一種蛭弧菌顆粒劑的制作方法
【專利摘要】本發明涉及一種蛭弧菌顆粒劑，其特征在于：其為由植物油、質量濃度為5%-10%的瓊脂和蛭弧菌含量為1010-1011CFU/mL的菌液按照體積比為3：50：100的比例混合，然后加入質量濃度為2%的羧甲基纖維素鈉并混合均勻，將混合液滴入到質量分數為10%的CaCl2溶液中固化12h，再將蛭弧菌固化顆粒于-20℃條件下冷凍干燥24h制得的顆粒劑。本發明的噬菌蛭弧菌顆粒劑機械強度高，蛭弧菌活力保存完好，化學性能穩定，成本低，保存時間長，可以用于水產養殖、畜禽養殖等多個行業。
【專利說明】一種蛭弧菌顆粒劑
【技術領域】
[0001]本發 明涉及一種微生物制劑，具體的說是一種噬菌蛭弧菌顆粒劑。
【背景技術】
[0002]噬菌蛭弧菌(Bdellovibriobacteriovorus)(以下簡稱蛭弧菌)是一種專門以捕食細菌為生的寄生性細菌，有研究指出，蛭弧菌在凈化養殖水體水質、控制或減少水生動物疾病的發生與流行上效果顯著，在養殖過程中添引入蛭弧菌可以起到疾病防治、提高成活率、增長體重體長和凈化養殖生態環境的效果。陳麗蕓等研究發現，添加蛭弧菌后可以使大菱鲆紅嘴病的發生率由10.17%降到0.93%,說明蛭弧菌能有效預防紅嘴病的發生，另外，在治療紅嘴病方面，添加蛭弧菌后能100%治愈紅嘴病。應用蛭弧菌防治水產動物細菌性病害和消毒具有良好的發展前景，目前我國商品化的蛭弧菌制劑主要是水劑，還有少量的凍干粉劑，蛭弧菌水劑因保存時間短，質量不穩定以及運輸不便等因素而影響了其使用效果，凍干粉劑也因生產成本高而在很大程度上限制了其應用，而微生物固定化法可將游離微生物定位于限定的空間區域，并保持活性，且能反復利用，尤其是包埋固定化法，因操作簡單，在制備過程中對微生物活性影響小，制備的顆粒強度較高，更是深受微生態制劑研發人員的青睞。
[0003]固定化微生物技術是將特選的微生物固定在選中的載體上，使其高度密集并保持生物活性，在適宜條件下能夠快速、大量增殖的生物技術，以包埋法最為常用。它的原理是將生物體細胞截留在水不溶性的包埋材料網絡孔隙中，其網絡可以阻止細胞的泄露，同時能讓基質滲入和產物擴散出來。包埋材料可以分為兩大類:(I)天然高分子多糖類，如海藻酸鹽、瓊脂、明膠等，其中以海藻酸鈉和卡拉膠應用最多，它們具有固化方便，對微生物毒性小及固定化密度高等優點，但是它們抗微生物分解性能較差，機械強度低，但是可使用交聯劑進行穩定化處理，但活力和傳質性能又會下降。(2)合成高分子化合物，如聚丙烯酞胺、聚乙烯醇(PvA)等。這類交聯劑的突出優點是抗微生物分解性能好，機械強度高，化學性能穩定。但是聚合物網絡的形成條件比較劇烈，對微生物細胞的損害較大，而且成形的多樣性和可控性不好。張小能等在《噬菌蛭弧菌顆粒劑制備條件的優化》中用海藻酸鈉包埋法研究了噬菌蛭弧菌顆粒劑制備條件的優化，因為海藻酸鈉價格較高，制得的蛭弧菌顆粒劑成本較高，不適合大規模工業化生產。

【發明內容】

[0004]本發明所要解決的技術問題是提供一種成本較低，活力和機械強度等更佳的噬菌蛭弧菌顆粒劑。
[0005]為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案是，一種蛭弧菌顆粒劑，其為由植物油、質量濃度為5%-10%的瓊脂和蛭弧菌含量為1ic1-1oiiCFUAiL的菌液按照體積比為3:50:100的比例混合，然后加入質量濃度為2%的羧甲基纖維素鈉并混合均勻，將混合液滴入到質量分數為10%的CaC12溶液中固化12h，再將蛭弧菌固化顆粒于_20°C條件下冷凍干燥24h制得的顆粒劑。
[0006]上述的蛭弧菌顆粒劑，其為由花生油、質量濃度為5%的瓊脂和蛭弧菌含量為10nCFU/mL的菌液按照體積比為3: 50:100的比例混合，然后加入質量濃度為2%的羧甲基纖維素鈉并混合均勻，將混合液滴入到質量分數為10%的CaC12溶液中固化12h，再將蛭弧菌固化顆粒于_20°C條件下冷凍干燥24h制得的顆粒劑。
