一種千日紅再生植株的誘導(dǎo)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種千日紅再生植株的誘導(dǎo)方法，包括無(wú)菌實(shí)生苗培育、接種、愈傷組織誘導(dǎo)、愈傷組織增殖、再生芽誘導(dǎo)、再生根誘導(dǎo)、煉苗、移植等步驟。以千日紅無(wú)菌實(shí)生苗的下胚軸作為外植體，不但可以成功的誘導(dǎo)出愈傷組織，并且，愈傷組織可以分化成再生苗，并進(jìn)一步分化可以形成根從而形成完整的植株；愈傷組織可以繼續(xù)不斷的增殖，不用再耗用千日紅外植體即可繼續(xù)源源不斷的為千日紅提供豐富的種質(zhì)資源。
【專利說(shuō)明】一種千日紅再生植株的誘導(dǎo)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種千日紅再生植株的誘導(dǎo)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]千日紅(Gomphrena globosa)別名火球花、紅光球、千年紅,原產(chǎn)美洲巴西，巴拿馬和危地馬拉，我國(guó)長(zhǎng)江以南普遍種植。千日紅為一年生直立草本，高約20~60厘米，全株有白色硬毛；花期7~10月，花朵紫紅色，排成頂生圓球形頭狀花序；苞片多為紫紅色。 [0003]千日紅花序及全草皆可入藥，具有清肝、散結(jié)、止咳和定喘之效。千日紅多用種子繁殖，由于其種子體積太小，采收不易，即使采收到的種子再進(jìn)行播種繁殖也很難保證其具有母株原有的優(yōu)良性狀。因此，利用組培技術(shù)對(duì)千日紅進(jìn)行快繁，不僅可在短期內(nèi)大量繁殖，加速推廣應(yīng)用，還可對(duì)其進(jìn)行種質(zhì)保存，是行之有效的途徑。
[0004]目前，千日紅的組織培養(yǎng)技術(shù)并不成熟，可借鑒的技術(shù)還處于初級(jí)摸索階段，雖然中國(guó)專利CN102630568A公開(kāi)了一種千里紅試管花及其培養(yǎng)方法中應(yīng)用了組織培養(yǎng)技術(shù)，但是，其主要目的是解決千日紅試管難以開(kāi)花的技術(shù)問(wèn)題，開(kāi)花率達(dá)到86%。目前缺乏對(duì)千日紅完整組織培養(yǎng)技術(shù)的研究，也沒(méi)有一套完整的千日紅組織培養(yǎng)體系。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種千日紅再生植株的誘導(dǎo)方法，建立完整的組織培養(yǎng)體系，為千日紅人工栽培提供充足的種質(zhì)資源。
[0006]為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
一種千日紅再生植株的誘導(dǎo)方法，包括如下步驟:
(1)無(wú)菌實(shí)生苗培育:千日紅種子清洗干凈后，于體積濃度為75%的酒精消毒30S，再用體積濃度為3%的次氯酸鈉消毒5min，無(wú)菌水沖洗3~5次后，接種到無(wú)菌苗培養(yǎng)基上；所述無(wú)菌苗培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，IL培養(yǎng)基中添加蔗糖30g、瓊脂6g、NAA3mg ；
(2)接種:將實(shí)生苗從培養(yǎng)基中取出，無(wú)菌水沖洗干凈后，以無(wú)菌實(shí)生苗的下胚軸作為外植體，將下胚軸切成長(zhǎng)度為0.2~0.5cm的切段，將切段接種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；
(3)愈傷組織誘導(dǎo):培養(yǎng)條件為全黑暗培養(yǎng)、溫度20~22°C，培養(yǎng)4-6周至愈傷組織形
成；
(4)愈傷組織增殖:將步驟3中獲得愈傷組織轉(zhuǎn)移到增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)1000~2000Lx、光照時(shí)間12h、溫度20~22°C，每周將愈傷組織轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基中，共轉(zhuǎn)移四次；
(5)再生芽誘導(dǎo):將步驟4中第四次轉(zhuǎn)移培養(yǎng)一周后的愈傷組織作為誘導(dǎo)再生芽的種源，無(wú)菌條件下，將愈傷組織接種于再生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，于光強(qiáng)2000~3000LX、光照時(shí)間12h、溫度20~22°C下誘導(dǎo)芽的形成；
(6)再生根的誘導(dǎo):將步驟5中獲得的再生芽用無(wú)菌水沖洗干凈后接種于再生根培養(yǎng)基中，于光強(qiáng)1000~2000Lx、光照時(shí)間16h、溫度20~22°C下誘導(dǎo)根的形成；(7)煉苗、移植:將步驟6中獲得再生植株轉(zhuǎn)移到蛭石中，于室內(nèi)培養(yǎng)7~IOd后轉(zhuǎn)移到大田培養(yǎng)。
