一種馬屬動物精液低溫保存稀釋液的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種馬屬動物精液低溫保存稀釋液，其中，稀釋液包括A液和脫脂奶，A液包括葡萄糖、棉子糖、D-乳糖單水合物、檸檬酸三鈉、檸檬酸鉀和HEPES。稀釋液的配制方法為：稱取A液的各種組分放入無菌燒杯中，加雙蒸水溶解后，定容、過濾、分裝、滅菌、密封，即得A液，向A液加入等量的脫脂奶混合均勻。通過向稀釋液中加入青霉素和雙氫鏈霉素即可，其適用于馬屬動物精液低溫保存。本發明的有益效果是：配制簡單，使用方便，馬屬動物精液的保存效果好，適于規模化生產和應用。
【專利說明】一種馬屬動物精液低溫保存稀釋液
【技術領域】
[0001]本發明涉及動物精液保存的【技術領域】，特別涉及一種馬屬動物精液低溫保存稀釋液。
【背景技術】
[0002]精液稀釋是向精液中加入適宜精子體外存活并保持精子活力的稀釋保護液，其目的在于擴大精液的容量，延長精子的存活時間，保證精子的活率和精子頂體完整率，增強受精能力，充分提高精液的利用率和優良公畜配種的效率。精液稀釋應在采集后盡快進行，不經稀釋的精液不利于精子存活，特別是精液處于溫度較低時(20°C以下)，精子受低溫打擊，易出現冷休克。只有經過稀釋的精子才適于保存、運輸及輸精等，所以精液稀釋處理是動物人工授精中的一個重要技術環節。
[0003]目前，我國馬屬動物的繁育主要以自然交配和人工輔助兩種方式進行，但是在自然交配或人工輔助交配的情況下，一般一匹種公馬只能配20-30匹母馬，優秀種公馬的利用率嚴重受限。因此，精液稀釋、保存和人工授精技術的發展和應用就顯得非常重要。
[0004]近年來，家畜精液稀釋液的研究不斷取得可喜的成果，尤其是在牛、羊等反芻動物方面。馬屬動物精液稀釋液的研究也日漸成效，但是仍然存在諸多弊端，主要表現在精液稀釋液對精子活力的保存時間短，比如常溫保存時間不足24小時(活率低于0.3)，低溫保存時間不足96小時(活率低于0.3);受胎率低；精液稀釋液需新鮮，必須現用現配，所以操作繁瑣復雜。因此開發出保存時間長，保存效果好，成本低，受胎效果好的精液稀釋液對人工授精而言有重要的經濟效益。

【發明內容】

`[0005]為了解決傳統的精液稀釋液對精子活力的保存時間短、受胎率低及現用現配等問題，本發明提供了一種馬屬動物精液低溫保存稀釋液。
[0006]為了實現上述發明目的，本發明提供了一種馬屬動物精液低溫保存稀釋液，所述稀釋液包括A液和脫脂奶，所述A液包括葡萄糖、棉子糖、D-乳糖單水合物、檸檬酸三鈉、檸檬酸鉀和HEPES。
[0007]其中，所述A液和所述脫脂奶的混合體積比例優選為1:1。
[0008]每500ml的所述A液中，各組分的含量為:葡萄糖22~26g、棉子糖1.5^1.7g、D_乳糖單水合物1.5~1.7g、檸檬酸三鈉Na3C6H5O7.2Η20 0.2~0.25g、檸檬酸鉀0.35~0.45g、HEPES
4.6~4.8g0
[0009]所述葡萄糖為無水葡萄糖，其分子式為C6H12O6 ;所述棉子糖的分子式為C18H32O6.5H20 ;所述D-乳糖單水合物的分子式為C12H22O11.H2O ;所述檸檬酸鉀的分子式為K3C6H5O7.H2O ;所述 HEPES 的分子式為 C8H18N2O4S15
[0010]本發明實施例提供的技術方案帶來的有益效果是:在低溫保存的條件下，使用本發明馬屬動物精液低溫保存稀釋液進行精液的稀釋保存，效果明顯優于傳統的稀釋液，馬屬動物精液的保存效果好，延長了稀釋精液中精子的存活時間，保證精子的活率和精子頂體完整率，增強受精能力，充分提高了精液的利用率和優良公畜配種的效率；本發明的稀釋液配制簡單，使用方便，可置于0-5°C保存，隨用隨取且可一液多用，省時省力，適于規模化生產和應用。
