一種含有β-葡聚糖酶的乳仔豬專用復(fù)合酶及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種含有β-葡聚糖酶的乳仔豬專用復(fù)合酶及其制備方法，屬于飼料酶制劑領(lǐng)域。所述乳仔豬專用復(fù)合酶由以下重量份數(shù)的組分組成：中草藥粉劑5-20份，木聚糖酶800-1200份，纖維素酶80-120份，β-葡聚糖酶200-250份，甘露聚糖酶15-25，蛋白酶800-1200，中溫α-淀粉酶50-100份。其中β-葡聚糖酶產(chǎn)自地衣芽孢桿菌（Βacillus?licheniformis）β-10-25，保藏編號(hào)CCTCC?NO：M2013538，采用低溫培養(yǎng)基補(bǔ)入和分批接種相結(jié)合的發(fā)酵方法制備。所得復(fù)合酶能有效補(bǔ)充乳仔豬消化道蛋白酶、淀粉酶等內(nèi)源酶的不足，提高乳仔豬對(duì)飼料的消化利用率，防止?fàn)I養(yǎng)性腹瀉的產(chǎn)生。
【專利說(shuō)明】一種含有β-葡聚糖酶的乳仔豬專用復(fù)合酶及其制備方法【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于酶制劑【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種乳仔豬專用復(fù)合酶及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]在畜牧業(yè)中，乳仔豬飼養(yǎng)是所有階段豬中最復(fù)雜的。營(yíng)養(yǎng)供給不合理的后果是豬生長(zhǎng)緩慢，腹瀉率高，死亡率高，進(jìn)而使中大豬階段生長(zhǎng)緩慢，延長(zhǎng)出欄時(shí)間。
[0003]但是，為了切斷母源疾病的垂直傳播途徑，同時(shí)縮短母豬繁殖周期，延長(zhǎng)種用年限，人們將早期斷奶技術(shù)廣泛的應(yīng)用于豬的大規(guī)模養(yǎng)殖工業(yè)中。然而由于新生仔豬缺乏先天免疫、消化系統(tǒng)發(fā)育尚不完善，消化酶分泌能力弱，直接供給以玉米等為主的飼料很容易引起豬仔對(duì)飼料的消化率低、采食量低、生長(zhǎng)速度緩慢、腹瀉率高等問(wèn)題。
[0004]為了克服乳豬在斷奶后所出現(xiàn)的種種問(wèn)題，多數(shù)企業(yè)從斷奶前補(bǔ)飼、誘食、日糧酸化、使用適口性好且易消化吸收的飼料原料、添加外源酶、降低日糧的抗原性、降低日糧的粗蛋白含量以及使用促進(jìn)劑等多個(gè)方面進(jìn)行了改善和優(yōu)化，但實(shí)際效果參差不齊。
[0005]考慮到仔豬在斷奶時(shí)，其自身的蛋白酶、淀粉酶等酶活應(yīng)激而大幅下降到斷奶時(shí)的三分之一，而這些酶類對(duì)于仔豬獲取營(yíng)養(yǎng)和能量起著至關(guān)重要的作用。同時(shí)，飼料用酶在畜禽生產(chǎn)中具有不俗的效果，比如前蘇聯(lián)科學(xué)家在早期斷奶仔豬日糧中添加淀粉糊精酶，使得日增重提高14 .6%，碳水化合物消化率提高77.2%。據(jù)美國(guó)有關(guān)資料報(bào)道，Collier在早期斷奶仔豬日糧中補(bǔ)充酶制劑(含蛋白酶、淀粉酶、葡聚糖酶)，結(jié)果實(shí)驗(yàn)組比對(duì)照組日增重提高了 25%，飼料轉(zhuǎn)化率提高了 15.5%。