[0007]進(jìn)一步的，所述的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為，以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，IL培養(yǎng)基中添加鹿糖 30g、瓊脂 6g、2, 4-D I ~4 mg、IAA 0.5 ~1.5mg、ZT 0.5 ~2mg、KT
0.5 ~2mg0
[0008]進(jìn)一步的，所述的愈傷組織增殖培養(yǎng)基的配方為，以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，IL培養(yǎng)基中添加鹿糖40g、瓊脂6g、IAA 0.1~0.5mg、ZT 0.1~0.5mg、KT 0.1~0.5mg、抗壞血酸20~30mg。
[0009]進(jìn)一步的，所述的再生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為，以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，IL培養(yǎng)基中添加鹿糖30g、瓊月旨6g、NAA I~4 mg、IAA 0.5~1.5mg、6_BA 0.5~2mg。
[0010]進(jìn)一步的，所述的再生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為，以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，IL培養(yǎng)基中添加鹿糖30g、瓊月旨7g、IAA I~3mg、ZT 0.3~0.8mg、KT 0.3~0.8mg。
[0011]本發(fā)明的有益效果是:以千日紅無(wú)菌實(shí)生苗的下胚軸作為外植體，不但可以成功的誘導(dǎo)出愈傷組織，并且，愈傷組織可以分化成再生苗，并進(jìn)一步分化可以形成根從而形成完整的植株；愈傷組織可以繼續(xù)不斷的增殖，不用再耗用千日紅外植體即可繼續(xù)源源不斷的為千日紅提供豐富的種質(zhì)資源。
【具體實(shí)施方式】
[0012]以下通過(guò)實(shí)施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明的有益效果:
實(shí)施例1:
一種千日紅再生植株的誘導(dǎo)方法，包括如下步驟:
(1)無(wú)菌實(shí)生苗培育:千日紅種子清洗干凈后，于體積濃度為75%的酒精消毒30S，再用體積濃度為3%的次氯酸鈉消毒5min，無(wú)菌水沖洗3~5次后，接種到無(wú)菌苗培養(yǎng)基上；所述無(wú)菌苗培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，IL培養(yǎng)基中添加蔗糖30g、瓊脂6g、NAA3mg ；
(2)接種:將實(shí)生苗從培養(yǎng)基中取出，無(wú)菌水沖洗干凈后，以無(wú)菌實(shí)生苗的下胚軸作為外植體，將下胚軸切成長(zhǎng)度為0.2~0.5cm的切段，將切段接種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為，以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，IL培養(yǎng)基中添加蔗糖30g、瓊脂6g、2，4~D Imgλ IAA lmg、ZT 0.5mg、KT 0.5mg ；
(3)愈傷組織誘導(dǎo):培養(yǎng)條件為全黑暗培養(yǎng)、溫度20~22°C，培養(yǎng)4-6周至愈傷組織形
成；
(4)愈傷組織增殖:將步驟3中獲得愈傷組織轉(zhuǎn)移到增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)1000~2000Lx、光照時(shí)間12h、溫度20~22°C，每周將愈傷組織轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基中，共轉(zhuǎn)移四次；組織增殖培養(yǎng)基的配方為，以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，IL培養(yǎng)基中添加蔗糖40g、瓊月旨 6g、IAA 0.3mg、ZT 0.2mg、KT 0.2mg、抗壞血酸 20mg ；
(5)再生芽誘導(dǎo):將步驟4中第四次轉(zhuǎn)移培養(yǎng)一周后的愈傷組織作為誘導(dǎo)再生芽的種源，無(wú)菌條件下，將愈傷組織接種于再生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，于光強(qiáng)2000~3000LX、光照時(shí)間12h、溫度20~22°C下誘導(dǎo)芽的形成；再生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為，以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，IL培養(yǎng)基中添加鹿糖30g、瓊脂6g、NAA I mg、IAA lmg、6_BA lmg ；
