專利名稱：一種海蘿的組織培養方法
技術領域：
本發明涉及一種海蘿的繁育方法，特別地涉及一種海蘿的組織培養方法。
背景技術：
海蘿屬于海蘿科，海蘿屬，是一種海生藻類。一般生于中潮帶和高潮帶下部的巖石上。藻體紫紅色，黃褐色至褐色，軟革質，干后韌，高4-10cm，可達15cm，叢生，主枝短，圓柱形或亞圓柱形，寬約4_，不規則二叉分枝，于分枝處常縊縮。內部組織疏松或中空，故藻體有時扁塌，細胞壁外層為海蘿膠，內層為纖維素。四分孢子囊散在皮層中，十字形分裂，成熟的囊果圓球形或半球形，很小，突生體表，密布于藻體上。固著器盤狀。海蘿可以入藥，按照中藥學的記載，
海蘿歸經肺；脾；大腸經功效清熱；消食；祛風除濕；軟堅化痰主治勞熱；骨蒸；泄瀉；痢疾；風濕痹痛；咳嗽；癭瘤；痔疾功效分類清熱藥；消食藥；祛風除濕藥；軟堅化痰藥因此海蘿具有藥用價值，但是目前均是直接采收野生狀態的海蘿，一年僅能采收I次，而且野生海蘿產量低，采收困難。

發明內容
為了解決上述問題，本發明提供了一種海蘿的組織培養方法，該方法包括以下步驟( I)原材料的準備及消毒選擇生長點完整、色澤正常的健康海蘿作種菜，將其洗凈，并將切成I 3mm見方的小塊，隨后將切好的小塊浸泡于1%的碘化鉀溶液中5分鐘，再將海蘿小塊用滅菌海水沖洗4 5次，置于無菌的干凈培養皿中備用；(2)愈傷培養基的配制及接種愈傷組織培養基的配方如下NaC120 24g/L，MgSO4. 7H206 7g/L，EDTA_Fe20 25mg/L,甘油磷酸鉀 80 90mg/L, H3B0320 30mg/L, ZnCl2IO 12mg/L, CoCl2. 6Η200· 4
O.6mg/L,三醋酸腈 I 1. 5mg/L,煙酸 O.1 O. 2mg/L,維生素 B1O.1 O. 15mg/L,瓊脂 IOg/L ；將步驟(I)中所獲得的海蘿小塊接種至愈傷組織培養基上，每個培養皿中接種4 5快海蘿小塊；(3)愈傷組織的培養將接種完成的愈傷組織培養基放置在恒溫培養箱中，培養箱的溫度保持在20攝氏度，光照強度為2000 25001x，每天光照時間為14小時；培養5 7天后愈傷組織形成；(4)擴大培養培養基的配制與接種擴大培養培養基的配方如下NaC120 24g/L，MgSO4. 7H206 7g/L，K2S04800 lOOOmg/L, CaCl2. 2H20300 400mg/L，K2HP04600 700mg/L，H3BO3IO 12mg/L，MnSO4. 4H2030 35mg/L, ZnSO4. 7H200. 4 0. 5mg/L, CoCl2. 6H200. 05 0. lmg/L ；煙酸0. 2 0. 3mg/L，維生素 B6O.1 0. 2mg/L，維生素 B1O.1 O. 2mg/L，NNAO. 05 O. 08mg/L ；將步驟(3)中生成的愈傷組織接種到擴大培養培養基中，接種的數量為每IOOml培養基中接種愈傷組織I塊；(5)擴大培養將接種完成的擴大培養培養基放置在恒溫培養箱中，培養箱的溫度保持在25攝氏度，光照強度為2500 30001x，每天光照時間為14小時，培養過程中每天向培養液中充入清潔無菌空氣I次；培養20 25天后愈傷組織生長成為3 5厘米的海蘿個體。 其中，步驟(I)中所述的將藻體洗凈，優選地采用超聲波清洗儀對藻體進行清洗。其中，優選地，在步驟(I)中增加使用抗生素滅菌的程序，確保藻體的無菌狀態，該抗生素滅菌的程序是指將經過碘化鉀溶液浸泡的藻體浸泡入含有抗生素的溶液中，其中抗生素的含量為400 μ g/ml的青霉素G, 150 μ g/ml的硫酸鏈霉素,40 μ g/ml的新霉素B。浸泡時間為30分鐘。本發明所述的海蘿的組培方法可以擺脫野生海蘿一年只能采收一次的情況，可以在室內大量連續地生產。
