專利名稱：維生素a臨界缺乏家禽動物模型的構建方法
維生素A臨界缺乏家禽動物模型的構建方法
Construction of model poultry with marginal vitamin A deficiency技術領域
本發明屬于動物營養相關科研、獸醫臨床評價和實驗動物學領域，涉及營養缺乏癥動物模型的構建方法，尤其是涉及一種家禽維生素A臨界缺乏動物模型的構建方法。
背景技術：
近年來，隨著家禽營養與免疫學的發展，維生素A的營養免疫調節作用日益受到人們重視。維生素A通過其在動物體內的代謝產物視黃酸，在家禽的呼吸道黏膜、消化道黏膜、體液免疫以及細胞免疫等方面均有重要的調節作用。然而，在研究在維生素A的營養免疫調節及其作用機制方面的研究中，構建家禽維生素A臨界缺乏的動物模型成為瓶頸環節。目前雖然已有通過飼喂缺乏維生素A的純化日糧構建動物模型的報道，但其技術手段還主要存在以下問題:①由于家禽肝臟儲存有比較多的維生素A，往往需要飼喂很長一段時間的缺乏維生素A的純化日糧，才能表現出維生素A臨界缺乏。②由于構建時間較長，而家禽生長周期短(例如商品肉雞僅需40天左右出欄)，進行早期的試驗(如1-2周齡)難以實現。③由于雞對普通維生素A的吸收、轉運等環節變異很大，往往同樣處理的群體內不同個體維生素A的營養水平參差不齊。④直接采用缺乏維生素A的純化日糧構建模型，容易引起動物維生素A重度缺乏而喪失食欲，進而引起蛋白-能量營養失調導致死亡。發明內容
鑒于現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種構建維生素A臨界缺乏的I日齡雛禽動物模型。通過本方法構建的維生素A臨界缺乏動物模型，具有群體內整齊度高，性能穩定等特點，可滿足獸醫臨床維生素A補充劑的療效評價、維生素A營養免疫調節及其機制的科學研究、實驗動物學其他相關研究等的需要。
為了解決背景技術所存在的問題，本發明采用以下技術方案: 配制缺乏維生素A的純化日糧，包括以下重量份數比的原料:酪蛋白15.0-25.0，DL-蛋氨酸1.5-4.5，玉米淀粉10.0-18.0，蔗糖40.0-60.0，纖維素4.0-6.0，玉米油4.0-6.0，微量元素預混料3.5，維生素 預混料1.0。其中，微量元素預混料按美國NRC推薦公布的家禽營養標準配制，維生素預混料除不含維生素A外，其余成分均按美國NRC推薦的家禽營養標準配制。另外配制維生素A微乳溶液，包括以下重量份數比的原料:維生素A油(含量1000000IU/g) 0.1，丙二醇 10.0-15.0，Span60 10.0-15.0, Tween80 8.0-12.0，BHT 0.3，焦亞硫酸鈉0.3，純化水60-70份。通過維生素A溶液飲水可以靈活調整家禽維生素A攝入量。選擇18-25周齡的父母代種禽，飼喂缺乏維生素A的純化日糧，每間隔I周翅靜脈采血測定血清維生素A含量。待種禽血清維生素A水平降低至0.60-0.85 μ mol/L后，通過飲水調整其攝入維生素A水平穩定在600IU/kg日糧。在此范圍內，不影響其產蛋率和孵化率，種蛋孵出的雛禽即達到維生素A的臨界缺乏狀態，而又不至于由于體質太弱而發生早期死亡。出殼雛禽飼喂缺乏維生素A的純化日齡，配合維生素A微乳溶液飲水，調整其攝入維生素A日糧水平為300IU/kg，即可維持雛禽的維生素A臨界缺乏狀態。
優選地，配制缺乏維生素A的純化日糧，包括以下重量份數比的原料:酪蛋白18.0-22.0, DL-蛋氨酸 1.7-4.2，玉米淀粉 12.0-16.0，蔗糖 42.0-55.0,纖維素 4.5-5.5，玉米油4.5-5.5，微量元素預混料3.5，維生素預混料1.0。其中，微量元素預混料按美國NRC推薦公布的家禽營養標準配制，維生素預混料除不含維生素A外，其余成分均按美國NRC推薦的家禽營養標準配制。另外配制維生素A微乳溶液，包括以下重量份數比的原料:維生素A 油(含量 1000000IU/g) 0.1，丙二醇 10.0-12.0, Span60 12.0-15.0, Tween80 8.0-10.0,BHT 0.3，焦亞硫酸鈉0.3，純化水60-65份。選擇19-22周齡的父母代種禽，飼喂缺乏維生素A的純化日糧，每間隔I周翅靜脈采血測定血清維生素A含量。待種禽血清維生素A水平降低至0.60-0.85 μ mol/L后，通過飲水調整其攝入維生素A水平穩定在600IU/kg日糧。在此范圍內，不影響其產蛋率和孵化率，種蛋孵出的雛禽即達到維生素A的臨界缺乏狀態，而又不至于由于體質太弱而發生早期死亡。出殼雛禽飼喂缺乏維生素A的純化日齡，配合維生素A微乳飲水劑，調整其攝入維生素A日糧水平為120IU/kg，即可維持雛禽的維生素A臨界缺乏狀態。
