專利名稱：一種利用朝鮮崖柏嫩莖段試管內生根和生長同步的高效育苗方法
技術領域：
本發明涉及一種植物繁殖，即一種利用朝鮮崖柏嫩莖段試管內生根和生長同步的高效育苗方法。
背景技術：
在現有技術中，朝鮮崖柏koraiensis Nakai)別名長白側柏,柏科崖柏屬常綠小喬木或灌木狀。具有經濟、藥用和觀賞等價值。是我國國家二級重點保護植物。僅在長白山國家級自然保護區的紅土山一帶有較大的種群面積，其他區域僅有零星分布。被《中國珍稀瀕危保護植物名錄(第一冊)》定為漸危種，被《中國珍稀瀕危保護植物名錄(第一批)》定為國家二級重點保護植物。被《中國物種紅色名錄》定為瀕危種(EN)。在《吉林省 野生動植物保護管理暫行條例》一文中被定為省級一類重點保護植物。本研究開展的利用朝鮮崖柏嫩莖段試管內生根和生長同步的高效育苗方法的報道國內外迄今未見。

發明內容
本發明的目的是針對朝鮮崖柏野生資源少，扦插、種子等常規方法繁殖消耗野生資源大，生根和發芽困難、移栽成活率低、導致野生資源嚴重受砍伐、采挖等不足而提供一種技術可行，生根率聞的利用朝鮮崖柏嫩莖段試管內生根和生長同步的聞效一步育苗方法。本發明的技術解決方案是一種利用朝鮮崖柏嫩莖段試管內生根和生長同步的高效育苗方法，其步驟如下
(O以朝鮮崖柏枝條水培側芽嫩莖段作為外植體，其生根和莖段同時生長的培養基為培養基 + ZT(O. 06 O. 08 mg · I/1) + NAA(O. 01 O. 03 mg · I71) + IAA(O. 02 O. 04mg·!/1);培養基中附加瓊脂8. O g·!/1,鹿糖15 g · L_\調節pH值至5. 6,嫩莖段在光照周期10 h · Cf1、光照強度900 Ix和溫度(25±2) °C條件下培養；
所述的培養基成分和含量是指412. 5 mg · L^1NH4NO3,475 mg · L^1KNO3,110mg · L-1CaCl2 · 2H20,92. 5 mg · L-1MgSO4 · 7H20,42. 5 mg · L-1KH2PO4 ；4. 64 mg · L-1FeSO4 · 7H20,
6.22 mg · L-1Na2 · EDTA · 2H20 ；0. 083 mg · L-1KI，0. 62 mg · T1H3BO3, 2. 23 mg · L-1MnSO4 · 4H20,0. 86 mg · L^1ZnSO4 · 7H20，0. 025 mg · L-1Na2MO4 · 2H20，0. 0025 mg · L-1CuSO4 · 5H20，0. 0025mg · L 1CoCl2 · 6H20 ；
(2)將種苗擴繁后的小植株從培養瓶中取出，放在殺毒礬溶液中洗凈根上的瓊脂，將小植株栽植到消毒過的草炭土、腐爛松針和河砂4: 3: I的基質中，覆蓋塑料薄膜進行保濕保溫，控制溫度為18 ±2 °C，保持相對濕度在75%，10 h · Cf1的自然光照。本發明的優點是本發明培養基和方法步驟有利于朝鮮崖柏嫩莖段試管內同時生根和生長，生根率高，可操作性強，從莖段接種到出苗僅用I種低成本培養基，屬一步成苗方法，可以滿足工廠化育苗的需要。按著38天為一個增殖周期，按每瓶接種10個莖段，每個莖段在一個周期內可切割成(4 6)段計算，每年有η個周期(朝鮮崖柏每年8個周期)進行擴繁，年生產朝鮮崖柏種苗數為Σ年產成活種苗=IOX (4 6廣株，可見其繁殖數量，該方法對利用少量的野生資源材料年繁殖出上百萬株的珍稀瀕危植物種苗具有重要社會、經濟和生態意義，解決了常規扦插等繁殖方法利用大量野生資源，造成野生資源砍伐和滅絕等問題。經統計計算，小植株成活率可達到95. 0%以上。下面將結合實施例對本發明的實施方式作進一步詳細描述。
具體實施例方式I材料與方法
1.I材料及處理