具體實施例方式實施例1按下列步驟對海蘿進行組織培養( I)原材料的準備及消毒選擇生長點完整、色澤正常的健康海蘿作種菜，將其洗凈，并將切成2mm見方的小塊，隨后將切好的小塊浸泡于1%的碘化鉀溶液中5分鐘，再將海蘿小塊用滅菌海水沖洗4次，置于無菌的干凈培養皿中備用；(2)愈傷培養基的配制及接種愈傷組織培養基的配方如下NaC120g/L，MgSO4.7H206g/L，EDTA_Fe20mg/L，甘油磷酸鉀 80mg/L，H3B0320mg/L, ZnCl210mg/L, CoCl2. 6H200. 4mg/L，三醋酸腈 lmg/L，煙酸 0. lmg/L,維生素 B1O. lmg/L,瓊脂 10g/L ；將步驟(I)中所獲得的海蘿小塊接種至愈傷組織培養基上，每個培養皿中接種4塊海蘿小塊；(3)愈傷組織的培養將接種完成的愈傷組織培養基放置在恒溫培養箱中，培養箱的溫度保持在20攝氏度，光照強度為22001x，每天光照時間為14小時；(4)擴大培養培養基的配制與接種擴大培養培養基的配方如下NaC120g/L,MgSO4. 7H206g/L, K2S04800mg/L,CaCl2. 2H20300mg/L, K2HP04600mg/L, H3B0310mg/L, MnSO4. 4H2030mg/L, ZnSO4. 7H200. 4mg/L,CoCl2. 6H200. 05mg/L ；煙酸0. 2mg/L，維生素 B6O. lmg/L,維生素 B1O. lmg/L, NNAO. 05mg/L ；
將步驟(3)中生成的愈傷組織接種到擴大培養培養基中，接種的數量為每IOOml培養基中接種愈傷組織I塊；(5)擴大培養將接種完成的擴大培養培養基放置在恒溫培養箱中，培養箱的溫度保持在25攝氏度，光照強度為30001x，每天光照時間為14小時，培養過程中每天向培養液中充入清潔無菌空氣I次。培養的結果是，愈傷組織在培養的第7天形成，誘導出愈傷組織的比例達到75. 3%，當擴大培養至12天時可以看到愈傷組織長成成熟個體形態，至24天時，海蘿平均長度為3. 8厘米。實施例2按下列步驟對海蘿進行組織培養( I)原材料的準備及消毒選擇生長點完整、色澤正常的健康海蘿作種菜，將其洗凈，并將切成1. 5mm見方的小塊，隨后將切好的小塊浸泡于1%的碘化鉀溶液中5分鐘，再將海蘿小塊用滅菌海水沖洗4次，置于無菌的干凈培養皿中備用；(2)愈傷培養基的配制及接種愈傷組織培養基的配方如下NaC124g/L，MgSO4.7H207g/L, EDTA_Fe25mg/L，甘油磷酸鉀 90mg/L, H3B0330mg/L, ZnCl212mg/L, CoCl2. 6Η200· 6mg/L,三醋酸腈1. 5mg/L,煙酸
O.2mg/L,維生素 B1O. 15mg/L,瓊脂 10g/L ；
將步驟(I)中所獲得的海蘿小塊接種至愈傷組織培養基上，每個培養皿中接種4塊海蘿小塊；( 3)愈傷組織的培養將接種完成的愈傷組織培養基放置在恒溫培養箱中，培養箱的溫度保持在20攝氏度，光照強度為22001x，每天光照時間為14小時；(4)擴大培養培養基的配制與接種擴大培養培養基的配方如下NaC124g/L，MgSO4.7H207g/L, K2S041000mg/L,CaCl2. 2H20400mg/L, K2HP04700mg/L, H3B0312mg/L, MnSO4. 4H2035mg/L, ZnSO4. 7H200. 5mg/L,CoCl2. 6H200. lmg/L ；煙酸0. 3mg/L，維生素 B6O. 2mg/L，維生素 B1O. 2mg/L，NNAO. 08mg/L ；將步驟(3)中生成的愈傷組織接種到擴大培養培養基中，接種的數量為每IOOml培養基中接種愈傷組織I塊；(5)擴大培養將接種完成的擴大培養培養基放置在恒溫培養箱中，培養箱的溫度保持在25攝氏度，光照強度為30001x，每天光照時間為14小時，培養過程中每天向培養液中充入清潔無菌空氣I次。培養的結果是，愈傷組織在培養的第5天形成，誘導出愈傷組織的比例達到78. 8%，當擴大培養至11天時可以看到愈傷組織長成成熟個體形態，至24天時，海蘿平均長度為4. 2厘米。本領域技術人員可以根據本發明公開的內容和所掌握的本領域技術對本發明內容作出替換或變型，但是這些替換或變型都不應視為脫離本發明構思的，這些替換或變 型均在本發明要求保護的權利范圍內。
