專利名稱：崇左金花茶組培繁殖方法及其誘導培養基的制作方法
技術領域：
本發明涉及植物組織培養繁殖領域，尤其是一種崇左金花茶組培繁殖方法及其誘導培養基。
背景技術：
崇左金花茶(C.chungtsoensis S. Y. Liang et L. D. Huang),常綠灌木，是最近新發現的金花茶珍稀品種，是繼杜鵑紅山茶之后，世界上發現的第二個四季開花的金花茶品種，它不但在金花茶族中顏色最鮮黃，而且全年不斷開花。崇左金花茶僅在廣西崇左的局部石灰巖低山地區有少量分布。該種與朽1檬黃金花茶近似，不同之處在于花大深黃色，花瓣 13-16瓣，四季開花。崇左金花茶花朵分布均勻，枝條稠密，全光照條件下可正常生長，具有很高的觀賞價值，在家庭盆栽、園林美化以及茶花育種方面具有廣闊的應用前景。崇左金花茶的自然分布范圍狹窄、數量有限，由于枝條細弱、扦插生根率低，無性繁殖困難，難以滿足園林花卉市場需求。迄今為止，國內外雖有一些關于金花茶組植物組織培養的報道，但未見關于崇 左金花茶的組培研究報道。發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種崇左金花茶組培繁殖方法，以有效利用現有資源快速繁殖崇左金花茶，保護這一世界上稀有的珍貴植物種質資源。
本發明要解決的另一技術問題是提供用于上述崇左金花茶組培繁殖方法的叢生芽誘導培養基和生根誘導培養基。
為解決上述技術問題，本發明采用如下技術方案崇左金花茶組培繁殖方法，將崇左金花茶的外植體接種到叢生芽誘導培養基中進行培養，待叢生芽長至3cm時，將叢生芽分割成小叢或單苗接種到生根誘導培養基中進行培養；
上述叢生芽誘導培養基以改良MS培養基為基礎，含有下列濃度的物質
6-節氛基嘿呤2 4mg/L 3_ Π引噪乙酸O. 6 O. 8mg/L
其pH 值為 4. 5 5. 8 ;
上述生根誘導培養基以1/2改良MS培養基為基礎，含有下列濃度的物質
Π引哚丁酸 O. 6 I. 2mg/L 或奈乙酸 O. 6 I. 2mg/L。
外植體為幼嫩種子。
幼嫩種子先經洗凈并用O. I % HgCl2溶液消毒處理20 30min，再用O. 2% HgCl2 溶液消毒處理15 20min。
培養均在溫度25±2°C、光照時間12 14h. cf1、光照強度20001x的條件下進行。
崇左金花茶叢生芽誘導培養基，以改良MS培養基為基礎,含有下列濃度的物質
6_節氛基嘿呤2 4mg/L 3-Π引噪乙酸O. 6 O. 8mg/L。
崇左金花茶叢生芽誘導培養基的pH值為4. 5 5. 8。
上述改良MS 培養基含有成分為=Ca(NO3)2 · 4H20 300mg/L;MgSO4 · 7H20 370mg/L ;KN031900mg/L; NH4NO3 1650mg/L; KH2PO4 340mg/L; Na2 · EDTA 37. 3mg/L; FeSO4 · 7H20 27. 8mg/L;KI0. 83mg/L; H3BO3 0. 63mg/L; MnSO4 · 4H20 22. 3mg/L; ZnSO4 · 7H20 8. 6mg/ L; Na2Mo · 4H20 0. 025mg/L; CuSO4 · 5H20 0. 025mg/L; CoCl2 · 6H20 0. 003mg/L;肌醇 50mg/L; 煙酸0. 5mg/L;鹽酸批卩多酸0. 5mg/L;鹽酸硫胺素0. 5mg/L;甘氨酸2mg/L。
崇左金花生根誘導培養基，以1/2改良MS培養基為基礎,含有下列濃度的物質
Π引哚丁酸 O. 6 I. 2mg/L 或奈乙酸 O. 6 I. 2mg/L。