[0006]添加酶制劑能補(bǔ)充蛋白酶和淀粉酶，是輔助分解日糧中的蛋白和淀粉，降解日糧中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，并能有效分解玉米/豆柏型日糧中的植物細(xì)胞壁，使細(xì)胞內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如淀粉、蛋白質(zhì)等釋放出來(lái)。同時(shí)分解可溶性纖維，降低植物纖維物質(zhì)的吸水能力和腸道內(nèi)容物的粘度。另外，大量的生產(chǎn)實(shí)踐和科學(xué)實(shí)驗(yàn)也證明了中草藥具有很多營(yíng)養(yǎng)成分和生物活性物質(zhì)，兼有藥性和營(yíng)養(yǎng)性的雙重作用，既可以防病又可以提高生產(chǎn)性能。因此，我們經(jīng)過(guò)多次飼喂實(shí)驗(yàn)，研制出了一種乳仔豬專用復(fù)合酶，其能有效地提高飼料的利用率、降低腹瀉率、促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，針對(duì)性強(qiáng)，效果好，經(jīng)濟(jì)效益顯著。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的在于提供一種酶活力高、抗腹瀉效果顯著的乳仔豬專用復(fù)合酶及其制備方法。
[0008]本發(fā)明的目的通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn):
[0009]一種含有β_葡聚糖酶的乳仔豬專用復(fù)合酶，由以下重量份數(shù)的組分組成:中草藥粉劑5-20份，木聚糖酶800-1200份，纖維素酶80-120份，β -葡聚糖酶200-250份，甘露聚糖酶15-25，蛋白酶800-1200，中溫α -淀粉酶50-100份。
[0010]所述木聚糖酶、纖維素酶、甘露聚糖酶、蛋白酶和中溫α-淀粉酶均為湖南鴻鷹祥生物工程股份有限公司或其他現(xiàn)有產(chǎn)品；[0011]所述中草藥粉劑的制備方法如下:
[0012]稱取黃芪20-30份；黨參10-18份；柴胡10_15份；麥冬10_15份；分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下，然后于容器中均勻混合并添加3-6倍重量的水，控制溫度70°C?90°C保持2?4h，然后降溫至45-60°C，加入混合酶制劑進(jìn)行酶解，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為5.5-6.8，酶解2-4h，最后添加混合物料0.5-3倍重量乙醇和丙醇的混合物，IlOff功率下超聲萃取0.5?1.5h，過(guò)濾；濾液真空濃縮后冷凍干燥獲得中草藥粉劑；
[0013]所述混合酶添加量為混合物料總重量的5-10% ；
[0014]所述混合酶的重量份數(shù)組成為:β -葡萄糖苷酶10-15份，木聚糖酶15-20份，戊聚糖酶15-20份，普魯蘭酶20-30份，β-淀粉酶10-15份，果膠酶10-15份，酸性蛋白酶10-15份，木瓜蛋白酶5-10份，葡萄糖氧化酶5-10份，酸性磷酸酶5-10份；
[0015]所述乙醇和丙醇的質(zhì)量比例為1:1-1.5。
[0016]所述β -葡聚糖酶制備方法如下:
[0017](I)種子培養(yǎng)
[0018]將地衣芽孢桿菌斜面菌種經(jīng)三級(jí)搖瓶發(fā)酵及一級(jí)種子罐發(fā)酵；
[0019]所述種子培養(yǎng)的培養(yǎng)基為:酵母粉0.5%，蛋白胨I %，可溶性淀粉1%，NaCll %,ρΗ4.5-7.0,121-123°C滅菌 30_40min。
[0020](2)發(fā)酵罐發(fā)酵
[0021]將一級(jí)種子罐發(fā)酵液以3%接種量接入含有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，培養(yǎng)溫度35-45 °C，攪拌速度200-300r/min，通風(fēng)量(V/V) 1:1-3，培養(yǎng)時(shí)間10_15h ;然后將IL經(jīng)過(guò)121°C滅菌20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補(bǔ)入發(fā)酵罐，待溫度升至35_45°C時(shí)恒溫培養(yǎng)15-20h ;此時(shí)，將一級(jí)種子罐發(fā)酵液以2%接種量追加接入發(fā)酵罐，恒溫培養(yǎng)10-15h ;繼續(xù)將IL經(jīng)過(guò)121°C滅菌20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補(bǔ)入發(fā)酵罐，待溫度升至35_45°C時(shí)恒溫培養(yǎng)10-15h ;
