專利名稱：一種抑藻劑的制作方法
技術領域：
本發明屬于抑藻劑這一技術領域。
背景技術：
近年來，隨著人類活動的增加，湖泊、水庫富營養化日益嚴重，導致水華頻繁爆發，水資源的利用效能降低，水產業經濟因此遭受了巨大的損失，水環境安全也因此面臨著嚴重的威脅。因此，有效抑制富營養化水體中浮游藻類的過量生長及防止水華發生成為目前環境領域的研究熱點和前沿。在眾多控制藻類生長的方法中，傳統的物理、化學抑制藻類生長的方法會不可避免地破壞生態平衡并造成環境污染。而生物方法尤其是利用植物化感作用抑藻被認為是一種新型的生物抑藻技術，具有高效、生態安全性好等特點，因而頗受關注。目前對利用植物化感作用抑藻主要是集中于沉水、挺水和浮游植物的研究，但是水體中營養鹽的直接脅迫和毒害作用會造成沉水植物的消亡；維持淺水湖泊清水狀態的磷濃度通常為0.05-0.15 mg/L，當水體中的總磷濃度超過0.15 mg/L時，湖泊會開始從草型生態系統轉化為藻型生態系統。再者，由于浮游藻類大量生長，水生植物不但會受到各種環境因子的影響，而且會受到營養、光照等方面的沖擊而導致消亡，故要達到發揮抑藻效果的蓋度是較難實現的，從而無法有效控制有害藻類的過量增殖。同時，藍藻也會通過藻毒素等化感物質的分泌影響水生植物的化感潛能。此外，水生植物又受季節和氣候的限制，因此水生植物化感抑藻在實際應用中有一定的局限性。

發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一種含有陸生植物提取液的抑藻劑。本發明解決技術問題的技術方案為:一種含有植物提取物的抑藻劑，所述的抑藻劑為蔥白的無水甲醇粗提取物、蔥白的無水丙酮粗提物、蔥白的無水石油醚粗提物、蔥白的乙醇粗提物。 所述的蔥白的無水甲醇粗提物通過以下方法制備:按蔥白與無水甲醇的比例為IOOg:400mL，室溫浸提兩天后過濾，收集濾液，減壓濃縮揮干甲醇，干燥至恒重，即可。所述的蔥白的無水丙酮粗提物通過以下方法制備:按蔥白與無水丙酮的比例為IOOg:400mL，室溫浸提兩天后過濾，收集濾液，減壓濃縮揮干無水丙酮，干燥至恒重，即可。所述的蔥白的無水乙醚粗提物通過以下方法制備:按蔥白與無水乙醚的比例為IOOg:400mL，室溫浸提兩天后過濾，收集濾液，減壓濃縮揮干無水乙醚，干燥至恒重，即可。所述的蔥白的乙醇粗提物通過以下方法制備:按蔥白與75% (ml/ml)的乙醇比例為IOOg:400mL，室溫浸提兩天后過濾，收集濾
液，減壓濃縮揮干乙醇，干燥至恒重，即可。
將蔥白的無水丙酮粗提物，用無水丙酮稀釋，裝入滴液漏斗中，由滴液漏斗向層析柱(大孔樹脂XAD1180)滴流，上樣完全后，用蒸餾水洗柱，直至層析柱中流出的蒸餾水與95%乙醇(ml/ml)混合不產生混濁為止，再用2BV的丙酮進行洗脫，層析柱中洗脫液的洗脫速率恒定為0.5BV/h，再經減壓濃縮揮干無水丙酮，即可得到蔥白的無水丙酮純提物。一種抑藻劑，所述的抑藻劑為烯丙硫醇、環戊硫醇一種或數種的混合物。大蔥(Alliumfistulosum L.var.giganteam Makino)是常見的陸生植物，屬百合科蔥屬，是以葉鞘組成的肥大假莖和嫩葉為產品的2-3年生草本植物；大蔥在我國的栽培歷史長達3000余年，是世界上主要栽培大蔥的國家之一，它由蔥白和蔥葉組成。