專利名稱：一種長白松試管內(nèi)快速育苗方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物繁殖技術(shù)，即一種長白松試管內(nèi)快速育苗方法。
背景技術(shù)：
在現(xiàn)有技術(shù)中，長白松DdZzw1S sylvestris var.sylvestriformi5(Takenouchi)Chenget C.D.Chu]又稱美人松，松科松屬常綠喬木，是長白松特有種。該種在長白山區(qū)數(shù)量稀少，分布區(qū)域十分狹窄，僅集中分布在長白山國家級自然保護(hù)區(qū)(100余hm2)和安圖縣二道白河鎮(zhèn)(100余hm2),其余散生在二道白河和三道白河沿岸的針闊混交林和針葉林中。被《中國珍稀瀕危保護(hù)植物名錄(第一冊)》定為漸危種，國家三級重點保護(hù)植物。被《國家重點保護(hù)野生植物名錄(第一批)》定為國家一級重點保護(hù)植物。被《中國物種紅色名錄》定為瀕危種(NE)。在《吉林省野生動植物保護(hù)管理暫行條例》一文中被定為省級一類重點保護(hù)植物。長白松材質(zhì)好，易加工，耐腐蝕，不扭不裂，是良好的材用樹種。松節(jié)和花粉入藥，主治風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、大骨節(jié)病、眩暈、胃痛等。也可作東北及華北地區(qū)的綠化及造林樹種。長白松通常以插條扦插或種子繁殖為主，但其種子小、種皮堅硬，種子萌發(fā)率較低；插條扦插繁殖不僅生根率和移栽成活率極低，而且導(dǎo)致野生資源受到滅絕性威脅。長白松大規(guī)模人工栽培、開發(fā)和利用受到極大限制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對上述不足而提供一種利于長白松莖段生根同時頂芽萌發(fā)生長成苗，滿足人工規(guī)模化繁殖和栽培的長白松試管內(nèi)快速育苗方法。本發(fā)明的技術(shù)解決方案是:一種長白松試管內(nèi)快速育苗方法，其步驟如下:
(I)將長白松野生植株主干枝 條水培使其主干芽萌發(fā)生長，處理后留莖段和莖尖作為外植體備用。(2)基本培養(yǎng)基中進(jìn)行莖段生根同時頂芽萌發(fā)生長成苗:基本培養(yǎng)基成分和含量為:100.0 mg.L-1 (NH4) 2S04,650.0 mg.L-1KNO3, 32.0 mg.IZ1CaCl2.2H20, 38.0mg.L-1MgSO4.7H20，90.0 mg.L-1KH2PO4 ；2.8 mg.L-1MnSO4.4H20, 2.2 mg.L-1ZnSO4.7H20,
0.30 mg.L-1KI，1.0 mg.[1H3BO3 ；4.5 mg.L-1FeSO4.7H20,6.0 mg.L-1Na2.EDTA.2H20 ；0.2mg七1煙酸,0.2 mg七1鹽酸卩比卩多醇(VB6)，1.30 mg七1甘氨酸；附加卩引哚丁酸0.07 0.08mg *L 1 + 蔡乙酸 0.03 0.04 mg *L 1 + 玉米素 0.16 0.17 mg *L 1 + 赤霉素 2.90 3.20mg.!/1 ;瓊脂條7.5 g.!/1，添加食用白糖30.0 g.L—1，調(diào)節(jié)pH值至5.8，嫩莖段在光照周期8 h.Cf1、光照強(qiáng)度1000 Ix和溫度24±2°C條件下培養(yǎng)。優(yōu)選吲哚丁酸0.08 mg-T1 +萘乙酸 0.04 mg.L-1 + 玉米素 0.17 mg.L-1 + 赤霉素 3.20 mg.L-1。(3)長白松植株的快速繁殖、煉苗和移栽。