上述1/2 改良 MS 培養基含有成分為=Ca(NO3)2 ·4Η20 150mg/L; MgSO4 ·7Η20 185mg/ L ;KN039 50mg/L; NH4NO3 825mg/L; KH2PO4 170mg/L; Na2 .EDTA 37. 3mg/L; FeSO4 *7H20 27. 8mg/ L;KI0. 83mg/L; H3BO3 0. 63mg/L; MnSO4 · 4H20 22. 3mg/L; ZnSO4 · 7H20 8. 6mg/L; Na2Mo · 4H200.025mg/L; CuSO4 · 5H20 0. 025mg/L; CoCl2 · 6H20 0. 003mg/L;肌醇 50mg/L;煙酸 0. 5mg/L; 鹽酸批卩多酸0. 5mg/L;鹽酸硫胺素0. 5mg/L;甘氨酸2mg/L。
本發明采用改良MS+6-芐氨基嘌呤(6-BA)+3_吲哚乙酸(IAA)作為崇左金花茶叢生芽誘導培養基，這兩種生長激素組合在合適的濃度和弱酸性的環境下，可激活崇左金花茶體細胞內的作用酶，促進崇左金花茶外植體的萌發和生長，培養55天就能形成粗壯的叢生芽，擴繁達20倍。本發明還采用1/2改良MS+吲哚丁酸(IBA)或1/2改良MS+奈乙酸 (NAA)作為生根誘導培養基，能有效地促進崇左金花茶單苗生根形成新植株。應用上述三種誘導培養基的崇左金花茶組培繁殖方法，可快速有效地繁殖崇左金花茶，解決了其野生資源日益減少和自然繁殖率低的問題，有效地保護了這一世界上稀有的珍貴植物種質資源。
具體實施方式
實施例I
(I)叢生芽誘導
取崇左金花茶幼嫩種子，先用洗潔精清洗表面污垢，接著流水沖洗30min，然后在超凈工作臺上用75%乙醇處理30s，無菌水沖洗2次，再用O. IHgCl2消毒20min，無菌水沖洗5次；再用O. 2% HgCl2消毒15min,無菌水沖洗6次；用無菌濾紙吸干水分,挑出乳白色種胚植于用改良MS添加6-BA 4mg/L、IAA O. 6mg/L, pH值調節至5. O的培養基上，在溫度為25土 1°C，光照時間為12h. cf1，光照強度20001x的條件下，培養65天，平均得到15. 2倍的叢生芽，叢生芽較粗壯，綠色，生長稍緩慢。
(2)生根誘導
待叢生芽生長至3 4cm時，將叢生芽分割成小叢或單苗接種到生根誘導培養基， 生根誘導培養基配方為在1/2改良MS上，添加IBA 0.6mg/L制成；在溫度為25±1°C，光照時間為12h. cf1，光照強度20001x的條件下，培養30天開始生長出白色的不定根，50天長出I 2條，粗壯，長度約Icm的不定根。
實施例2
(I)叢生芽誘導
取崇左金花茶幼嫩種子，先用洗潔精洗去表面污垢，接著流水沖洗30min，然后在超凈工作臺上用75%乙醇處理40s，無菌水沖洗2次，再用O. IHgCl2消毒25min，無菌水沖洗5次；再用O. 2% HgCl2消毒15min,無菌水沖洗6次；用無菌濾紙吸干外植體,挑出乳白色種胚植于用改良MS添加6-BA 3mg/L、IAA O. 70mg/L, pH值調節至5. 5的培養基上，在溫度為25±1°C，光照時間為12h. cf1，光照強度20001x的條件下，培養60天，平均得到18倍的叢生芽，叢生芽粗壯，葉濃綠色、肥厚，長勢好。
(2)生根誘導
待叢生芽生長至3 4cm時，將叢生芽分割成小叢或單苗接種到生根誘導培養基， 生根誘導培養基配方為在1/2改良MS上，添加IBA I. 2mg/L制成；在溫度為25±1°C，光照時間為12h. cf1，光照強度20001x的條件下，培養30天開始生出白色的不定根，50天長出 2 3條，粗壯，長度約2cm的不定根。
實施例3
(I)叢生芽誘導