本發明與現有技術相比，有機溶劑的蔥白粗提物對銅綠微囊藻的抑制效果由高到低順序為:無水丙酮>75%乙醇〉無水石油醚〉無水甲醇。蔥白的無水丙酮純提物的抑制率隨著時間的增加而增大，并表現出濃度效應。高劑量組在第四天的抑制率達到了 97.78% ；EC50按第五天計算，結果為0.03g/L，即純化后的粗提物抑藻效果較純化前顯著。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明作詳細的說明。實驗材料:1.1銅綠微囊藻(Microcystisaeruginosa)和斜生柵藻(Scenedesmus obliquus)由中國科學院水生生物研究所藻種庫提供；采用BG-1l培養基培養。新鮮大蔥 ，購于蕪湖市菜市場。無水甲醇、無水丙酮、無水石油醚和無水乙醇、烯丙硫醇、環戊硫醇均為分析純。BG-1l培養基主要成分NaNO3,1.5 g/L ；K2HPO4 3H20,0.04 g/L ；MgS04 7H20,0.075 g/L ；CaCl2 2H20,0.036 g/L ;檸檬酸，0.006 g/L ;檸檬酸鐵銨，0.006 g/L ；EDTA,0.001 g/L ；Na2C03,0.02 g/L ；A5 solution,0.1 mL ；A5 solution 配方:H3B03，2.86 g/L ;MnCl2 4H20,1.86 g/L ；ZnSO4 7H20,0.22 g/L ；Na2MoO4 2H20,0.39 g/L ；CuSO4.5H20,0.08 g/L ；Co (NO3)2 6H20，0.05 g/L。1.2實驗前用對銅綠微囊藻進行擴大培養。培養條件為:光照強度4000 lx，光暗比為12h:12h，溫度(25±1)°C。每天搖動:T5次，使銅綠微囊藻細胞進入對數生長期。1.3測定方法銅綠微囊藻密度用熒光分光光度計計數；大蔥蔥白成分分析使用島津GC-MSQP2010plus氣質聯用儀。1.4數據處理化感物質對藻類的抑制率(inhibition rate)公式為:IR = (1-N/N0) X 100%式中，IR—抑制率；N—加入浸提液組的熒光值；％—對照組的熒光值。將大蔥浸提液最終濃度與生長抑制率作一元線性回歸，求出半效應濃度EC5tl(mL/L)。數據采用Excel 2010軟件處理，各組間差異采用單因素方差分析(one-wayANOVA)，P<0.05表示有顯著性差異，P<0.01表示有極顯著差異。實施例1:取新鮮大蔥蔥白去皮、磨碎、按蔥白與有機溶劑(無水甲醇、無水丙酮、無水石油醚、75%乙醇)的比例均為100g:400mL。浸提兩天后過濾，收集濾液，經減壓濃縮揮干有機溶劑，將粗提物置已恒重的燒杯中，揮干至恒重，得到蔥白的無水甲醇粗提取物、蔥白的無水丙酮粗提物、蔥白的無水石油醚粗提物、蔥白的乙醇粗提取物。實施例2:將蔥白的無水丙酮粗提取物，用無水丙酮稀釋至10%，裝入滴液漏斗中，由滴液漏斗向層析柱(大孔樹 脂XAD1180)滴流，上樣完全后，用蒸餾水洗柱，直至層析柱中流出的蒸餾水與95%乙醇(ml/ml)混合不產生混濁為止，再用2BV的丙酮進行洗脫，層析柱中洗脫液的洗脫速率恒定為0.5BV/h，再經減壓濃縮揮干無水丙酮，即可，得到蔥白的無水丙酮純提物。