步驟(I)中水培前把將長白松野生植株主干枝條置于-10 O °C的冰柜中休眠50CL步驟(I)的處理是指待主干萌發(fā)生長至3.0 4.0 cm時，將主干剪下并切割成段后，摘去嫩針葉及短小葉柄，用5%碳酸鈉溶液浸泡3 min以除去表面油脂，75%乙醇涮洗30s，移至飽和次氯酸鈉溶液中浸泡8 min,無菌水沖洗6次，無菌濾紙吸干表面水分。步驟(3)中的快速繁殖是指按每瓶接種8個莖段，40天為I個周期，每個莖段在I個培養(yǎng)周期內(nèi)平均可切割成4 5段計算，每年有多個周期進(jìn)行擴(kuò)繁。步驟(3)的煉苗和移栽是指種苗擴(kuò)繁到一定數(shù)量后，選取1.00 cm以上的小植株進(jìn)行煉苗移栽，小植株成活率可達(dá)到92.8%以上。本發(fā)明的優(yōu)點是:1、本發(fā)明利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，采用長白松野生植株的主干莖段為材料，在試管內(nèi)調(diào)控主干莖段生根同時主干芽萌發(fā)生長，以達(dá)到莖節(jié)增殖的一步快繁目標(biāo)，利于長白松莖段生根同時頂芽萌發(fā)生長成苗，解決了種子繁殖困難和扦插繁殖生根率和移栽成活率低及野生資源受滅絕性威脅等問題。2、本發(fā)明為進(jìn)一步人工規(guī)模化繁殖和栽培長白松提供優(yōu)質(zhì)種苗。3、成苗率達(dá)99.5%以上；小植株成活率可達(dá)到92.8%以上。下面將結(jié)合實施例對本發(fā)明的實施方式作進(jìn)一步詳細(xì)描述。
具體實施例方式一種長白松試管內(nèi)快速育苗方法:
I材料與方法
1.1材料及處理
11月上旬，取長白松野生植株主干枝條，置于-10 O °c的冰柜(保證芽充分休眠)中休眠50 d后取出進(jìn)行水培促使其主干芽萌發(fā)生長，待主干萌發(fā)生長至3.0 4.0 Cm時，將主干剪下并切割成段(長度為1.5 cm)后，摘去嫩針葉及短小葉柄，用5%碳酸鈉溶液浸泡3min以除去表面油脂，75%乙醇(體積分?jǐn)?shù))涮洗30 S，移至飽和次氯酸鈉溶液中浸泡8 min,無菌水沖洗6次，無菌濾紙吸干表面水分，切除被乙醇和次氯酸鈉毒傷的組織后留1.0 cm的莖段和莖尖作為外植體備用。1.2長白松莖段生根同時頂芽萌發(fā)生長、植株快速和煉苗栽培
基本培養(yǎng)基成分和含量:100.0 mg.L-1 (NH4)2SO4,650.0 mg.T1KNO3, 32.0mg.L-1CaCl2.2H20, 38.0 mg.L-1MgSO4.7H20,90.0 mg.L-1KH2PO4 ；2.8 mg.L-1MnSO4.4H20,2.2 mg.L-1ZnSO4.7H20, 0.30 mg.IZ1KI，1.0 mg.[1H3BO3 ；4.5 mg.L-1FeSO4.7H20, 6.0mg.L-1Na2.EDTA.2H20 ；0.2 mg.L-1 煙酸,0.2 mg.L-1 鹽酸卩比卩多醇(VB6), 1.30 mg.L-1 甘氨酸。培養(yǎng)基中附加吲哚丁酸IAA (0.12 0.17 mg.Γ1)、萘乙酸NAA (0.08 0.13 mg.Γ1)、玉米素 ZT (0.10 0.15 mg.I71)和赤霉素 GA3 (1.70 2.80 mg.I71)，瓊脂條 7.5 g.I71,添加食用白糖30.0 g.!/1，調(diào)節(jié)pH值至5.8，嫩莖段在光照周期8 h ^cT1、光照強(qiáng)度1000 Ix和溫度(24±2) °C條件下培養(yǎng)。為提高長白松嫩莖段生根的速度及生根率和頂芽萌發(fā)生長速度，通過均勻設(shè)計法設(shè)計實驗，選用U12 (124)均勻表，每個處理接種10個主干嫩莖段，重復(fù)3次取平均值，篩選確定影響長白松主干莖段生根同時頂芽萌發(fā)生長的吲哚丁酸、萘乙酸、玉米素和赤霉素最佳濃度配比。