專利名稱：一種蠟狀芽孢桿菌及其應用的制作方法
技術領域：
本發明屬于水體凈化微生物技術領域，具體涉及一株蠟狀芽孢桿菌及其應用。
背景技術：
近年來，我國的水產養殖業蓬勃發展，然而養殖品種的老化和退化、水產動物疾病的頻繁發生以及養殖水體環境的日益惡化，這三大問題已經成為阻礙我國水產養殖業發展的瓶頸。尤其是養殖水體環境的日益惡化，給養殖業帶來了巨大的經濟損失。以投餌為主的養殖模式，造成殘餌、糞便、死亡生物的殘體、養殖池塘底物的沉積物、氮、磷等富營養因子排入水體，使得養殖水體中的化學需氧量、生物需氧量嚴重超標，水體環境日益惡化，導致水產動物疾病頻繁發生。傳統的機械清淤、化學降解、換水等養殖環境凈化方法，有凈化不徹底、易產生二次污染、危害養殖功能等缺點。利用微生物凈化環境可以避免上述缺點，因而利用微生物解決水產養殖的水質問題成為人們的研究熱點。
芽孢桿菌是土壤中的優勢種群，能強烈地分解碳系、氮系、磷系、硫系污染物，并能分解蛋白質和復雜多糖，對水溶性有機物的分解也有重要的作用，同時可以與養殖環境中的有害藻類及水產致病菌競爭，形成優勢種群，抑制有害藻類及水產致病菌。由于它的特性與功能優于光合細菌而有望成為光合細菌的替代品，已成為當前國際凈水界研究的熱點課題。

發明內容
本發明的目的是提供一株新型蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)，該菌株具有明顯的凈化水體的作用，可廣泛應用于水產養殖行業，減少抗生素的使用，從而減輕水體污染，增加養殖戶的效益。本發明一方面涉及一株臘狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)SC2,已于2010年5月13日保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心(簡稱CGMCC)，保藏編號為=CGMCC NO. 3836，該菌株具有明顯的凈化水體的功能。本發明另一方面涉及一種蠟狀芽孢桿菌微生物制劑，其以上述蠟狀芽孢桿菌為菌種，通過以下步驟制備得到(I)制備斜面菌種在營養瓊脂培養基上劃線接種上述蠟狀芽孢桿菌，370C，培養12h ；(2)制備固體種子將步驟(I)制備的斜面菌種接種至新鮮營養瓊脂斜面，37°C，培養12h ；(3)制備液體種子將步驟(2)制備的固體種子從斜面洗下接種至種子罐，37°C，培養12h ；(4)發酵培養將種子罐中的種子接種到5噸發酵罐中培養，接種量5%，37°C，150rpm，培養 20h ；(5)壓濾將發酵液升溫至50°C，加入固體氯化鈣和磷酸氫二鈉各0.3%，攪拌30min后轉入儲罐,加入3%娃藻土,板框壓濾；(5)烘干將濾餅在沸騰干燥機中干燥，進風口溫度90°C，出風口溫度50°C，干燥15s,；(7)粉碎干燥的菌體顆粒粉碎后，過40目篩，即得到蠟狀芽孢桿菌制劑。上述蠟狀芽孢桿菌制劑在水產養殖中的應用，用于凈化水體。本發明篩選到的蠟狀芽孢桿菌具有明顯凈化水體的作用，該菌處理污水3天后，污水中氨氮物質、亞硝酸態氮和COD的降解率分別為70. 15%、94. 12%和43. 12%，能穩定水體PH值，提高水體的溶氧量，增強水產動物的免疫力，增強抗病能力，促進水產養殖行業的健康發展。
具體實施例方式本發明所應用的試劑可以應用任一款市售產品，下面結合具體實施例對本發明的方法進行詳細描述。實施例I菌株的篩選與鑒定I、篩選(I)從青島市嶗山區沙子口水產養殖戶的養殖水池中取水樣50mL，80°C水浴15min，殺滅非芽孢菌；·(2)稀釋后，將水樣涂布于營養瓊脂培養基(蛋白胨10. Og/L，牛肉浸粉3. Og/L，氯化鈉 5. Og/L,瓊脂 15. Og/L)平板，370C，培養 24h ；(3)挑選典型芽孢桿菌菌落在營養瓊脂培養基平板上劃線，37°C，培養24h ；2、鑒定通過菌株形態觀察和理化指標分析，挑選出20株菌株進行實驗室內的養殖廢水處理實驗，實驗水體為IOOOmL,處理前水中氨氮為0. 966±0. 017mg/L、亞硝酸態氮為
0.815±0. 102mg/L 和 COD 為 11. 352±0· 873mg/L，實驗接菌量為 1%，28°C靜置培養 72h，處理后的水質指標如表I。表120株芽孢桿菌處理養殖廢水后的水質參數
菌株IiS (mg/L) i.E 硝氮(mg/L) COD (mg/L)
SCI 0.544±0.丨020.3Π ±0.076IU02± 1.212SC2 .288 士 0.023 0.048土0,010 6.457±l).854_SC3_0.321+ 0.078 0.262 土 0.007 7.232 土 0.64權利要求
1.一株蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus) SC2，其保藏編號為CGMCCNO. 3836。
2.權利要求I所述的蠟狀芽孢桿菌在凈化水體中的應用。
3.—種微生物制劑，所述的微生物制劑是以權利要求I所述的蠟狀芽孢桿菌為菌種，通過以下步驟制備得到(1)制備斜面菌種在營養瓊脂培養基上劃線接種蠟狀芽孢桿菌，37°C，培養12h； (2)制備固體種子將步驟(I)制備的斜面菌種接種至新鮮營養瓊脂斜面，37°C，培養12h ； (3)制備液體種子將步驟(2)制備的固體種子從斜面洗下接種至種子罐，37°C，培養12h ； (4)發酵培養將種子罐中的種子接種到5噸發酵罐中培養，接種量5%，37°C，150rpm，培養20h ； (5)壓濾將發酵液升溫至50°C，加入固體氯化鈣和磷酸氫二鈉各O.3%，攪拌30min后轉入儲罐，加入3%硅藻土，板框壓濾； (5)烘干將濾餅在沸騰干燥機中干燥，進風口溫度90°C，出風口溫度50°C，干燥15s，； (7)粉碎干燥的菌體顆粒粉碎后，過40目篩，即制得微生物制劑。
4.權利要求3所述的微生物制劑在水產養殖中的應用。
5.如權利要求4所述的應用，其特征在于所述的微生物制劑在凈化水體中的應用。
6.如權利要求4所述的應用，其特征在于所述微生物制劑作為飼料添加劑的應用。
全文摘要
本發明涉及一株蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)SC2，其保藏編號為CGMCC NO.3836，該菌株具有明顯的凈化水體的功能。本發明篩選到的蠟狀芽孢桿菌具有明顯凈化水體的作用，該菌處理污水3天后，污水中氨氮物質、亞硝酸態氮和COD的降解率分別為70.15%、94.12%和43.12%，能穩定水體pH值，提高水體的溶氧量，增強水產動物的免疫力，增強抗病能力，促進水產養殖行業的健康發展。
文檔編號A23K1/16GK102899277SQ201210439280
公開日2013年1月30日 申請日期2012年11月6日 優先權日2012年11月6日
發明者彭虹旎, 王增元, 王霽昀, 陳營 申請人:青島蔚藍生物集團有限公司