[0007]本發明的噬菌蛭弧菌顆粒劑機械強度高，蛭弧菌活力保存完好，化學性能穩定，成本低，保存時間長，可以用于水產養殖、畜禽養殖等多個行業。
【具體實施方式】
[0008]實施例1
[0009]一種蛭弧菌顆粒劑，其為由花生油、質量濃度為5%的瓊脂和蛭弧菌含量為10nCFU/mL的菌液按照體積比為3: 50:100的比例混合，然后加入質量濃度為2%的羧甲基纖維素鈉并混合均勻，將混合液滴入到質量分數為10%的CaC12溶液中固化12h，再將蛭弧菌固化顆粒于_20°C條件下冷凍干燥24h制得的顆粒劑。其具體制備方法為:
[0010](1)蛭弧菌菌液的制備:
[0011]將蛭弧菌菌種接種于100 mL于I /10 NB培養基中，加入100 L濃度為.1.0X106CFU /mL大腸桿菌菌懸液，于35°C溫度下100r/min下搖床振蕩培養48h，檢測菌落總數，調蛭弧菌菌液濃度為1.0 X 1O11CFU /mL備用。
[0012](2)制備蛭弧菌包埋顆粒:
[0013]花生油、質量濃度為5%的瓊脂和蛭弧菌含量為10nCFU/mL的菌液按照體積比為3: 50:100的比例放入攪拌容器中，然后加入質量濃度為2%的羧甲基纖維素鈉，25°C恒溫攪拌30min，使之混合均勻，將混合液滴入到質量分數為10%的CaC12溶液中固化12h，再將蛭弧菌固化顆粒于-20°C條件下冷凍干燥24h，制得顆粒劑。
[0014]實施例2
[0015]一種蛭弧菌顆粒劑，其具體制備方法為:
[0016](1)蛭弧菌菌液的制備:
[0017]將蛭弧菌菌種接種于100 mL于I /10 NB培養基中，加入100 L濃度為.1.0X106CFU /mL大腸桿菌菌懸液，于35°C溫度下100r/min下搖床振蕩培養48h，檢測菌落總數，調蛭弧菌菌液濃度為1.0 X IO10CFU /mL備用。
[0018](2)制備蛭弧菌包埋顆粒:
[0019]花生油、質量濃度為10%的瓊脂和蛭弧菌含量為101(lCFU/mL的菌液按照體積比為.3: 50:100的比例放入攪拌容器中，然后加入質量濃度為2%的羧甲基纖維素鈉，25°C恒溫攪拌30min，使之混合均勻，將混合液滴入到質量分數為10%的CaC12溶液中固化12h，再將蛭弧菌固化顆粒于-20°C條件下冷凍干燥24h，制得顆粒劑。
[0020]實施例3
[0021]固化顆粒活菌數檢測
[0022]本發明的蛭弧菌顆粒劑可以常溫保存，取常溫不同保存時間的蛭弧菌顆粒劑，檢測其活菌數量，以實施例1制備的蛭弧菌顆粒劑為實驗對象。
[0023]取實施例1制備的蛭弧菌顆粒劑0.lg，加入10 mL 0.055 mo I /L的檸檬酸鈉溶液，待顆粒完全崩解后，混合均勻，經梯度稀釋后，采用自來水雙層瓊脂平板法檢測顆粒內蛭弧菌的活菌含量，最后計算每克顆粒內蛭弧菌的活菌數量。經檢測，保存時間在6個月內，制備的蛭弧菌顆粒劑中活菌濃度從1.0X 1O11CFU /mL平穩降至5 X 1OltlCFU /mL,降低的 非常平穩緩慢，符合生產要求。
【權利要求】
1.一種蛭弧菌顆粒劑，其特征在于:其為由植物油、質量濃度為5%-10%的瓊脂和蛭弧菌含量為1ic1-1oiiCFUAiL的菌液按照體積比為3: 50:100的比例混合，然后加入質量濃度為2%的羧甲基纖維素鈉并混合均勻，將混合液滴入到質量分數為10%的CaC12溶液中固化12h，再將蛭弧菌固化顆粒于_20°C條件下冷凍干燥24h制得的顆粒劑。
2.根據權利要求1所述的蛭弧菌顆粒劑，其特征在于:其為由花生油、質量濃度為5%的瓊脂和蛭弧菌含量為10nCFU/mL的菌液按照體積比為3: 50:100的比例混合，然后加入質量濃度為2%的羧甲基纖維素鈉并混合均勻，將混合液滴入到質量分數為10%的CaC12溶液中固化12h ，再將蛭弧菌固化顆粒于_20°C條件下冷凍干燥24h制得的顆粒劑。
【文檔編號】A01N25/12GK103907596SQ201210594026
【公開日】2014年7月9日 申請日期:2012年12月30日 優先權日:2012年12月30日
【發明者】黃艷 申請人:青島錦漣鑫商貿有限公司