香蕉水通道蛋白基因啟動子及其應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種香蕉水通道蛋白基因啟動子，其核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。利用香蕉水通道蛋白基因啟動子構建一種表達Gus基因的植物重組表達載體pCAMBIA1304：MaPIP1；1-Promoter。本發明利用啟動逆境相關基因的高效表達，應用于耐旱和耐鹽的轉基因植物中，對于解決干旱和鹽害地區糧食危機、生態惡化等問題都有積極意義。
【專利說明】香蕉水通道蛋白基因啟動子及其應用

【技術領域】
[0001] 本發明涉及植物基因工程【技術領域】，具體是指一種香蕉水通道蛋白基因啟動子和 在植物中高效表達的干旱和鹽害的應用。

【背景技術】
[0002] 水資源短缺以及土壤鹽漬化是目前制約農業生產的一個全球性問題，全球約有 20%的耕地受到鹽害威脅。干旱與鹽害嚴重影響植物的生長發育，造成作物減產，并使生態 環境日益惡化。在自然條件下，由于環境脅迫而嚴重影響了作物生長發育，其遺傳潛力難以 發揮，干旱、鹽漬不僅影響了作物的產量，而且限制了植物的廣泛分布，因此，提高作物的抗 旱、耐鹽能力已經成為現代植物研究工作中急需解決的關鍵問題之一。
[0003] 香蕉是熱帶、亞熱帶地區的重要經濟作物之一，被聯合國糧農組織（FAO)定位為 發展中國家僅次于水稻、小麥、玉米之后的第四大糧食作物。香蕉前期植株較小，根系淺生， 易受旱、鹽害等脅迫的影響，在栽培生產中，耗水量大，缺水會減少香蕉果實數量且使香蕉 變小，掛果期受旱，會影響果實膨大，在營養生長階段遇上干旱，會使香蕉營養器官生長發 育不良，從而造成減產。而土壤鹽分過多使根際土壤溶液滲透勢降低，促使植物吸收水分困 難，造成生長速度和生長量顯著下降，嚴重還可能造成死亡（Van et al.，2011)。解決香蕉 生產中嚴重的逆境脅迫問題，提高香蕉產量，除了常規育種技術以外，基于基因遺傳轉化的 生物育種技術是一個重要的選擇。在基因工程中，用來控制目的基因表達的啟動子主要以 CaMV35S等組成型表達啟動子為主。該啟動子雖能使目的基因過量表達，但它是無環境、組 織和時間特異性的組成型表達的啟動子。利用組成型表達啟動子控制抗性相關基因的過量 表達雖然可以提高植物在逆境條件下的抗逆能力，但正常環境條件下細胞內也會過量表達 抗逆蛋白，對植物來說是一種能量浪費。因此，利用逆境誘導型啟動子實現高效、可控和特 異（定點、定時、定量）的調控抗逆基因在改良作物的抗性中成為當前研究的熱點。
[0004] 對植物在干旱和鹽害等逆境脅迫下大量表達的抗逆基因啟動子研究表明，不同耐 旱和耐鹽基因的啟動子往往含有相同的順式作用元件，并受相同的反式作用因子的調控。
[0005] 非生物脅迫如干旱、高鹽、低溫等，可以誘導植物體內相關基因表達，其轉錄調節 的主要機制是逆境脅迫有關的轉錄因子（調節蛋白）與基因上游啟動子中關鍵順式元件 特異結合，增強啟動子的活性，提高目的基因的表達量。國內外有一些關于逆境啟動子的 報道，干旱誘導型啟動子，擬南芥erdl (early responsive to dehydration stressl)基因 與干旱脅迫相關，其啟動子區域存在保守的干旱響應順式作用元件（Drought-Responsive cis-Element) CATGTG和CACG模體，融合⑶S檢測其表達譜發現，它在鹽脅迫下葉片中特 異性增強轉錄水平（Tran et al·，2004)。SNACl (STRESS-RESPONSIVE NACl)是 NAC 家 族的一員，超表達植株抗旱性大大增強，在受到干旱脅迫時能夠正常結實，該基因的啟動 子驅動GFP表達情況揭示其受到干旱誘導在保衛細胞中特異性表達（Hu et al.，2006)。 rd29A啟動子受ΑΒΑ、干旱、高鹽及低溫等逆境誘導，是目前抗逆植物基因工程中應用最 廣泛的誘導型啟動子（李新玲等，2007 ;楊春霞等，2008 ;吳梅花等，2005 ;Yamaguehi - shinOZakiandshinOZaki，1993)。Yamaguehi - shinozaki 等（2001)分別利用 CaMV355 組成型啟動子和rd29A逆境誘導型啟動子獲得了 DREBIA的轉基因植株，結果顯示 rd29A: =DREBIA轉基因植株的脅迫耐性明顯高于355: =DREBIA的轉基因植株，表明rd29A啟 動子能更有效地提高植物對低溫、干旱和高鹽等逆境脅迫的適應性。Brown等（2001)首次 在冬麥中發現了受低溫誘導的bltlOl. 1基因啟動子，并通過漸變缺失鑒定到了一個高度 保守的T-Iike元件（TCATCTTCTT)，表明該元件與誘導目的基因在低溫脅迫下高效表達密 切相關。Takumi等（2003)在小麥種分離到一個低溫應答基因 WC0rl5上游I. 7kb的啟動子 序列，結果顯示該區段內包含有4個CRT/DRElike序列，包括CCGAC核心基序，實驗證明該 啟動子受低溫和光誘導。
[0006] 利用逆境誘導型啟動子驅動抗逆基因的高效表達，從而改良作物對逆境脅迫的適 應性已成為目前的研究熱點。然而，目前能應用于轉基因研究的誘導型啟動子仍然很少。因 此，對于新的逆境相關啟動子的克隆、順式作用元件具體序列的確定、各元件之間的相互作 用，以及與這些元件互作的轉錄因子的研究仍然是今后啟動子研究的重點。