【具體實施方式】
[0011]下面結合實施例對本發明做進一步描述。
[0012]實施例1
稱取葡萄糖24g、棉子糖1.6g、D-乳糖單水合物1.6g、檸檬酸三鈉Na3C6H5O7.2H20
0.24g、檸檬酸鉀0.4g和HEPES 4.7g，放入無菌燒杯中，加雙蒸水溶解后，定容、過濾、分裝、滅菌、密封，即得A液；將經過嚴格滅菌、密封的A液標記配制時間，置于(T5°C保存，隨用隨取；取適量的A液加入等量體積的脫脂奶混合均勻后，得到本實施例1的稀釋液。
[0013]向稀釋液中分別按1000單位/ml的量添加青霉素和1000ug/ml的量添加雙氫鏈霉素混合均勻后，得到本實施例1的稀釋液。
[0014]實施例1
稱取葡萄糖23g、棉子糖1.7g、D-乳糖單水合物1.5g、檸檬酸三鈉Na3C6H5O7.5H20
0.27g、檸檬酸鉀0.35g和HEPES 4.6g，放入無菌燒杯中，加雙蒸水溶解后，定容、過濾、分裝、滅菌、密封，即得A液；將經過嚴格滅菌、密封的A液標記配制時間，置于(T5°C保存，隨用隨取；取適量的A液加入等量體積的脫脂奶混合均勻后，得到本實施例1稀釋液。
[0015]向稀釋液中分別按1000單位/ml的量添加青霉素和1000ug/ml的量添加雙氫鏈霉素混合均勻后，得到本實施例1的稀釋液。
[0016]對比試驗I
將傳統的稀釋液葡萄糖-卵黃稀釋液(對照組I)和葡萄糖-酒石酸甲鈉-卵黃稀釋液(對照組2)，與實施例1的稀釋液(實施例組I)分別稀釋馬的精液。其中，將實施例1的稀釋液置于37°C恒溫水浴鍋中I小時后，按體積比1:10對馬的新鮮精液(活率> 0.8)進行稀釋，然后將稀釋后的精液置于低溫((T5°C)下保存。在0-120小時內觀察對照組1、對照組2和實施例組I的精子活力，每隔24個小時測定精子的活率，結果如表2所示。
[0017]表1不同稀釋液低溫保存((T5°C)精液對馬精子活率的影響
【權利要求】
1.一種馬屬動物精液低溫保存稀釋液，其特征在于，所述稀釋液包括A液和脫脂奶，所述A液包括葡萄糖、棉子糖、D-乳糖單水合物、檸檬酸三鈉、檸檬酸鉀和HEPES。
2.根據權利要求1所述的馬屬動物精液低溫保存稀釋液，其特征在于，所述A液和所述脫脂奶的混合體積比例為1:1。
3.根據權利要求1所述的馬屬動物精液低溫保存稀釋液，其特征在于，每500ml的所述A液中，各組分的含量為:葡萄糖22~26g、棉子糖1.5~1.7g、D-乳糖單水合物1.5~1.7g、檸檬酸三鈉 Na3C6H5O7.2H20 0.2~0.25g、檸檬酸鉀 0.35~0.45g、HEPES 4.6~4.8g。
4.根據權利要求1-3任意一項所述的馬屬動物精液低溫保存稀釋液，其特征在于，所述葡萄糖為無水葡萄 糖，其分子式為C6H12O6 ;所述棉子糖的分子式為C18H32O6.5H20 ;所述D-乳糖單水合物的分子式為C12H22O11.H2O ;所述檸檬酸鉀的分子式為K3C6H5O7.H2O ;所述HEPES 的分子式為 C8H18N2O4S15
【文檔編號】A01N1/02GK103749433SQ201310588496
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2013年11月21日 優先權日:2013年11月21日
【發明者】鄒敬清, 榮美潔, 孫騰飛 申請人:青島德瑞駿發生物科技有限公司, 伊犁德瑞駿發生物科技有限公司, 青島德瑞鰲藍馬術有限公司