牛樟芝扦插枝存活率高的海綿液體培養基及其應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了牛樟芝扦插枝存活率高的海綿液體培養基，是在海綿上面均勻開有15個口徑為0.8cm，深度為0.5cm大小的V形孔，將海綿塊平放在培養瓶底部，開孔的一面朝上，直接用自來水配制藥品并經定容調好PH值即成液體培養基，適量分裝到放有海綿的培養瓶中，使營養液剛剛侵泡完海綿塊即可；液體培養基的組分組成為PDB培養基+MY培養基。本發明的有益效果為：本發明提供的海綿液體培養基，具有以下優點：1、牛樟芝組培材料能充分吸收到營養成份，提高品質及產量，增殖率可達5-6倍；2、海綿可重復利用，且液體培養基分裝配制比較方便，瓶子等用具容易清洗干凈；3、省去購買瓊脂粉的費用，降低生產成本。
【專利說明】牛樟芝扦插枝存活率高的海綿液體培養基及其應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及植物組培苗快繁領域，具體涉及牛樟芝扦插枝存活率高的海綿液體培養基及其應用。
【背景技術】
[0002]樟芝又名牛樟燕，屬于非裙菌目、多孔科、多年生蕈菌類，學名為(Antrodiacamphorata),是1990年才被生化界發表的新種。其生長區域為臺灣山區海拔450-2000公尺山林間，只生長在臺灣特有百年以上的牛樟樹樹干腐朽之心材內壁，或枯死倒伏之牛樟樹木材潮濕表面，其采集極為不易。目前，一般牛樟芝扦插枝的存活率為20%。

【發明內容】

[0003]本發明的目的就是針對上述現有技術中的缺陷，提供了一種可提高牛樟芝扦插枝存活率的海綿液體培養基。
[0004]為了實現上述目的，本發明提供的技術方案為:牛樟芝扦插枝存活率高的海綿液體培養基，是選擇圓柱形的耐高溫過濾海綿，直徑與透氣蓋螺紋瓶底部大小一致，海綿厚度為1cm，在海綿上面均勻開有15個口徑為0.8cm,深度為0.5cm大小的V形孔，將海綿塊平放在培養瓶底部，開孔的一面朝上，直接用自來水配制藥品并經定容調好PH值即成液體培養基，適量分裝到放有海綿的培養瓶中，使營養液剛剛侵泡完海綿塊即可；所述液體培養基的組分組成為B5培養基+TDZ植物生長調節劑0.8mg/L+萘乙酸0.2-0.8mg/L。
[0005]本發明的第二個目的是提供了上述海綿液體培養基在牛樟芝扦插枝培育中的應用。
`[0006]進一步的，上述的應用，包括以下步驟:
1)將上述的的分裝好的海綿液體培養基經高壓滅菌，滅菌溫度為121-123°c，滅菌壓力為0.11-0.13MP，滅菌時間為22-25分鐘，得到滅菌后培養基；
2)培養材料的接種:無菌狀態下，將牛樟芝培養材料分切成單芽分別插種到滅菌后的海綿液體培養基的V形孔中，進行快速增殖培養，培養時間為30-35天，增殖率為5-6倍；
3)增殖材料的轉接:將步驟2)中增殖后的材料挾出分切再接種到新鮮的液體培養基中繼續進行增殖培養；此后當培養到30-35天時，再次將材料進行分切更換到新鮮的液體培養基中進行增殖培養；
4)生根培養:將步驟3)得到的增殖培養后的牛樟芝增殖材料轉接到一定數量后，將其分切成單株轉接到添加有瓊脂粉的固體培養基中進行生根培養，經過2~3個月培養煉苗后即得到牛樟芝組培苗移植株。
[0007]本發明的有益效果為:本發明提供的海綿液體培養基，具有以下優點:
1、牛樟芝組培材料能充分吸收到營養成份，提高品質及產量，增殖率可達5-6倍，存活率可達80% ；
2、海綿可重復利用，且液體培養基分裝配制比較方便，瓶子等用具容易清洗干凈；3、省去購買瓊脂粉的費用，降低生產成本。
【具體實施方式】
[0008]實施例1:
(一)海綿液體培養基的制作:
選擇圓柱形的耐高溫過濾海綿，直徑與透氣蓋螺紋瓶底部大小一致，海綿厚度為Icm即可，在海綿上面均勻開有15個口徑為0.8cm，深度為0.5cm大小的V形孔，將海綿塊平放在培養瓶底部，開孔的一面朝上。因不加瓊脂粉，可直接用自來水配制藥品并經定容調好PH值即成液體培養基，最后適量分裝到放有海綿的培養瓶中，使營養液剛剛侵泡完海綿塊即可；
