一種黃精的快速繁殖技術(shù)方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種黃精快速繁殖的技術(shù)方法，包括采用變溫處理加激素處理打破種子休眠以及利用打破休眠的種子作材料進(jìn)行離體誘導(dǎo)培養(yǎng)愈傷組織，經(jīng)過分化培養(yǎng)和根誘導(dǎo)，無性繁殖黃精種苗。采用本技術(shù)能大大提高黃精繁殖倍數(shù)，縮短生產(chǎn)周期，減少用種量，降低生產(chǎn)成本。
【專利說明】一種黃精的快速繁殖技術(shù)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物工程【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種中藥黃精的快速繁殖技術(shù)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]黃精系百合科黃精屬多年生草本植物。全世界約41種，我國約35種，據(jù)《中國藥典2010版》記載，我國作藥用的主要是分布在北方的大黃精、分布在云貴高原的滇黃精和長江以南的多花黃精三種，作藥用有二千多年歷史。以其分布廣、適應(yīng)性強(qiáng)、藥用價(jià)值高、藥食兼用等特點(diǎn)而越來越受到人們的重視，特別是作為功能食品開發(fā)具有非常廣闊的應(yīng)用前景。[0003]黃精主要含多糖、聚糖、黃酮、蒽醌、皂苷、木質(zhì)素、生物堿和氨基酸等物質(zhì)。現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，黃精有補(bǔ)腎益精、滋陰潤燥、抗氧化、抗衰老、抗疲勞、調(diào)節(jié)人體免疫、降脂、降糖、降低或抑制膽固醇，預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化、提高學(xué)習(xí)記憶與再現(xiàn)能力、抗炎、抗病毒等功效。
[0004]隨著應(yīng)用的拓展，人們無計(jì)劃的采挖，野生資源已漸枯竭，人工栽培成為必然趨勢。根莖繁殖因用種量大、生產(chǎn)成本高，加上種源不足，無法滿足生產(chǎn)的需求；種子雖然繁殖系數(shù)大，但有兩次生理休眠期，生產(chǎn)周期長，自然條件下，需要經(jīng)歷三年才能長出一片真葉。打破種子休眠，短期內(nèi)讓種子萌發(fā)，并以此為材料進(jìn)行組織培養(yǎng)，不僅可以縮短生產(chǎn)周期，為大面積人工種植提供大量種苗，還可降低生產(chǎn)成本，具有保持種質(zhì)的優(yōu)良性狀，不受自然因素制約等特點(diǎn)，具有重要的經(jīng)濟(jì)意義。
[0005]
【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]月以上，發(fā)芽率達(dá)到90%以上；同時(shí)，采用生物工程技術(shù)，以萌發(fā)種子為材料，進(jìn)行離體誘導(dǎo)，組織培養(yǎng)，工廠化生產(chǎn)黃精種苗，具有污染率低，誘導(dǎo)率高；繁殖系數(shù)大，生產(chǎn)成本低；保持原種質(zhì)優(yōu)良性狀，不受自然因素影響等特點(diǎn)，在生產(chǎn)中具有實(shí)際推廣價(jià)值與經(jīng)濟(jì)意義。
[0007]本發(fā)明提供的一種黃精快速繁殖技術(shù)方法包括兩個(gè)方面內(nèi)容:一是黃精種子休眠打破；二是利用打破休眠的種子作材料進(jìn)行離體誘導(dǎo)培養(yǎng)無性繁殖。
[0008]黃精種子具有深度形態(tài)休眠與生理休眠，而且有兩次休眠特性，當(dāng)?shù)谝淮涡菝叽蚱坪螅N子胚根突破種皮而生長，胚根長至2cm時(shí)，在胚根基部膨大，變成一個(gè)初生地下莖，而胚芽并不生長，仍處于休眠狀態(tài)；黃精屬于單子葉植物，子葉留土類型，在適宜的環(huán)境下，種子內(nèi)胚乳提供所需營養(yǎng)供胚生長，只有打破芽休眠，胚芽才萌動(dòng)，長出第一片真葉。本方法先將成熟種子搓去外果皮后，3~5°C細(xì)砂冷藏30天，用200~300ppmGA3浸泡24小時(shí)，放入26°C培養(yǎng)箱恒溫催芽，待胚根長出后，再用200~300ppm的KT浸泡12~24小時(shí)，種子可萌發(fā)生長，供生產(chǎn)所用。