取崇左金花茶幼嫩種子，先用洗潔精洗去表面污垢，接著流水沖洗30min，然后在超凈工作臺上用75%乙醇處理40s，無菌水沖洗2次，再用O. IHgCl2消毒30min，無菌水沖洗5次；再用O. 2% HgCl2消毒20min,無菌水沖洗6次；用無菌濾紙吸干外植體,植于用改良MS添加6-BA 2mg/L、IAA O. 8mg/L, pH值調節至5. 8的培養基上，在溫度為25 土 1°C，光照時間為12h. cf1，光照強度20001x的條件下，培養55天，平均得到20倍的叢生芽，叢生芽較粗壯，葉濃綠色，生長較快。
(2)生根誘導
待叢生芽生長至3 4cm時，將叢生芽分割成小叢或單苗接種到生根誘導培養基， 生根誘導培養基配方為在1/2改良MS上，添加NAA 0.6mg/L制成；在溫度為25±1°C，光照時間為12h. cf1，光照強度20001x的條件下，培養30天開始生長出白色的不定根，48天長出2條，粗壯，長度約2cm的不定根。
以上實施例中，改良MS培養基含有成分為Ca (NO3) 2 · 4H20 300mg/L;MgSO4 · 7H20 370mg/L;KN03 1900mg/L;NH4NO3 1650mg/L;KH2PO4 340mg/L;Na2 · EDTA 37.3mg/ L; FeSO4 · 7H2027. 8mg/L;KI 0. 83mg/L; H3BO3 0. 63mg/L; MnSO4 · 4H20 22. 3mg/L; ZnSO4 · 7H20 8. 6mg/L; Na2Mo · 4H20 0. 025mg/L; CuSO4 · 5H20 0. 025mg/L; CoCl2 · 6H20 0. 003mg/L;肌醇 50mg/L;煙酸0. 5mg/L;鹽酸卩比卩多酸0. 5mg/L;鹽酸硫胺素O. 5mg/L;甘氨酸2mg/L。
以上實施例中，上述1/2改良MS培養基含有成分為Ca (NO3) 2 · 4H20 150mg/ L; MgSO4 · 7H20185mg/L; KNO3 950mg/L; NH4NO3 825mg/L; KH2PO4 170mg/L; Na2 · EDTA 37. 3mg/ L; FeSO4 · 7H2027. 8mg/L;KI 0. 83mg/L; H3BO3 0. 63mg/L; MnSO4 · 4H20 22. 3mg/L; ZnSO4 · 7H20 8. 6mg/L; Na2Mo · 4H20 0. 025mg/L; CuSO4 · 5H20 0. 025mg/L; CoCl2 · 6H20 0. 003mg/L;肌醇 50mg/L;煙酸0. 5mg/L;鹽酸卩比卩多酸0. 5mg/L;鹽酸硫胺素O. 5mg/L;甘氨酸2mg/L。
權利要求
1.一種崇左金花茶組培繁殖方法，其特征在于將崇左金花茶的外植體接種到叢生芽誘導培養基中進行培養，待叢生芽長至3cm時，將叢生芽分割成小叢或單苗接種到生根誘導培養基中進行培養； 所述叢生芽誘導培養基以改良MS培養基為基礎，含有下列濃度的物質 6-節氨基嘌呤2 4mg/L 3- Π引哚乙酸O. 6 O. 8mg/L 其pH值為4. 5 5.8 ; 所述生根誘導培養基以1/2改良MS培養基為基礎，含有下列濃度的物質 口引哚丁酸O. 6 I. 2mg/L或奈乙酸O. 6 I. 2mg/L。
2.根據權利要求I所述的崇左金花茶組培繁殖方法，其特征在于所述外植體為幼嫩種子。
3.根據權利要求2所述的崇左金花茶組培繁殖方法，其特征在于所述幼嫩種子先經洗凈并用O. I % HgCl2溶液消毒處理20 30min，再用O. 2% HgCl2溶液消毒處理15 20mino