權利要求
1.一種海蘿的組織培養方法，該方法包括以下步驟(1)原材料的準備及消毒選擇生長點完整、色澤正常的健康海蘿作種菜，將其洗凈，并將切成I 3mm見方的小塊，隨后將切好的小塊浸泡于1%的碘化鉀溶液中5分鐘，再將海蘿小塊用滅菌海水沖洗4 5次，置于無菌的干凈培養皿中備用；(2)愈傷培養基的配置及接種愈傷組織培養基的配方如下NaC120 24g/L，MgSO4. 7H206 7g/L，EDTA_Fe20 25mg/L,甘油磷酸鉀 80 90mg/L, H3B0320 30mg/L, ZnCl2IO 12mg/L, CoCl2. 6Η200· 4 .O.6mg/L,三醋酸腈 I 1. 5mg/L,煙酸 O.1 O. 2mg/L,維生素 B1O.1 O. 15mg/L,瓊脂 IOg/L ；將步驟(I)中所獲得的海蘿小塊接種至愈傷組織培養基上，每個培養皿中接種4 5快海蘿小塊；(3)愈傷組織的培養將接種完成的愈傷組織培養基放置在恒溫培養箱中，培養箱的溫度保持在20攝氏度，光照強度為2000 25001x，每天光照時間為14小時；培養5 7天后愈傷組織形成；(4)擴大培養培養基的配制與接種擴大培養培養基的配方如下NaC120 24g/L，MgSO4. 7H206 7g/L，K2S048 00 1000mg/L, CaCl2. 2H20300 400mg/L，K2HP04600 700mg/L，H3BO3IO 12mg/L，MnSO4. 4H2030 35mg/L, ZnSO4. 7H200. 4 0. 5mg/L, CoCl2. 6H200. 05 0. lmg/L ；煙酸 0. 2 0. 3mg/L,維生素 B6O.1 0. 2mg/L,維生素 B1O.1 O. 2mg/L, NNAO. 05 .O.08mg/L ；將步驟(3)中生成的愈傷組織接種到擴大培養培養基中，接種的數量為每IOOml培養基中接種愈傷組織I塊；(5)擴大培養將接種完成的擴大培養培養基放置在恒溫培養箱中，培養箱的溫度保持在25攝氏度,光照強度為2500 30001x，每天光照時間為14小時，培養過程中每天向培養液中充入清潔無菌空氣I次；培養20 25天后愈傷組織生長成為3 5厘米的海蘿個體。
2.權利要求1中所述的海蘿的組織培養方法，其中步驟(I)中所述的將藻體洗凈，優選地采用超聲波清洗儀對藻體進行清洗。
3.權利要求1中所述的海蘿的組織培養方法，其特征在于在步驟(I)中增加使用抗生素滅菌的程序，確保藻體的無菌狀態，該抗生素滅菌的程序是指將經過碘化鉀溶液浸泡的藻體浸泡入含有抗生素的溶液中，其中抗生素的含量為400μ g/ml的青霉素G，150y g/ml的硫酸鏈霉素，40 μ g/ml的新霉素B。浸泡時間為30分鐘。
全文摘要
本發明提供了一種海蘿的組織培養方法。該方法主要包括原材料的選取準備及消毒，愈傷組織的培育，擴大培養。并且公開了愈傷組織培養基和擴大培養培養基的具體配方，以及愈傷組織的培育和擴大培養的培養條件。
文檔編號A01H4/00GK102986530SQ201210484740
公開日2013年3月27日 申請日期2012年11月25日 優先權日2012年11月25日
發明者彭江晨, 芮旭婷 申請人:溧陽市天目湖保健品有限公司