(二)培養基的滅菌:
由于選用的海綿為耐高溫材料，主要成分為聚氨酯，具有抗腐蝕、無毒副作用、耐高溫(可達200°C)、強度高(回彈性好)、吸水性極強，可回收利用等優點，經過多次高壓滅菌后不變型仍可重復使用；分裝好的培養基經高壓滅菌(滅菌溫度為121-123度，壓力為
0.ll-ο.13MP，時間為22-25分鐘)，最后將滅菌好的液體培養基放到培養基儲藏室備用；
(三)培養材料的接種:
在無菌工作臺上將培養材料分切成單芽分別插種到海綿液體培養基的V形孔中，由于海綿有很好的回彈性和吸水性，對插在V形孔中的培養材料有一定的固定作用和保濕功能，利于培養物的生長和養分的吸收；
(四)培養材料的增殖培養:
培養在海綿液體培養基上的材料，由于液體培養基中分子或離子運動較快，其基部能夠充分接觸到營養液并能較好的吸收養分，同時也將自身切口分泌出來的醌類有害物質稀釋到液體培養基中，減少褐化的產生，從而達到快速增殖的效果，一般培養30-35天后增殖率可達到5-6倍；
(五)增殖材料的轉接:
當增殖材料在液體培養基中培養30-35天后，培養材料不斷地增殖生長，已經吸收了大部分的營養成份和水分，同時液體培養基中也積累了一定的醌類等有害成分；此時應將增殖后的材料挾出分切再接種到新鮮的液體培養基中繼續進行增殖培養，此后當培養到30-35天時，不斷地將材料進行分切更換到新鮮的液體培養基中進行增殖培養，即可使生產達到一定數量和規模的材料；
(六)生根培養:
牛樟芝增殖材料轉接到生產所需的數量后，將其分切成單株轉接到添加有瓊脂粉的固體培養基中進行生根培養，經過2~3個月培養煉苗后即可出瓶移植。
[0009]最后應說明的是:以上所述僅為本發明的優選實施例而已，并不用于限制本發明，盡管參照前述實施例對本發明進行了詳細的說明，對于本領域的技術人員來說，其依然可以對前述各實施例所記載的技術方案進行修改，或者對其中部分技術特征進行等同替換。凡在本發明的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。
【權利要求】
1.牛樟芝扦插枝存活率高的海綿液體培養基，其特征在于，是選擇圓柱形的耐高溫過濾海綿，直徑與透氣蓋螺紋瓶底部大小一致，海綿厚度為1cm，在海綿上面均勻開有15個口徑為0.8cm，深度為0.5cm大小的V形孔，將海綿塊平放在培養瓶底部，開孔的一面朝上，直接用自來水配制藥品并經定容調好PH值即成液體培養基，適量分裝到放有海綿的培養瓶中，使營養液剛剛侵泡完海綿塊即可；所述液體培養基的組分組成為PDB培養基+MY培養基。
2.根據權利要求1所述的海綿液體培養基在牛樟芝扦插枝培育中的應用。
3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，包括以下步驟: O將權利要求1所述的的分裝好的海綿液體培養基經高壓滅菌，滅菌溫度為121-123°C，滅菌壓力為0.11-0.13MP，滅菌時間為22-25分鐘，得到滅菌后培養基； 2)培養材料的接種:無菌狀態下，將牛樟芝培養材料分切成單芽分別插種到滅菌后的海綿液體培養基的V形孔中，進行快速增殖培養，培養時間為30-35天，增殖率為5-6倍； 3)增殖材料的轉接:將步驟2)中增殖后的材料挾出分切再接種到新鮮的液體培養基中繼續進行增殖培養；此后當培養到30-35天時，再次將材料進行分切更換到新鮮的液體培養基中進行增殖培養； 4)生根培養:將步驟3)得到的增殖培養后的牛樟芝增殖材料轉接到一定數量后，將其分切成單株轉接到添加有瓊脂粉的固體培養基中進行生根培養，經過2~3個月培養煉苗后即得到牛樟芝組培苗移植株。
【文檔編號】A01G1/04GK103718961SQ201310697027
【公開日】2014年4月16日 申請日期:2013年12月18日 優先權日:2013年12月18日
【發明者】陳財寶 申請人:柳州市天姿園藝有限公司