主干莖段培養(yǎng)40 d統(tǒng)計生根率和苗的長度，以均出現(xiàn)莖段生根和頂芽萌發(fā)生長的苗為準(zhǔn)。生根率(％)=(生根的莖段數(shù)/接種的莖段總數(shù))χιοο%，生長率(％)=(苗總長度-1.0)/ 1.0X 100%。莖段生根后頂芽萌發(fā)生長至3.00 cm時，在無菌條件下打開培養(yǎng)瓶，將莖段留3個針葉剪下苗干，并將苗干切割成0.5 cm的莖段，再次將小莖段轉(zhuǎn)接到莖段生根同時頂芽萌發(fā)生長培養(yǎng)基中，計算出每個莖段生根同時頂芽萌發(fā)生長的增殖倍數(shù)和周期。當(dāng)種苗擴(kuò)繁到需要數(shù)量后，且小植株長至1.00 cm時，將小植株從培養(yǎng)瓶中取出，放在高錳酸鉀溶液(濃度為5 mg.Γ1)中洗凈根上的瓊脂，將小植株栽植到經(jīng)多菌靈(300倍液)消毒過的腐熟草炭土、腐爛松針和珍珠巖(3: 3:1)的基質(zhì)中，覆蓋塑料薄膜(透性好)進(jìn)行保溫保濕，溫度控制在(20±2) °C，保持相對濕度在70%，自然光照10 h ^cT1,溫度升高時，適當(dāng)通風(fēng)換氣。2結(jié)果與分析
2.1吲哚丁酸、萘乙酸、玉米素和赤霉素對長白松莖段生根的影響數(shù)據(jù)(表I)經(jīng)均勻設(shè)計軟件分析處理后可得回歸方程為7=104 - 278^ - 340為+375為，顯著性水平a = 0.05，復(fù)相關(guān)系數(shù)TP= 0.9942，剩余標(biāo)準(zhǔn)差S = 1.1400，檢驗值=227.9 >臨界值/^.。5，3，8) = 4.066，回歸方程具有顯著性，吲哚丁酸、萘乙酸和玉米素對莖段的生根影響具有顯著性，赤霉素對莖段的生根影響不顯著。通過計算吲哚丁酸、萘乙酸和玉米素對生根的貢獻(xiàn)值和貢獻(xiàn)率可知，G = 214:,17,/17= 24.0% 'U2 = 319，％/"= 35.8% -M3=492,U3/U= 55.3%，說明3個因素對長白松莖段生根的貢獻(xiàn)順序為:玉米素〉萘乙酸〉吲哚丁酸，又因玉米素與生根率呈正相關(guān)，而吲哚丁酸、萘乙酸與生根率呈負(fù)相關(guān)。由此推測，玉米素質(zhì)量濃度高于0.15 mg噸―1的，吲哚丁酸和萘乙酸質(zhì)量濃度分別低于0.12 mg.!/1和0.08 mg噸―1可能生根率更高。為驗證此推測，又以吲哚丁酸質(zhì)量濃度為0.12、0.11、0.10、0.09,0.08,0.07,0.06,0.05,0.04,0.03,0.02 和 0.01 mg.Γ1，萘乙酸質(zhì)量濃度為 0.08、0.07,0.06,0.05,0.04,0.03,0.02和0.01 mg.Γ1，玉米素為 0.15,0.16,0.17,0.18,0.19和0.20 mg.!/1開展12個水平的驗證試驗，重復(fù)3次。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，玉米素質(zhì)量濃度為(0.15 0.17 mg.L—1)，吲哚丁酸質(zhì)量濃度為(0.07 0.09 mg.L—1)和萘乙酸質(zhì)量濃度為(0.03
0.05 mg.Γ1)時，長白松嫩莖段生根率最高，平均生根率達(dá)98.6%以上。均高于表I所列12個處理的生根率。表I影響長白松節(jié)增殖因素篩選的U12(124)試驗設(shè)計與結(jié)果。
權(quán)利要求