朝鮮崖柏枝條采自通化縣石湖鎮老嶺村，將去除頂尖的枝條進行水培促其側芽萌發。 待側芽長至2. 00 cm時將嫩枝剪下，用75%乙醇(體積分數)涮洗20 s后移至3. 0%次氯酸鈉溶液(質量濃度)浸泡15 min，無菌水沖洗10次，無菌濾紙吸干表面水分，去除損傷組織后切割成O. 5 cm莖段作為外植體備用。I. 2朝鮮崖柏莖段生根生長、植株高效再生體系建立和煉苗
培養基成分及含量為:412. 5 mg · L-1NH4NO3AS mg · T1KNO3,110 mg · L-1CaCl2 · 2H20,92. 5 mg · L^1MgSO4 · 7H20, 42. 5 mg · L^1KH2PO4 ；4. 64 mg · L^1FeSO4 · 7H20, 6. 22mg · L-1Na2 · EDTA · 2H20 ；0. 083 mg · L^1KI,0. 62 mg · IZ1H3BO3, 2. 23 mg · IZ1MnSO4 · 4H20,0. 86 mg · T1ZnSO4 · 7H20，0. 025 mg · T1Na2MO4 · 2H20，0. 0025 mg · T1CuSO4 · 5H20，0. 0025mg · T1CoCl2 · 6H20o為培養基，培養基中附加玉米素ZT(0. 01 0.05 mg .L—1)、萘乙酸NAA (O. 05 O. 20 mg · Γ1)和吲哚乙酸 IAA (O. 10 O. 30 mg · Γ1)，瓊脂 8. O g · Λ 添加蔗糖15 g · L—1，調節pH值至5. 6，嫩莖段在光照周期10 h · cf1、光照強度900 Ix和溫度(25±2) °C條件下培養。為提高朝鮮崖柏嫩莖段生根生長的速度及生根率和莖段生長長度，通過均勻設計法設計實驗，選用Ultl (103)均勻表，每個處理接種10個嫩莖段，重復3次，篩選朝鮮崖柏莖段生根生長的玉米素、萘乙酸和吲哚乙酸最佳濃度配比。莖段培養40 d統計生根率和長度。生根率=(生根的莖段數/接種的莖段總數)X 100%，莖段長度為I個培養周期后的莖段總長度(O. 5 +生長長度)cm。在培養瓶內通過節增殖方式開展快繁,小植株伸長至2. 00 cm時,在無菌狀態下打開培養瓶，將小植株距培養基表面O. 5 cm處將苗干剪下，并切割成長度為O. 5 cm的小莖段后，再次將小莖段轉接到莖段生根和生長培養基中，開始生根和莖段同時生長培養，計算出每個莖段生根和生長及每瓶的增殖倍數和周期。當種苗擴繁到一定數量后，且小植株長至2. 00 3. 00 cm時，將小植株從培養瓶中取出，放在殺毒礬溶液(濃度為10 mg噸―1)中洗凈根上的瓊脂，將小植株栽植到經殺毒礬(100倍液)消毒過的草炭土、腐爛松針和河砂(4: 3: I)的基質中，覆蓋塑料薄膜(透性好)進行保濕保溫，控制溫度為(18±2) °C，保持相對濕度在75%，10 h ^cT1的自然光照，中午溫度升高時適當打開薄膜換氣通風，早晚噴灑I次清水。2結果與分析
2.I玉米素、吲哚乙酸和萘乙酸對朝鮮崖柏莖段生根的影響
實驗所得數據(表I)經均勻設計軟件分析處理后可得回歸方程為7=101 + 213^ -82. OJ2 — 65. 3為，顯著性水平a = O. 05，復相關系數7 = O. 9843，剩余標準差S= I. 7900，檢驗值Z7i = 62.26 >臨界值/Vow6) = 4. 757，回歸方程具有顯著性，玉米素、吲哚乙酸和萘乙酸對生根的影響均具有顯著性。通過計算玉米素、吲哚乙酸和萘乙酸對生根的貢獻值和貢獻率可知，U1 = 90. 6，UjU = 15. 2% -,U2 = 330, UjU = 55. 5% -,Uz = 126，UjU =21.2%，說明吲哚乙酸遠大于玉米素和萘乙酸對生根的貢獻，因吲哚乙酸和萘乙酸與生根率呈負相關，而玉米素與生根率呈正相關。由此推測，吲哚乙酸和萘乙酸的質量濃度分別低于O. 10 mg · L-1和O. 05 mg · L-1,以及高于O. 05 mg · L—1的玉米素可能有更高的生根率。為驗證此可能性的存在與否，又以吲哚乙酸質量濃度O. 10,0. 09,0. 