4.根據權利要求3所述的崇左金花茶組培繁殖方法，其特征在于所述培養均在溫度25±2°C、光照時間12 14h. Cf1、光照強度20001x的條件下進行。
5.一種崇左金花茶叢生芽誘導培養基，其特征在于以改良MS培養基為基礎，含有下列濃度的物質 6-節氨基嘌呤2 4mg/L 3- Π引哚乙酸O. 6 O. 8mg/L。
6.根據權利要求5所述的崇左金花茶叢生芽誘導培養基，其特征在于該培養基的pH值為 4. 5 5. 8。
7.根據權利要求5或6所述的誘導培養基，其特征在于所述改良MS培養基含有成分 S:Ca(N03)2*4H20 300mg/L; MgSO4 · 7H20 370mg/L;KN03 1 900mg/L; NH4NO31650mg/L;KH2P04340mg/L; Na2 · EDTA 37. 3mg/L; FeSO4 · 7H20 27. 8mg/L;KI 0. 83mg/L; H3BO3 0. 63mg/L; MnSO4 · 4H20 22. 3mg/L; ZnSO4 · 7H20 8. 6mg/L; Na2Mo · 4H20 0. 025mg/L; CuSO4 · 5H200. 025mg/L; CoCl2 · 6H20 0. 003mg/L;肌醇 50mg/L;煙酸 0. 5mg/L;鹽酸吡哆酸0. 5mg/L;鹽酸硫胺素O. 5mg/L;甘氨酸2mg/L。
8.—種崇左金花生根誘導培養基，其特征在于以1/2改良MS培養基為基礎，含有下列濃度的物質 口引哚丁酸O. 6 I. 2mg/L或奈乙酸O. 6 I. 2mg/L。
9.根據權利要求8所述的誘導培養基，其特征在于所述1/2改良MS培養基含有成分 S:Ca(N03)2*4H20 150mg/L; MgSO4 · 7H20 185mg/L;KN03 950mg/L; NH4NO3825mg/L ;KH2P04170mg/L; Na2 · EDTA 37. 3mg/L; FeSO4 · 7H20 27. 8mg/L;KI 0. 83mg/L; H3BO3 0. 63mg/L; MnSO4 · 4H20 22. 3mg/L; ZnSO4 · 7H20 8. 6mg/L; Na2Mo · 4H20 0. 025mg/L; CuSO4 · 5H200. 025mg/L; CoCl2 · 6H20 0. 003mg/L;肌醇 50mg/L;煙酸 0. 5mg/L;鹽酸吡哆酸0. 5mg/L;鹽酸硫胺素O. 5mg/L;甘氨酸2mg/L。
全文摘要
本發明公開了一種崇左金花茶組培繁殖方法及其誘導培養基，該方法采用改良MS+6-芐氨基嘌呤(6-BA)+3-吲哚乙酸(IAA)作為崇左金花茶叢生芽誘導培養基，這兩種生長激素組合在合適的濃度和弱酸性的環境下，可激活崇左金花茶體細胞內的作用酶，促進崇左金花茶外植體的萌發和生長，培養55天就能形成粗壯的叢生芽，擴繁達20倍。本發明還采用1/2改良MS+吲哚丁酸(IBA)或1/2改良MS+奈乙酸(NAA)作為生根誘導培養基，能有效地促進崇左金花茶單苗生根形成新植株。應用上述三種誘導培養基的崇左金花茶組培繁殖方法，可快速有效地繁殖崇左金花茶，解決了其野生資源日益減少和自然繁殖率低的問題，有效地保護了這一世界上稀有的珍貴植物種質資源。
文檔編號A01H4/00GK102972291SQ20121048283
公開日2013年3月20日 申請日期2012年11月23日 優先權日2012年11月23日
發明者楊舒婷, 王華新, 林茂, 唐遒冥, 龔建英, 孫利娜, 杜鈴, 廖美蘭, 陳爾, 陳寶玲, 李娜, 黃欣, 汪小玉, 杜禹 申請人:廣西壯族自治區林業科學研究院