進一步優選地，配制缺乏維生素A的純化日糧，包括以下重量份數比的原料:酪蛋白 19.0-20.0，DL-蛋氨酸 1.9-4.0，玉米淀粉 14.0-15.0，蔗糖 44.0-52.0，纖維素 4.7-5.2，玉米油4.7-5.2，微量元素預混料3.5，維生素預混料1.0。其中，微量元素預混料按美國NRC推薦公布的家禽營養標準配制，維生素預混料除不含維生素A外，其余成分均按美國NRC推薦的家禽營養標準配制。另外配制維生素A微乳溶液，包括以下重量份數比的原料:維生素A 油(含量 1000000IU/g) 0.1，丙二醇 10.0-11.0，Span60 12.0-14.0, Tween80 9.0-10.0，BHT 0.3，焦亞硫酸鈉0.3，純化水62-65份。選擇20-22周齡的父母代種禽，飼喂缺乏維生素A的純化日糧，每間隔I周翅靜脈采血測定血清維生素A含量。待種禽血清維生素A水平降低至0.60-0.85 μ mol/L后，通過飲水調整其攝入維生素A水平穩定在600IU/kg日糧。在此范圍內，不影響其產蛋率和孵化率，種蛋孵出的雛禽即達到維生素A的臨界缺乏狀態，而又不至于由于體質太弱而發生早期死亡。出殼雛禽飼喂缺乏維生素A的純化日齡，配合維生素A微乳飲水，調整其攝入維生素A日糧水平為120IU/kg，即可維持雛禽的維生素A臨界缺乏狀態。
所述的家禽為蛋雞、肉雞、肉鴨、鵝以及鵪鶉等。
與現有技術相比，本發明公開的家禽維生素A臨界缺乏動物模型的構建方法具有如下優點和顯著進步:①可以得到I日齡雛禽維生素A臨界缺乏模型，便于進行早期的試驗研究。②通過本方法構建的動物模型，群體內整齊度高。③通過本方法構建的動物模型，既具有維生素A臨界缺乏的特點，又具有足夠的抗逆能力。④本方法配制缺乏維生素A的純化日糧，通過飲水調整維生素A的攝入水平，與直接配制低含量維生素A的純化日糧相比較，更加方便靈活，并且可以避免日糧配制后由于維生素A降解而導致的建模不確定性。
具體實施方式
以下是本發明的具體實施例，對本發明的技術方案做進一步作描述，但是本發明的保護范圍并不限于這些實施例。凡是不背離本發明構思的改變或等同替代均包括在本發明的保護范圍之內。
實施例一:肉仔雞維生素A臨界缺乏動物模型的構建 配制缺乏維生素A的純化日糧，包括以下重量份數比的原料:酪蛋白20.0, DL-蛋氨酸3.0，玉米淀粉15.0，蔗糖50.0，纖維素5.0，玉米油5.0，微量元素預混料3.5，維生素預混料1.0。其中，微量元素預混料按美國NRC推薦公布的家禽營養標準配制，維生素預混料除不含維生素A外，其余成分均按美國NRC推薦的家禽營養標準配制。另外配制維生素A微乳溶液，包括以下重量份數比的原料:維生素A油(含量1000000IU/g)0.1，丙二醇10.0，Span6012.0, Tween80 10.0, BHT 0.3，焦亞硫酸鈉0.3，純化水62份。選擇20周齡的羅斯308父母代種雞，飼喂缺乏維生素A的純化日糧，每間隔I周翅靜脈采血測定血清維生素A含量。經過12周的飼喂試驗，種雞血清維生素A水平降低至0.60-0.85 μ mol/L的范圍后，通過維生素A微乳制劑飲水調整其攝入維生素A水平穩定在600IU/kg日糧。在此范圍內，不影響其產蛋率和孵化率，種蛋孵出的雛禽即達到維生素A的臨界缺乏狀態，而又不至于由于體質太弱而發生早期死亡。
由上述實驗的種雞生產的受精種蛋，按常規孵化程序孵化，出殼雛雞的血清VA介于0.35-0.70 μ mol/L,符 合VA臨界缺乏動物模型的要求。
實施例二:肉仔雞維生素A臨界缺乏動物模型的驗證與應用 為了進一步驗證本發明所構建的肉仔雞維生素A臨界缺乏模型，設計如下實驗。
1.材料與方法 1.1試驗動物選取由實施實例I所得到的I日齡羅斯308出殼雛雞120羽，隨機分為3組，每組40羽:I組為臨界缺乏組，飼喂純化飼料，并通過維生素A納米微乳飲水調整日糧VA水平為300IU/kg ；II組為空白組，只飼喂純化日糧組，不補充維生素A ;III組為陽性對照，飼喂純化日糧，并通過維生素A納米微乳飲水調整日糧VA水平為12000IU/kg ;另取羅斯308普通種蛋孵化的雛雞40羽作為陰性對照(IV組)，只飼喂純化日糧。
1.2試驗方法各組動物單籠飼養，自由采食，自由飲水。通過飲水補充維生素的實驗組，維生素加入到適量飲水中，于2-3小時內飲用完畢。飼養過程中各日齡溫濕度控制按羅斯308種禽公司推薦的程序。