[0022]所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:麥麩75g，玉米粉55g，米糠25g，豆餅粉20g，β -葡聚糖2g，中草藥劑粉40g，海藻糖35g，酵母粉6g，玉米漿3g，硫酸銨2g，磷酸氫二鉀2g，磷酸二氫鉀2g，檸檬酸鈉3g，消泡劑0.5g,純凈水IOOOmL, pH值4.5-7.0,121°C滅菌20min ；
[0023]所述發(fā)酵培養(yǎng)基的調(diào)配方法為:按比例準(zhǔn)確稱取原料，將原料中的純凈水、玉米粉、豆餅粉投入配料罐中，調(diào)節(jié)PH值3-7，加入中溫淀粉酶(3u/g玉米粉)與高溫淀粉酶(30u/g玉米粉)，同時(shí)邊攪拌邊升溫至70°C保溫15-30min，然后緩慢升溫至90°C保溫15-30min進(jìn)行液化，最后加入其它原料，攪拌均勻，調(diào)初始PH3-7，121_123°C滅菌30_40min備用。
[0024]溶解氧控制:通過(guò)調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速及通風(fēng)量，控制溶解氧15-30% ；
[0025]PH控制:通過(guò)補(bǔ)氨水或稀磷酸，控制發(fā)酵過(guò)程中pH值保持在3-7 ；
[0026]補(bǔ)料控制:當(dāng)發(fā)酵液中的還原糖含量降至3mg/ml-8mg/ml時(shí),開始添加補(bǔ)料培養(yǎng)基，補(bǔ)料量以維持發(fā)酵液還原糖含量為2mg/ml-5mg/ml ；
[0027]放罐標(biāo)準(zhǔn):60-80%菌體衰老自溶，酶活力增長(zhǎng)緩慢。
[0028](3)發(fā)酵液經(jīng)過(guò)濾、濃縮、精濾、干燥得β -葡聚糖酶。
[0029]所述地衣芽孢桿菌具體為地衣芽孢桿菌(B acillus Iicheniformis) β-10-25。該菌株已于2013年11月3日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(簡(jiǎn)稱CCTCC，地址為:湖北省武漢市武昌區(qū)珞珈山武漢大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院)，保藏號(hào)為CCTCC NO:M2013538o
[0030]該菌株特點(diǎn)如下:
[0031]所述菌株在固體平板上菌落為白色，邊緣不整齊，表面干燥不透明，鏡檢為革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，細(xì)胞形態(tài)呈短桿狀，芽孢中生，橢圓形，不膨大。
[0032]所述菌株生理生化特征:V-P試驗(yàn)( + )，淀粉水解( + )，酪素水解( + )，明膠水解( + )，硝酸鹽還原( + )，吲哚試驗(yàn)(_)，利用檸檬酸鹽( + )，硝酸還原( + )，甘露醇( + )，木糖(+ )。
[0033]優(yōu)選的，一種乳仔豬專用復(fù)合酶按如下重量份數(shù)組成:中草藥粉劑10份，木聚糖酶1000份，纖維素酶100份，β-葡聚糖酶220份，甘露聚糖酶20份，蛋白酶1000份，中溫α -淀粉酶75份。
[0034]所述乳仔豬專用復(fù)合酶適用于飼料加工廠和養(yǎng)殖場(chǎng)自配飼料，使用時(shí)應(yīng)與飼料中的其它原料混合均勻，可事先將本發(fā)明與少量飼料混合均勻，再混合到大批飼料中，直接飼喂。建議每噸全價(jià)料添加量為80-120g。
[0035]有益效果:
[0036]1、本發(fā)明根據(jù)乳仔豬消化生理特點(diǎn)，并經(jīng)過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)篩選復(fù)合配方，設(shè)置復(fù)合酶酶譜，有效補(bǔ)充乳仔豬消化道蛋白酶、淀粉酶等內(nèi)源酶的不足，有效提高乳仔豬對(duì)飼料的消化利用率，防止?fàn)I養(yǎng)性腹瀉的產(chǎn)生。
[0037]2、針對(duì)玉米、豆柏等植物性飼料原料抗?fàn)I養(yǎng)因子的特點(diǎn)，合理添加非淀粉多糖類酶制劑，高效降解飼料中的抗?fàn)I養(yǎng)因子。并且本發(fā)明所使用β_葡聚糖酶酶活力高、作用條件寬泛、熱穩(wěn)定性強(qiáng)、適于工業(yè)化生產(chǎn)。
[0038]3、采用專為飼用酶開發(fā)的微生物菌株生產(chǎn)的酶制劑，動(dòng)物適應(yīng)性好，生物學(xué)效價(jià)高，在動(dòng)物體溫(37-40°C)和消化道較寬的pH范圍內(nèi)能發(fā)揮較高活性。
[0039]4、本發(fā)明中添加了中草藥粉劑，其具有天然抗菌和增強(qiáng)免疫力的作用，可以有效的提乳仔豬的抗應(yīng)激能力、免疫功能以及抗病防御機(jī)能。另外，中草藥粉劑中添加了具有抗熱應(yīng)激原作用的黃芩、柴胡，使得本發(fā)明產(chǎn)品具有更好的穩(wěn)定性和保存活性，較沒(méi)有添加中草藥粉劑的產(chǎn)品在長(zhǎng)時(shí)間高溫條件下的保存活性提高了 15%。
[0040]5、本發(fā)明所添加的β -葡聚糖酶酶活力高達(dá)8000-10000u/ml，是原始菌株的2.5倍；在50-70°C條件下具有較高酶活，最適反應(yīng)溫度為65°C ;適用反應(yīng)pH值范圍為5.0 ;在室溫下保存6個(gè)月后酶活損失小于25%，4°C保存12個(gè)月后酶活損失小于20%。比現(xiàn)有的β -葡聚糖酶酶活力高，酶作用最適PH值范圍寬泛，熱穩(wěn)定性及儲(chǔ)存穩(wěn)定性均較高，特別適合應(yīng)用于飼料酶制劑領(lǐng)域。
【具體實(shí)施方式】
[0041]實(shí)施例1中草藥粉劑的制備方法
[0042]一種中草藥粉劑的制備方法如下:
[0043]稱取黃芪25份；黨參15份；柴胡12份；麥冬12份；分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下，然后于容器中均勻混合并添加5倍重量的水，控制溫度80°C保持3h，然后降溫至50°C，加入混合酶制劑進(jìn)行酶解，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為6，酶解3h，最后添加混合物料2倍重量乙醇和丙醇的混合物，IlW超聲萃取lh，過(guò)濾；濾液真空濃縮后冷凍干燥獲得中草藥粉劑。
[0044]所述混合酶添加量為混合物料總重量的8%。
[0045]所述混合酶的重量份數(shù)組成為:β -葡萄糖苷酶12份，木聚糖酶18份，戊聚糖酶18份，普魯蘭酶25份，β -淀粉酶18份，果膠酶12份，酸性蛋白酶12份，木瓜蛋白酶8份，葡萄糖氧化酶8份，酸性磷酸酶8份。
[0046]所述乙醇和丙醇的質(zhì)量比例為1:1.2。
[0047]實(shí)施例2 —種β -葡聚糖酶的制備方法
[0048]一種β -葡聚糖酶的制備方法，包括如下步驟:
[0049](I)液體種子擴(kuò)大培養(yǎng)
[0050]①一級(jí)種子培養(yǎng):將活化后的斜面菌種2環(huán)接入500毫升搖瓶中，培養(yǎng)基裝量100毫升，旋轉(zhuǎn)式搖床180轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度40°C，培養(yǎng)時(shí)間IOh ；
[0051]②二級(jí)種子培養(yǎng):將一級(jí)種子按照10%的接種量接入500毫升二級(jí)種子搖瓶中，培養(yǎng)條件與一級(jí)種子相同；