1.一種長白松試管內(nèi)快速育苗方法，其特征在于步驟如下: (1)將長白松野生植株主干枝條水培使其主干芽萌發(fā)生長，處理后留莖段和莖尖作為外植體備用； (2)基本培養(yǎng)基中進(jìn)行莖段生根同時頂芽萌發(fā)生長成苗:基本培養(yǎng)基成分和含量為:100.0 mg.L^1(NH4)2SO4, 650.0 mg.L^1KNO3, 32.0 mg.L^1CaCl2.2H20,38.0mg.L-1MgSO4.7H20，90.0 mg.L-1KH2PO4 ；2.8 mg.L-1MnSO4.4H20, 2.2 mg.L-1ZnSO4.7H20,0.30 mg.L-1KI，1.0 mg.[1H3BO3 ；4.5 mg.L-1FeSO4.7H20，6.0 mg.L-1Na2.EDTA.2H20 ；0.2 mg.171煙酸,0.2 mg七1鹽酸批P多酉享，1.30 mg.171甘氨酸；附加Π引哚丁酸0.07 0.08mg.L 1 + 蔡乙酸 0.03 0.04 mg.L 1 + 玉米素 0.16 0.17 mg.L 1 + 赤霉素 2.90 3.20 mg.L—1 ;瓊脂條7.5 g. Λ添加食用白糖30.0 g.L—1，調(diào)節(jié)pH值至5.8，嫩莖段在光照周期8 h.Cf1、光照強(qiáng)度1000 Ix和溫度24±2°C條件下培養(yǎng)； (3)長白松植株的快速繁殖、煉苗和移栽。
2.按照權(quán)利要求1所述的一種長白松試管內(nèi)快速育苗方法，其特征在于步驟(I)中水培前把將長白松野生植株主干枝條置于_10 O °C的冰柜中休眠50 do
3.按照權(quán)利要求1所述的一種長白松試管內(nèi)快速育苗方法，其特征在于步驟(I)的處理是指待主干萌發(fā)生長至3.0 4.0 cm時，將主干剪下并切割成段后，摘去嫩針葉及短小葉柄，用5%碳酸鈉溶液浸泡3 min以除去表面油脂，75%乙醇涮洗30 S，移至飽和次氯酸鈉溶液中浸泡8 min,無菌水沖洗6次,無菌濾紙吸干表面水分。
4.按照權(quán)利要求1所述的一種長白松試管內(nèi)快速育苗方法，其特征在于步驟(3)中的快速繁殖是指按每瓶接種8個莖段，40天為I個周期，每個莖段在I個培養(yǎng)周期內(nèi)平均可切割成4 5段計算，每 年有多個周期進(jìn)行擴(kuò)繁。
5.按照權(quán)利要求1所述的一種長白松試管內(nèi)快速育苗方法，其特征在于步驟(3)的煉苗和移栽是指種苗擴(kuò)繁到一定數(shù)量后，選取1.00 Cm以上的小植株進(jìn)行煉苗移栽，小植株成活率可達(dá)到92.8%以上。
6.按照權(quán)利要求1所述的一種長白松試管內(nèi)快速育苗方法，其特征在于步驟(2)中吲哚丁酸 0.08 mg.I/1 + 萘乙酸 0.04 mg.L-1 + 玉米素 0.17 mg.L-1 + 赤霉素 3.20 mg.L-1O
全文摘要
本發(fā)明涉及一種植物繁殖技術(shù)，即一種長白松試管內(nèi)快速育苗方法。其步驟如下(1)將長白松野生植株主干枝條水培，處理后留莖段和莖尖作為外植體備用；(2)基本培養(yǎng)基＋吲哚丁酸0.07～0.08mg·L-1＋萘乙酸0.03～0.04mg·L-1＋玉米素0.16～0.17mg·L-1＋赤霉素2.90～3.20mg·L-1；(3)長白松植株的快速繁殖、煉苗和移栽。采用長白松野生植株的主干莖段為材料，在試管內(nèi)調(diào)控主干莖段生根同時主干芽萌發(fā)生長，以達(dá)到莖節(jié)增殖的一步快繁目標(biāo)，解決了種子繁殖困難和扦插繁殖生根率和移栽成活率低及野生資源受滅絕性威脅等問題，為進(jìn)一步人工規(guī)模化繁殖和栽培長白松提供優(yōu)質(zhì)種苗。
文檔編號A01G31/00GK103109728SQ20131007445
公開日2013年5月22日 申請日期2013年3月10日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月10日
發(fā)明者顧地周, 顧川岳, 姜云天, 朱俊義, 程廣有, 潘雨, 禚玲玲, 張學(xué)士, 王秋爽, 付航 申請人:通化師范學(xué)院