1.3樣品采集與指標測定分別于I日齡、7日齡每組隨機取10羽斷頭取血，分別于14日齡、21日齡、28日齡、35日齡、42日齡每組隨機取10羽翅靜脈采血。采集的血液樣品分離血清，通過高效液相色譜法測定維生素A濃度。
2.試驗結果 2.1 一般健康狀況 試驗I組的動物至試驗結束時有2只死亡，剖檢表現出腎臟蒼白，爪、喙無光澤等典型的VA臨界缺乏癥狀。存活的雞只也表現出羽毛松亂、生長遲緩等，符合家禽VA臨界缺乏的癥狀表現。
試驗II組的試驗動物由于飼料中缺乏VA，于第3周開始出現較多死亡，第4周大部分死亡，表現出典型的VA缺乏癥狀。
試驗III組由于通過飲水補充了高水平的VA，健康狀況及生長良好，試驗期內僅僅發生I例死亡。
試驗IV組于第2周開始出現零星死亡，第5周大部分死亡。死亡的動物剖檢表現出典型的VA缺乏癥狀。
2.2血清VA含量 試驗期內各試驗組動物血清VA含量的變化如圖1所示。


:圖1是試驗期內各實驗組動物血清VA含量變化趨勢圖。
由圖1可見，I組動物血清VA含量介于0.50 μ mol/L-0.68 μ mol/L之間，一直保持在相對穩定的水平，并且群體內VA含量水平變異很小，符合家禽VA臨界缺乏動物模型的有關要求。
II組動物血清VA含量下降很快，第2周即降至臨界缺乏水平(0.35 μ mol/L)之下，群體內不同動物個體間血清VA水平變異較小。說明本方法建立的動物模型可用于VA缺乏癥的相關研究。
III組動物血清VA水平逐漸升高，群體內不同動物個體間血清VA水平變異較小，說明本方法建立的動物模型可以對飲食補充的VA做出良好的響應。
IV組動物血清VA含量I日齡時處于較高水平，之后迅速降低，群體內不同個體血清VA水平變異較大，建立模型過程中伴隨大量死亡。
3.實驗結論 通過本方法建立的家禽VA臨界缺乏動物模型，血清VA水平穩定，含量范圍符合VA臨界缺乏的有關指標要求。模型動物健康狀況可滿足一般試驗的要求，建立的動物模型對補充的VA具有良好的響應，有效解決 的目前動物模型構建中所存在的問題。
權利要求
1.一種維生素A臨界缺乏家禽動物模型的構建方法，其特征在于:以缺乏維生素A的純化日糧飼喂產蛋期的種禽降低其血清VA水平至0.60-0.85ymol/L，并通過維生素A溶液飲水使其保持在此水平，所生產的種蛋經孵化得到I日齡的VA臨界缺乏家禽動物模型。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述缺乏維生素A的純化日糧包括以下重量份數比的原料:酪蛋白15.0-25.0, DL-蛋氨酸1.5-4.5，玉米淀粉10.0-18.0,蔗糖40.0-60.0,纖維素4.0-6.0,玉米油4.0-6.0,微量元素預混料3.5，維生素預混料1.0 ;所述維生素A溶液包括以下重量份數比的原料:維生素A油(含量1000000IU/g)0.1，丙二醇 10.0-15.0, Span60 10.0-15.0, Tween80 8.0-12.0, BHT 0.3，焦亞硫酸鈉 0.3，純化水60-70 份。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，配制純化日糧所用的微量元素預混料按美國NRC推薦的家禽營養標準配制，維生素預混料除不含維生素A外，其余成分均按美國NRC推薦的家禽營養標準配制。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，為保持種禽血清維生素A的水平穩定以及動物模型具有足夠健康的體質，通過飲水補充維生素A溶液的劑量，以日糧濃度重量比例計算分別為600IU/kg (種禽)和 300IU/kg (雛雞)。
5.如權利要求1所述家禽動物模型，其特征在于，所述的家禽為蛋雞、肉雞、肉鴨、鵝以及鵪鶉等。
全文摘要
本發明涉及一種維生素A臨界缺乏家禽動物模型的構建方法，以缺乏維生素A的純化日糧飼喂產蛋期的種禽，降低其血清VA水平至0.60-0.85μmol/L，并通過維生素A溶液飲水使其保持在此水平，所生產的種蛋經孵化得到1日齡的維生素A臨界缺乏的家禽動物模型。應用本方法所建立的動物模型既具有維生素A臨界缺乏的特征，又具有足夠強壯的體質存活至5周齡以上，并且具有群體內整齊度高、性能穩定，方便于商業化制備的特點。
文檔編號A23K1/16GK103141433SQ20131007319
公開日2013年6月12日 申請日期2013年3月7日 優先權日2013年3月7日
發明者劉宗柱, 劉文華, 李學民, 張金玲 申請人:青島農業大學