[0052]③三級(jí)種子培養(yǎng):將二級(jí)種子以10%接種量接入5000毫升三級(jí)種子搖瓶中，培養(yǎng)基裝量1000毫升，旋轉(zhuǎn)式搖床100轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度40°C，培養(yǎng)時(shí)間12h ；
[0053]④一級(jí)種子罐培養(yǎng):將三級(jí)種子以10%接種量接入總?cè)莘e為150L的一級(jí)種子罐，發(fā)酵培養(yǎng)基裝量100L，培養(yǎng)溫度41 °C，攪拌速度300rpm，通風(fēng)量(V/V) 1: 1.5，罐壓
`0.05Mpa,培養(yǎng)時(shí)間15h ；
[0054]所述種子培養(yǎng)基重量組成為:酵母粉0.5%，蛋白胨I %，可溶性淀粉I %，NaCll%，ρΗ5.5，121。。滅菌 35min。
[0055](2)發(fā)酵罐發(fā)酵
[0056]將一級(jí)種子罐發(fā)酵液以3%接種量接入含有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，培養(yǎng)溫度37°C，攪拌速度250r/min，通風(fēng)量(V/V) 1:1-3，培養(yǎng)時(shí)間12h ;然后將IL經(jīng)過(guò)121°C滅菌20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補(bǔ)入發(fā)酵罐，待溫度升至37°C時(shí)恒溫培養(yǎng)18h ;此時(shí)，將一級(jí)種子罐發(fā)酵液以2%接種量追加接入發(fā)酵罐，恒溫培養(yǎng)12h ;繼續(xù)將IL經(jīng)過(guò)121°C滅菌20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補(bǔ)入發(fā)酵罐，待溫度升至37°C時(shí)恒溫培養(yǎng)12h ；
[0057]所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:麥麩75g，玉米粉55g，米糠25g，豆餅粉20g，β -葡聚糖2g，中草藥劑粉40g，海藻糖35g，酵母粉6g，玉米漿3g，硫酸銨2g，磷酸氫二鉀2g，磷酸二氫鉀2g，檸檬酸鈉3g，消泡劑0.5g,純凈水1000mL, pH值5.5，121°C滅菌20min ；
[0058]所述發(fā)酵培養(yǎng)基的調(diào)配方法為:按比例準(zhǔn)確稱取原料，將原料中的純凈水、玉米粉、豆餅粉投入配料罐中，調(diào)節(jié)PH值5.5，加入中溫淀粉酶(3u/g玉米粉)與高溫淀粉酶(30u/g玉米粉)，同時(shí)邊攪拌邊升溫至70°C保溫20min，然后緩慢升溫至90°C保溫20min進(jìn)行液化，最后加入其它原料，攪拌均勻，調(diào)初始PH5.5，121°C滅菌35min備用。
[0059]所述中草藥粉劑的制備方法如實(shí)施例1.[0060](3)發(fā)酵液經(jīng)過(guò)濾、濃縮、精濾、干燥得β -葡聚糖酶。
[0061]經(jīng)上述制備方法得到的β -葡聚糖酶液體酶活力為10000u/ml。
[0062]實(shí)施例3 —種含有β -葡聚糖酶的乳仔豬專用復(fù)合酶的制備方法
[0063]一種含有β -葡聚糖酶的乳仔豬專用復(fù)合酶，由以下重量份數(shù)的酶制劑組成:
[0064]中草藥粉劑10份，木聚糖酶1000份，纖維素酶100份，β -葡聚糖酶220份，甘露聚糖酶20份，蛋白酶1000份，中溫α -淀粉酶75份。
[0065]按上述重量份數(shù)取產(chǎn)自湖南鴻鷹祥生物工程股份有限公司的木聚糖酶，纖維素酶，甘露聚糖酶，中溫α -淀粉酶，蛋白酶，以及實(shí)施例1所得的中草藥粉劑，實(shí)施例2所得的葡聚糖酶于25°C條件下在混合機(jī)中攪拌均勻，攪拌時(shí)間為5分鐘。攪拌均勻裝箱后于常溫或冷室中保存。
[0066]實(shí)施例4 一種含有β -葡聚糖酶的乳仔豬專用復(fù)合酶的制備方法
[0067]一種含有β -葡聚糖酶的乳仔豬專用復(fù)合酶，由以下重量份數(shù)的酶制劑組成:
[0068]中草藥粉劑5份，木聚糖酶800份，纖維素酶80份，β -葡聚糖酶250份，甘露聚糖酶15份，蛋白酶800份，中溫α -淀粉酶100份。
[0069]按上述重量份數(shù)取產(chǎn)自湖南鴻鷹祥生物工程股份有限公司的木聚糖酶，纖維素酶，甘露聚糖酶，中溫α -淀粉酶，蛋白酶，以及實(shí)施例1所得的中草藥粉劑，實(shí)施例2所提的β -葡聚糖酶于25°C條件下在混合機(jī)中攪拌均勻，攪拌時(shí)間為5分鐘。攪拌均勻裝箱后于常溫或冷室中保存。
[0070]實(shí)施例5 —種含有β -葡聚糖酶的乳仔豬專用復(fù)合酶的制備方法
[0071]一種含有β -葡聚糖酶的乳仔豬專用復(fù)合酶，由以下重量份數(shù)的酶制劑組成:
[0072]中草藥粉劑20份，木聚糖酶1200份，纖維素酶120份，β -葡聚糖酶200份，甘露聚糖酶25份，蛋白酶1200份 ，中溫α -淀粉酶50份。
[0073]按上述重量份數(shù)取產(chǎn)自湖南鴻鷹祥生物工程股份有限公司的木聚糖酶，纖維素酶，甘露聚糖酶，中溫α -淀粉酶，蛋白酶，以及實(shí)施例1所得的中草藥粉劑，實(shí)施例2所提的葡聚糖酶于25°C條件下在混合機(jī)中攪拌均勻，攪拌時(shí)間為5分鐘。攪拌均勻裝箱后于常溫或冷室中保存。
[0074]實(shí)施例6效果對(duì)比實(shí)驗(yàn)
[0075]選取120頭斷奶仔豬，按體重、血統(tǒng)及性別無(wú)差異分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20頭豬。實(shí)驗(yàn)期為28天，實(shí)驗(yàn)組每噸飼料添加本實(shí)施例2所述復(fù)合酶制劑120g，對(duì)照組不添加復(fù)合酶制劑，于試驗(yàn)期的始末日早晨空腹稱重，計(jì)算日增重、料肉比、腹瀉率和死淘率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表所示:
[0076]
【權(quán)利要求】
1.一種含有β-葡聚糖酶的乳仔豬專用復(fù)合酶，由以下重量份數(shù)的組分組成:中草藥粉劑5-20份，木聚糖酶800-1200份，纖維素酶80-120份，β -葡聚糖酶200-250份，甘露聚糖酶15-25，蛋白酶800-1200，中溫α -淀粉酶50-100份； 所述β -葡聚糖酶由地衣芽孢桿菌(B acillus Iicheniformis) β -10-25經(jīng)生物發(fā)酵制的，所述菌株保藏編號(hào)為CCTCC NO:Μ2013538。
2.如權(quán)利要求1所述一種含有葡聚糖酶的乳仔豬專用復(fù)合酶，其特征在于，所述中草藥粉劑的制備方法如下: 稱取黃芪20-30份；黨參10-18份；柴胡10-15份；麥冬10-15份；分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下，然后于容器中均勻混合并添加3-6倍重量的水，控制溫度70°C~90°C保持2~4h，然后降溫至45-60°C，加入混合酶制劑進(jìn)行酶解，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為5.5-6.8，酶解2-4h，最后添加混合物料0.5-3倍重量乙醇和丙醇的混合物，IlOff功率下超聲萃取0.5~1.5h，過(guò)濾；濾液真空濃縮后冷凍干燥獲得中草藥粉劑。
3.如權(quán)利要求2所述的一種含有β-葡聚糖酶的乳仔豬專用復(fù)合酶，其特征在于，所述混合酶制劑組成如下:β -葡萄糖苷酶10-15份，木聚糖酶15-20份，戊聚糖酶15-20份，普魯蘭酶20-30份，β-淀粉酶10-15份，果膠酶10-15份，酸性蛋白酶10-15份，木瓜蛋白酶5-10份，葡萄糖氧化酶5-10份，酸性磷酸酶5-10份。