(6)再生根的誘導(dǎo):將步驟5中獲得的再生芽用無(wú)菌水沖洗干凈后接種于再生根培養(yǎng)基中，于光強(qiáng)1000~2000LX、光照時(shí)間16h、溫度20~22°C下誘導(dǎo)根的形成；再生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為，以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，IL培養(yǎng)基中添加蔗糖30g、瓊脂7g、IAA 2mg、ZT 0.5mg、KT 0.5mg ；
(7)煉苗、移植:將步驟6中獲得再生植株轉(zhuǎn)移到蛭石中，于室內(nèi)培養(yǎng)7~IOd后轉(zhuǎn)移到大田培養(yǎng)。
[0013]共接種100塊胚軸切段，其中81塊形成愈傷組織；共接種100瓶愈傷組織進(jìn)行芽誘導(dǎo)，其中有54瓶有芽形成，共形成芽102個(gè)，這102個(gè)芽中有89個(gè)形成了根；89株再生植株轉(zhuǎn)移到大田培養(yǎng)4周后，有75株成活。[0014]實(shí)施例2:
實(shí)施方法與實(shí)施例1相同，所不同的是:
所述的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為，以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，IL培養(yǎng)基中添加蔗糖 30g、瓊月旨 6g、2, 4~D 1.5mg、IAA 1.5mg、ZT 0.5mg、KT lmg。
[0015]所述的愈傷組織增殖培養(yǎng)基的配方為，以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，IL培養(yǎng)基中添加鹿糖 40g、瓊脂 6g、IAA 0.2mg、ZT 0.3mg、KT 0.3mg、抗壞血酸 30mg。
[0016]所述的再生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為，以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,IL培養(yǎng)基中添加鹿糖 30g、瓊脂 6g、NAA 2 mg、IAA lmg、6_BA 1.5mg。
[0017]所述的再生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為，以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,IL培養(yǎng)基中添加鹿糖 30g、瓊月旨 7g、IAA 1.5mg、ZT 0.5mg、KT 0.5mg。
[0018]共接種100塊胚軸切段，其中78塊形成愈傷組織；共接種100瓶愈傷組織進(jìn)行芽誘導(dǎo)，其中有50瓶有芽形成，共形成芽88個(gè)，這88個(gè)芽中有69個(gè)形成了根；69株再生植株轉(zhuǎn)移到大田培養(yǎng)4周后，有60株成活。
[0019]實(shí)施例3:
實(shí)施方法與實(shí)施例1相同，所不同的是:
所述的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為，以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，IL培養(yǎng)基中添加蔗糖 30g、瓊月旨 6g、2, 4~D 2mg、IAA 1.5mg、ZT 0.5mg、KT lmg。
[0020]所述的愈傷組織增殖培養(yǎng)基的配方為，以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，IL培養(yǎng)基中添加鹿糖 40g、瓊脂 6g、IAA 0.5mg、ZT 0.2mg、KT 0.2mg、抗壞血酸 30mg。
[0021]所述的再生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為，以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,IL培養(yǎng)基中添加鹿糖 30g、瓊脂 6g、NAA 2 mg、IAA lmg、6_BA 2mg。
[0022]所述的再生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為，以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，IL培養(yǎng)基中添加鹿糖 30g、瓊脂 7g、IAA 2mg、ZT 0.8mg、KT 0.8mg。
[0023]共接種100塊胚軸切段，其中70塊形成愈傷組織；共接種100瓶愈傷組織進(jìn)行芽誘導(dǎo)，其中有65瓶有芽形成，共形成芽94個(gè)，這94個(gè)芽中有77個(gè)形成了根；77株再生植株轉(zhuǎn)移到大田培養(yǎng)4周后，有70株成活。