[0009]黃精雖然屬于自花授粉植物，但種子繁殖是有性繁殖，遺傳上有一定的變異性，同時(shí)，受自然因素影響。采用萌發(fā)的種子作材料，進(jìn)行離體誘導(dǎo)，組織培養(yǎng)，生長周期縮短，繁殖系數(shù)提高，更能保持品種的優(yōu)良性狀。以萌發(fā)的種子作材料，因其初生莖上的胚芽分生組織發(fā)達(dá)，分生能力很強(qiáng)，容易誘導(dǎo)形成愈傷組織，一粒種子可以誘導(dǎo)出100~500株種苗，大大降低了生產(chǎn)成本。
[0010]以萌發(fā)的種子作材料，進(jìn)行離體誘導(dǎo)組織培養(yǎng)，包括三個(gè)步驟，一是離體誘導(dǎo)愈傷組織；二是將多次繼代的愈傷組織分化培養(yǎng)出苗；三是將分化的組培苗再誘導(dǎo)分化出根系O
[0011]【具體實(shí)施方式】:
本發(fā)明提供了一種黃精快速繁殖的技術(shù)方法，包括打破種子休眠和以打破休眠的種子作材料進(jìn)行組織培養(yǎng)。本技術(shù)方法可使黃精種子提早13個(gè)月發(fā)芽，發(fā)芽率達(dá)到90%以上；采用發(fā)芽的種子作材料進(jìn)行組織培養(yǎng)，可使繁殖系數(shù)提高100~500倍，可保持種苗的優(yōu)良遺傳性狀，不受自然因素影響，生產(chǎn)成本降低，經(jīng)濟(jì)、實(shí)用。
[0012]具體地，本發(fā)明中，黃精種子休眠打破，采用變溫處理與激素處理相結(jié)合，促使種子內(nèi)抑制種子萌發(fā)的某些化學(xué)物質(zhì)分解，促使種子萌發(fā)。先將采回的成熟果實(shí)，搓去外果皮，細(xì)砂層積放在3~5°C冷藏箱內(nèi)處理30天，然后用200~300ppmGA3浸泡12~24小時(shí)，放入培養(yǎng)箱25~26°C恒溫催芽，待胚根長出后，再用200~300ppm的KT浸泡12~24小時(shí)，種子可萌發(fā)生長。
[0013]利用萌發(fā)的種子進(jìn)行組織培養(yǎng)，首先將地下初生莖上的須根摘除，放在流水中沖洗數(shù)小時(shí)，用8%次氯酸鈣處理30min，超靜臺(tái)內(nèi)70%乙醇消毒3次，0.1%氯化汞消毒處理8~IOmin,無菌水沖洗5次,縱切 小根莖芽,接種到MS加6—BAl.0mg/L\2, 4-D0.5mg/L\鹿糖30g/L\瓊脂7g/L，PH5.8的固體培養(yǎng)基上，在溫度26°C、光照時(shí)間16h\光強(qiáng)1500Lx條件下培養(yǎng)，20天左右可誘導(dǎo)出愈傷組織，經(jīng)過3~5次的繼代培養(yǎng)后，將愈傷組織切成直徑3cm左右的小塊，轉(zhuǎn)接到MS加TDZ1.5mg/L\2, 4-D1.0mg/L\蔗糖30g/L\瓊脂7g/L培養(yǎng)基上培養(yǎng)15天后再轉(zhuǎn)移到MS加6-BA1.0mg/L\NAA2.0mg/L\蔗糖30g/L\瓊脂7g/L的分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)誘導(dǎo)出芽苗來；待芽苗長到3~5cm時(shí)，再轉(zhuǎn)移到1/2MS加NAA1.0mg/LL\蔗糖30g/L\瓊脂7g/L的生根培養(yǎng)基上，待根系生長到一定時(shí)期，出瓶煉苗馴化。
[0014]為了使本發(fā)明所解決的技術(shù)問題、技術(shù)方案更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。
[0015]實(shí)施例1:
將采回的成熟果實(shí)，搓去外果皮，細(xì)砂層積放在:TC冷藏箱內(nèi)處理30天，然后用200ppmGA3浸泡24小時(shí)，放入培養(yǎng)箱26°C恒溫培養(yǎng)，發(fā)芽率達(dá)到70%，再用200ppm的KT浸泡處理12小時(shí)，萌發(fā)率可達(dá)90%。大部分可播種到室外育苗。
[0016]將發(fā)芽的地下小根莖摘除須根，放在流水中沖洗一天一晚，用8%次氯酸鈣處理30min,超靜臺(tái)內(nèi)70%乙醇消毒3次，0.1%氯化汞消毒處理8min，無菌水沖洗5次，縱切小根莖芽，接種到MS加6—BAl.0mg/L\2, 4-D0.5mg/L\蔗糖30g/L\瓊脂7g/L，PH5.8的固體培養(yǎng)基上，在溫度26°C、光照時(shí)間16h\光強(qiáng)1500Lx條件下培養(yǎng)，20天左右誘導(dǎo)出愈傷組織，經(jīng)過3~5次的繼代培養(yǎng)后，將愈傷組織切成直徑3cm左右的小塊，接種到MS加6-BA1.0mg/L\NAA2.0mg/L\蔗糖30g/L\瓊脂7g/L的分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)誘導(dǎo)，平均每塊愈傷組織的叢芽達(dá)到6.5個(gè)；待芽苗長到3~5cm時(shí)，再轉(zhuǎn)移到1/2MS加NAA1.0mg/L\蔗糖30g/L\瓊脂7g/L的生根培養(yǎng)基上，當(dāng)每叢芽苗長出5條以上根時(shí)，出瓶煉苗。用以上方法為S1.實(shí)施例2:
將經(jīng)過冷藏處理的種子，用400ppmGA3浸泡12小時(shí)，放入培養(yǎng)箱26°C恒溫培養(yǎng)，發(fā)芽率40%左右，待胚根長出后，再用300ppm的KT浸泡處理12小時(shí)，萌發(fā)率80%左右。
[0017]完全按照SI方法誘導(dǎo)形成愈傷組織后，不同的是先轉(zhuǎn)接到MS加TDZ1.5mg/L\2, 4-D1.0mg/L\蔗糖30g/L\瓊脂7g/L培養(yǎng)基上培養(yǎng)15天后再轉(zhuǎn)移到MS加6-BA1.0mg/L\NAA2.0mg/L\蔗糖30g/L\瓊脂7g/L的分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)誘導(dǎo)，每塊愈傷組織的叢芽達(dá)到8.9 個(gè)；為 S2.SI與S2比較，種子處理SI較S2發(fā)芽率提高30%，芽萌發(fā)率提高10%。組織培養(yǎng)過程中，分化培養(yǎng)結(jié)果看，S2較SI每塊愈傷組織的叢生芽平均多2.4個(gè)。
[0018]以上具體實(shí)施例，僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
【權(quán)利要求】
1.一種黃精快速繁殖技術(shù)方法，其特征在于，包括種子休眠打破和用打破休眠種子作材料進(jìn)行離休誘導(dǎo)培養(yǎng)愈傷組織生產(chǎn)組織培養(yǎng)苗。
2.根據(jù)權(quán)利要求1其特征在于，種子休眠打破，先將成熟果實(shí)搓去外果皮后，3~5°C細(xì)砂冷藏30天，用200~300ppmGA3浸泡12~24小時(shí)，放入培養(yǎng)箱25~26°C恒溫催芽，待胚根長出后，再用200~300ppm的KT浸泡12~24小時(shí),種子可萌發(fā)生長。
3.根據(jù)權(quán)利要求1其特征在于，離體誘導(dǎo)組織培養(yǎng)包括愈傷組織誘導(dǎo)、芽分化和根分化三個(gè)環(huán)節(jié)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3其特征在于，愈傷組織誘導(dǎo)，以萌發(fā)的種子作材料，清洗消毒后對芽縱切，接種到 MS 加 6 — BAl.0mg/L\2, 4-D0.5mg/L\ 蔗糖 30g/L\ 瓊脂 7g/L、PH5.8 的固體培養(yǎng)基上，在溫度26°C、光照時(shí)間16h\光強(qiáng)1500Lx條件下培養(yǎng)20天左右，可誘導(dǎo)出愈傷組織。
5.根據(jù)權(quán)利要求4其特征在于，將誘導(dǎo)出的愈傷組織經(jīng)過3~5次繼代培養(yǎng)后，切成一定大小團(tuán)塊轉(zhuǎn)接到MS加TDZ1.5mg/L\2, 4_D1.0mg/L\蔗糖30g/L\瓊脂7g/L培養(yǎng)基上培養(yǎng)15天后再轉(zhuǎn)移到MS加6-BA1.0mg/L\NAA2.0mg/L\蔗糖30g/L\瓊脂7g/L的分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)可誘導(dǎo)出大量叢生芽苗。
6.根據(jù)權(quán)利要求5其特征在于，將誘導(dǎo)出來的莖芽切開轉(zhuǎn)移到1/2MS加NAA1.0mg/L的\蔗糖30g/L\瓊脂7g/L培養(yǎng)基上，可以誘導(dǎo)生根，待根系生長到一定時(shí)期，出瓶煉苗馴化。
7.一種黃精快速繁殖技`術(shù)方法，由權(quán)利要求1~6項(xiàng)得到。
【文檔編號】A01H4/00GK103858769SQ201410130683
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2014年4月3日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月3日
【發(fā)明者】張旺凡 申請人:張旺凡