4.如權(quán)利要求1所述一種含有葡聚糖酶的乳仔豬專用復(fù)合酶，其特征在于，葡聚糖酶的制備方法，包括如下步驟: 地衣芽孢桿菌β-10-25經(jīng)斜面菌種活化培養(yǎng)后進(jìn)行一、二、三級(jí)液體種子和種子罐培養(yǎng)；將一級(jí)種子罐發(fā)酵液以3%接種量接入含有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，培養(yǎng)溫度35-45°C，攪拌速度200-300r/min，通風(fēng)量(V/V) 1:1-3,培養(yǎng)時(shí)間10_15h ;然后將IL經(jīng)過(guò)121°C滅菌20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補(bǔ)入發(fā)酵罐，待溫度升至35_45°C時(shí)恒溫培養(yǎng)15-20h ;此時(shí)，將一級(jí)種子罐發(fā)酵`液以2%接種量追加接入發(fā)酵罐，恒溫培養(yǎng)10-15h ;繼續(xù)將IL經(jīng)過(guò)121°C滅菌20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補(bǔ)入發(fā)酵罐，待溫度升至35_45°C時(shí)恒溫培養(yǎng)10-15h ; 發(fā)酵液經(jīng)過(guò)濾、濃縮、精濾、干燥得葡聚糖酶。
5.如權(quán)利要求4所述的一種含有β-葡聚糖酶的乳仔豬專用復(fù)合酶，其特征在于，所述種子培養(yǎng)的培養(yǎng)基為:酵母粉0.5 %，蛋白胨I %，可溶性淀粉I %，NaCl I %，ρΗ4.5-7.0 ； 所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:麥麩75g，玉米粉55g，米糠25g，豆餅粉20g，β -葡聚糖2g，中草藥劑粉40g，海藻糖35g，酵母粉6g，玉米漿3g，硫酸銨2g，磷酸氫二鉀2g，磷酸二氫鉀2g，檸檬酸鈉3g，消泡劑0.5g,純凈水1000mL, pH值4.5-7.0,121°C滅菌20min ； 所述發(fā)酵培養(yǎng)基的調(diào)配方法為:按比例準(zhǔn)確稱取原料，將原料中的純凈水、玉米粉、豆餅粉投入配料罐中，調(diào)節(jié)PH值3-7,加入中溫淀粉酶(3u/g玉米粉)與高溫淀粉酶(30u/g玉米粉)，同時(shí)邊攪拌邊升溫至70°C保溫15-30min，然后緩慢升溫至90°C保溫15_30min進(jìn)行液化，最后加入其它原料，攪拌均勻，PH3-7。
6.一種制備如權(quán)利要求1所述的含有β_葡聚糖酶的乳仔豬專用復(fù)合酶的方法，包括如下步驟: 按照原料組成將中草藥粉劑，木聚糖酶，纖維素酶，β -葡聚糖酶，甘露聚糖酶，蛋白酶，中溫α-淀粉酶混合均勻即可；所述木聚糖酶，纖維素酶，甘露聚糖酶，蛋白酶，中溫α -淀粉酶為湖南鴻鷹祥生物工程股份有限公司或其他現(xiàn)有產(chǎn)品； 所述中草藥粉劑的制備方法如下: 稱取黃芪20-30份；黨參10-18份；柴胡10-15份；麥冬10-15份；分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下，然后于容器中均勻混合并添加3-6倍重量的水，控制溫度70°C~`90°C保持2~4h，然后降溫至45-60°C，加入混合酶制劑進(jìn)行酶解，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為`5.5-6.8，酶解2-4h，最后添加混合物料0.5-3倍重量乙醇和丙醇的混合物，IlOff功率下超聲萃取0.5~1.5h，過(guò)濾；濾液真空濃縮后冷凍干燥獲得中草藥粉劑； 所述混合酶添加量為混合物料總重量的5-10% ； 所述混合酶的重量份數(shù)組成為:β -葡萄糖苷酶10-15份，木聚糖酶15-20份，戊聚糖酶15-20份，普魯蘭酶20-30份，β -淀粉酶10-15份，果膠酶10-15份，酸性蛋白酶10-15份，木瓜蛋白酶5-10份，葡萄糖氧化酶5-10份，酸性磷酸酶5-10份； 所述乙醇和丙醇的質(zhì)量比例為1:1-1.5 ； 所述β-葡聚糖酶制備方法如下: (1)種子培養(yǎng) 將地衣芽孢桿菌β -10-25斜面菌種經(jīng)三級(jí)搖瓶發(fā)酵及一級(jí)種子罐發(fā)酵； 所述種子培養(yǎng)的培養(yǎng)基為酵母粉0.5%，蛋白胨I %，可溶性淀粉I %，NaCll %,ρΗ4.5-7.0,121-123°C滅菌 30_40min ； (2)發(fā)酵罐發(fā)酵 將一級(jí)種子罐發(fā)酵液以3%接種量接入含有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，培養(yǎng)溫度`35-45°C，攪拌速度200-300r/min，通風(fēng)量(V/V) 1:1-3,培養(yǎng)時(shí)間10_15h ;然后將IL經(jīng)過(guò)`121°C滅菌20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補(bǔ)入發(fā)酵罐，待溫度升至35_45°C時(shí)恒溫培養(yǎng)`15-20h ;此時(shí)，將一級(jí)種子罐發(fā)酵液以2%接種量追加接入發(fā)酵罐，恒溫培養(yǎng)10-15h ;繼續(xù)將IL經(jīng)過(guò)121°C滅菌20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補(bǔ)入發(fā)酵罐，待溫度升至35_45°C時(shí)恒溫培養(yǎng)10-15h ; 所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:麥麩75g，玉米粉55g，米糠25g，豆餅粉20g，β -葡聚糖2g，中草藥劑粉40g，海藻糖35g，酵母粉6g，玉米漿3g，硫酸銨2g，磷酸氫二鉀2g，磷酸二氫鉀`2g，檸檬酸鈉3g，消泡劑0.5g,純凈水1000mL, pH值4.5-7.0,121°C滅菌20min ； 所述發(fā)酵培養(yǎng)基的調(diào)配方法為:按比例準(zhǔn)確稱取原料，將原料中的純凈水、玉米粉、豆餅粉投入配料罐中，調(diào)節(jié)PH值3-7,加入中溫淀粉酶(3u/g玉米粉)與高溫淀粉酶(30u/g玉米粉)，同時(shí)邊攪拌邊升溫至70°C保溫15-30min，然后緩慢升溫至90°C保溫15_30min進(jìn)行液化，最后加入其它原料，攪拌均勻，調(diào)初始PH3-7，121-123°C滅菌30_40min備用； 溶解氧控制:通過(guò)調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速及通風(fēng)量，控制溶解氧15-30% ； PH控制:通過(guò)補(bǔ)氨水或稀磷酸，控制發(fā)酵過(guò)程中pH值保持在3-7 ； 補(bǔ)料控制:當(dāng)發(fā)酵液中的還原糖含量降至3mg/ml-8mg/ml時(shí),開始添加補(bǔ)料培養(yǎng)基,補(bǔ)料量以維持發(fā)酵液還原糖含量為2mg/ml-5mg/ml ； 放罐標(biāo)準(zhǔn):60-80%菌體衰老自溶，酶活力增長(zhǎng)緩慢； (3)發(fā)酵液經(jīng)過(guò)濾、濃縮、精濾、干燥得β-葡聚糖酶。
7.如權(quán)利要求1所述的一種含有葡聚糖酶的乳仔豬專用復(fù)合酶，其特征在于:所述復(fù)合酶由以下重量份數(shù)的酶制劑組成:中草藥粉劑10份，木聚糖酶1000份，纖維素酶100份，β-葡聚糖酶220份，甘露聚糖酶20份，蛋白酶1000份，中溫α-淀粉酶75份。
8.如權(quán)利要求1所述的一種含有β_葡聚糖酶的乳仔豬專用復(fù)合酶在畜禽飼養(yǎng)中的應(yīng)用。`
【文檔編號(hào)】A23K1/18GK103750023SQ201310739811
【公開日】2014年4月30日 申請(qǐng)日期:2013年12月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月27日
【發(fā)明者】李洪兵, 李海清, 張錦杰, 胡永明, 胡波 申請(qǐng)人:湖南鴻鷹生物科技有限公司