[0024]上述實(shí)例只是為說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思以及技術(shù)特點(diǎn)，并不能以此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。凡根據(jù)本發(fā)明的實(shí)質(zhì)所做的等效變換或修飾，都應(yīng)該涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種千日紅再生植株的誘導(dǎo)方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)無(wú)菌實(shí)生苗培育:千日紅種子清洗干凈后，于體積濃度為75%的酒精消毒30S，再用體積濃度為3%的次氯酸鈉消毒5min，無(wú)菌水沖洗3~5次后，接種到無(wú)菌苗培養(yǎng)基上；所述無(wú)菌苗培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，IL培養(yǎng)基中添加蔗糖30g、瓊脂6g、NAA3mg ； (2)接種:將實(shí)生苗從培養(yǎng)基中取出，無(wú)菌水沖洗干凈后，以無(wú)菌實(shí)生苗的下胚軸作為外植體，將下胚軸切成長(zhǎng)度為0.2~0.5cm的切段，將切段接種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上； (3)愈傷組織誘導(dǎo):培養(yǎng)條件為全黑暗培養(yǎng)、溫度20~22°C，培養(yǎng)4-6周至愈傷組織形成； (4)愈傷組織增殖:將步驟3中獲得愈傷組織轉(zhuǎn)移到增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)1000~2000Lx、光照時(shí)間12h、溫度20~22°C，每周將愈傷組織轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基中，共轉(zhuǎn)移四次； (5)再生芽誘導(dǎo):將步驟4中第四次轉(zhuǎn)移培養(yǎng)一周后的愈傷組織作為誘導(dǎo)再生芽的種源，無(wú)菌條件下，將愈傷組織接種于再生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，于光強(qiáng)2000~3000LX、光照時(shí)間12h、溫度20~22°C下誘導(dǎo)芽的形成； (6)再生根的誘導(dǎo):將步驟5中獲得的再生芽用無(wú)菌水沖洗干凈后接種于再生根培養(yǎng)基中，于光強(qiáng)1000~2000Lx、光照時(shí)間16h、溫度20~22°C下誘導(dǎo)根的形成； (7)煉苗、移植:將步驟6中獲得再生植株轉(zhuǎn)移到蛭石中，于室內(nèi)培養(yǎng)7~IOd后轉(zhuǎn)移到大田培養(yǎng)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的千日紅再生植株的誘導(dǎo)方法，其特征在于，所述的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為，以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，IL培養(yǎng)基中添加蔗糖30g、瓊脂6g、2，4-DI ~4 mg、IAA 0.5 ~1.5mg、ZT 0.5 ~2mg、KT 0.5 ~2mg。`
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的千日紅再生植株的誘導(dǎo)方法，其特征在于，所述的愈傷組織增殖培養(yǎng)基的配方為，以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，IL培養(yǎng)基中添加蔗糖40g、瓊脂6g、IAA0.1 ~0.5mg、ZT 0.1 ~0.5mg、KT 0.1 ~0.5mg、抗壞血酸 20 ~30mg。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的千日紅再生植株的誘導(dǎo)方法，其特征在于，所述的再生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為，以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，IL培養(yǎng)基中添加蔗糖30g、瓊脂6g、NAAI ~4 mg、IAA 0.5 ~1.5mg、6_BA 0.5 ~2mg。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的千日紅再生植株的誘導(dǎo)方法，其特征在于，所述的再生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為，以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，IL培養(yǎng)基中添加蔗糖30g、瓊脂7g、IAAI ~3mg、ZT 0.3 ~0.8mg、KT 0.3 ~0.8mg。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK103718955SQ201310584721
【公開(kāi)日】2014年4月16日 申請(qǐng)日期:2013年11月20日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月20日
【發(fā)明者】張明 申請(qǐng)人:青島佰眾化工技術(shù)有限公司