08,0. 07,0. 06,0. 05,0. 04、O. 03,0. 02,0. 01 和 O. 00 mg · Λ 為萘乙酸質量濃度為 O. 05,0. 04,0. 03,0. 02,0. 01 和 O. 00mg · ΙΛ玉米素為O. 10,0. 09,0. 08,0. 07,0. 06和O. 05 mg · Γ1開展11個補充試驗，重復3次。具體操作為，將O. 50 cm長的朝鮮崖柏莖段轉接到含有IAA(0. 00 O. 10 mg PhNAA(O. 00 O. 05 mg · L-1)和ZT (O. 05 O. 10 mg · L4)的培養基中，開始驗證試驗，17 d后發現，在距離切口 O. 20 O. 40 cm的苗干的表面出現白色小突起，28 d后小突起漸漸變形為白色錐狀，36 d后錐狀伸長形成不定根，經過40 d的培養，有5 7條不定根形成，側根上也出現白色根錐，發現ZT質量濃度為(O. 06 O. 08 mg · L—1)、NAA質量濃度為(O. 01
O.03 mg · L-1)和IAA質量濃度為(O. 02 O. 04 mg · L-1)時朝鮮崖柏莖段生根率最高，平均生根率達98. 7%以上。且比表I所列10個處理的生根率均高。表I朝鮮崖柏嫩莖段生根生長激素篩選的Uici(IOs)試驗設計與結果
Tablel U10(103)test design and result of hormone for rooting and growing oftender stems of Thuja koraiensis
權利要求
1.一種利用朝鮮崖柏嫩莖段試管內生根和生長同步的高效育苗方法，其特征在于步驟如下 (1)以朝鮮崖柏枝條水培側芽嫩莖段作為外植體，其生根和莖段同時生長的培養基為培養基 + ZT O. 06 O. 08 mg · L-1 + NAA O. 01 O. 03 mg · L-1 + IAA O. 02 O. 04mg · L—1 ;培養基中附加瓊脂8. O g · L_\鹿糖15 g · L_\調節pH值至5. 6,嫩莖段在光照周期10 h · Cf1、光照強度900 Ix和溫度25 ±2 °C條件下培養； (2)將種苗擴繁后的小植株從培養瓶中取出，栽植到消毒過的草炭土、腐爛松針和河砂4: 3: I的基質中，控制溫度為18±2 °C，10 h · Cf1的自然光照。
2.按照權利要求I所述的利用朝鮮崖柏嫩莖段試管內生根和生長同步的高效育苗方法，其特征在于側芽嫩莖段是待側芽長至2. 00 cm時將嫩枝剪下，用體積分數75%乙醇涮洗20 s后移至質量濃度為3. 0%次氯酸鈉溶液浸泡15 min，無菌水沖洗10次，無菌濾紙吸干表面水分，去除損傷組織后切割成O. 5 cm莖段。
3.按照權利要求I所述的利用朝鮮崖柏嫩莖段試管內生根和生長同步的高效育苗方法，其特征在于小植株成活率在95. 0%以上。
全文摘要
本發明涉及一種植物繁殖，即一種利用朝鮮崖柏嫩莖段試管內生根和生長同步的高效育苗方法。其生根和莖段同時生長的培養基為培養基＋ZT(0.06～0.08mg·L-1)＋NAA(0.01～0.03mg·L-1)＋IAA(0.02～0.04mg·L-1)；培養基中附加瓊脂8.0g·L-1，蔗糖15g·L-1，調節pH值至5.6，嫩莖段在光照周期10h·d-1、光照強度900lx和溫度(25±2)℃條件下培養；將種苗擴繁后的小植株栽植到消毒過的草炭土、腐爛松針和河砂4:3:1的基質中，覆薄保濕保溫，控制溫度為18±2℃，10h·d-1的自然光照，小植株成活率可達到95.0%以上，可以滿足工廠化育苗的需要。
文檔編號A01H4/00GK102960249SQ20121050275
公開日2013年3月13日 申請日期2012年11月30日 優先權日2012年11月30日
發明者顧地周, 朱俊義, 郭志欣, 姜云天, 梁宇, 李媛媛, 陸爽, 潘雨, 張學士 申請人:通化師范學院