法，屬于漁業(yè)繁殖技術(shù)領(lǐng)域。其以中性紅為材料，成功摸索出了中性紅青蝦活體染色的最適染料濃度及最適染色時(shí)間，獲得了一種效果較好的青蝦活體染色方法，可用于區(qū)分青蝦親本及秋繁苗，減少近親繁殖的概率，以達(dá)到青蝦種質(zhì)資源的保護(hù)，實(shí)現(xiàn)青蝦養(yǎng)殖業(yè)的持續(xù)，健康發(fā)展，為青蝦良種繁育奠定理論基礎(chǔ)并促進(jìn)其他活體染料在青蝦活體染色中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A01K61/00GK102919171SQ20121043275
公開(kāi)日2013年2月13日 申請(qǐng)日期2012年11月3日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月3日
發(fā)明者金舒博, 傅洪拓, 喬慧, 龔永生, 蔣速飛, 熊貽偉 申請(qǐng)人:中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心