實施例3:將實施例1所制的四種蔥白粗提物(蔥白的無水甲醇粗提取物、蔥白的無水丙酮粗提物、蔥白的無水石油醚粗提物、蔥白的乙醇粗提取物)分別溶解于二甲亞砜中(DMSO)，控制DMSO終濃度〈I % (溶劑DMSO水溶液在試驗條件下的抑制率為1.06%，該值已包含在抑制率計算時的誤差內)再加入BG-1l培養基配成濃度為0.lg/L。在無菌條件下通過0.22um的微孔濾膜過濾以消除微生物，得到四種樣品溶液。取對數生長期的銅綠微囊藻分別放入已滅菌的IOOmL錐形瓶中，藻細胞最終濃度為5.5 X IO5 cells/mL，分別加入四種樣品溶液溶液，使最終體積為50mL，最終濃度為0.1g/L0同時設不加粗提物的空白對照組(CK)，每種處理組設3個平行，培養條件同1.2。每隔24h進行熒光值的測定，連續測5天。其結果如表1、表2所示:表I四種蔥白的粗提物對銅綠微囊藻的抑制率(%)
權利要求
1.一種抑藻劑，其特征在于:所述的抑藻劑為蔥白的無水甲醇粗提取物、蔥白的無水丙酮粗提物、蔥白的無水石油醚粗提物、蔥白的乙醇粗提取物。
2.根據權利要求1所述的一種抑藻劑，其特征在于:所述的蔥白的無水甲醇粗提物通過以下方法制備: 按蔥白與無水甲醇的比例為IOOg:400mL，室溫浸提兩天后過濾，收集濾液，減壓濃縮揮干甲醇，干燥至恒重，即可。
3.根據權利要求1所述的一種抑藻劑，其特征在于:所述的蔥白的無水丙酮粗提物通過以下方法制備: 按蔥白與無水丙酮的比例為IOOg:400mL，室溫浸提兩天后過濾，收集濾液，減壓濃縮揮干無水丙酮，干燥至恒重，即可。
4.根據權利要求1所述的一種抑藻劑，其特征在于:所述的蔥白的無水乙醚粗提物通過以下方法制備: 按蔥白與無水乙醚的比例為IOOg:400mL，室溫浸提兩天后過濾，收集濾液，減壓濃縮揮干無水乙醚，干燥至恒重，即可。
5.根據權利要求1所述的一種抑藻劑，其特征在于:所述的蔥白的乙醇粗提物通過以下方法制備: 按蔥白與75% (ml/ml)的乙醇比例為IOOg:400mL，室溫浸提兩天后過濾，收集濾液，減壓濃縮揮干乙醇，干燥至恒重，即可。
6.根據權利要求3所述的一種抑藻劑，其特征在于:將蔥白的無水丙酮粗提取物，用無水丙酮稀釋，裝入滴液漏斗中， 由滴液漏斗向層析柱(大孔樹脂XAD1180)滴流，上樣完全后，用蒸餾水洗柱，直至層析柱中流出的蒸餾水與95%乙醇(ml/ml)混合不產生混濁為止，再用2BV的丙酮進行洗脫，層析柱中洗脫液的洗脫速率恒定為0.5BV/h，再經減壓濃縮揮干無水丙酮，即可，得到蔥白的無水丙酮提取物。
7.一種抑藻劑，其特征在于:所述的抑藻劑為烯丙硫醇、環戊硫醇一種或兩種的混合物。
全文摘要
本發明公開了一種抑藻劑，所述的抑藻劑為蔥白的無水甲醇粗提取物、蔥白的無水丙酮粗提物、蔥白的無水石油醚粗提物、蔥白的乙醇粗提取物。本發明與現有技術相比，本發明與現有技術相比，有機溶劑的蔥白粗提物對銅綠微囊藻的抑制效果由高到低順序為無水丙酮>75%乙醇>無水石油醚>無水甲醇。蔥白的無水丙酮純提物的抑制率隨著時間的增加而增大，并表現出濃度效應。高劑量組在第四天的抑制率達到了97.78%；EC50按第五天計算，結果為0.03g/L，即純化后的無水丙酮提取物抑藻效果較純化前顯著。
文檔編號A01P1/00GK103181401SQ20131005935
公開日2013年7月3日 申請日期2013年2月26日 優先權日2013年2月26日
發明者張庭廷, 周楊, 李源, 劉璐, 李 誠 申請人:安徽師范大學