【發明內容】

[0007] 本發明所要解決的技術問題就是提供一種香蕉水通道蛋白基因啟動子，其核苷酸 序列如SEQ IDN0. 1所示。該序列長度為841bp。通過對該啟動子序列中的順式作用元件進 行預測分析，發現該啟動子具有響應干旱和高鹽的元件，含有1個響應干旱元件CBFHV，1個 ABA和干旱響應元件DRE2C0REZMRAB17,1個干旱、高鹽響應元件DRECRTCOREAT，1個早期響 應干旱元件MYCATERD1。
[0008] 本發明還提供了一種用于獲得香蕉水通道蛋白基因啟動子的引物對，所述引物對 為：
[0009] 正向兼并引物：5' -NTCGASTWTSGWGTT-3'（5, -NTCGA(G/C)T(A/T)T(G/C)G(A/T) GTT-3，）；
[0010] 三輪反向引物：
[0011] 第一輪反向引物prl:
[0012] 5'-AAACAGTGTAGACGAGGATGAAGGTG-3' ；
[0013] 第二輪反向引物pr2:
[0014] 5,-GGTACAGTAGACCAAGGCAAAGAT-3，；
[0015] 第三輪反向引物pr3:
[0016] 5'-CCTGTAGAAGGACCAAGAGGTGAGC-3' 。
[0017] 本發明還提供了一種香蕉水通道蛋白基因啟動子的獲得方法，該方法以具有香蕉 水通道蛋白基因的香蕉基因組DNA為模板，采用以下引物對：
[0018] 正向兼并引物：5'-NTCGASTWTSGWGTT-3' ；
[0019] 三輪反向引物：
[0020] 第一輪反向引物prl
[0021] :5'-AAACAGTGTAGACGAGGATGAAGGTG-3' ；
[0022] 第二輪反向引物pr2:
[0023] 5,-GGTACAGTAGACCAAGGCAAAGAT-3，；
[0024] 第三輪反向引物pr3:
[0025] 5'-CCTGTAGAAGGACCAAGAGGTGAGC-3' 。
[0026] 進行三輪PCR擴增，其所獲得的香蕉水通道蛋白基因啟動子為SEQ IDN0. 1。
[0027] 本發明還提供了一種重組表達載體，它含有權利要求1所述香蕉水通道蛋白基因 啟動子的植物表達載體。所述植物表達載體為PCAMBIA1304。該表達載體可使外源目的基 因的高效表達。
[0028] 本發明還提供了一種重組表達載體的構建方法，包括以下步驟：
[0029] 1)以香蕉水通道蛋白基因啟動子SEQ IDN0. 1為模板設計引物對，且引物對分別 上加 ECORI、SPeI酶切位點和保護堿基：
[0030] 正向引物Pl:
[0031] 5'-CGGAATTCATCGAGTATGGTGTTCCTATGCT-3' ，
[0032] 反向引物P2:
[0033] 5'-GGACTAGTCTATCACTATCTATCTCCCCTGT-3' ；
[0034] 2)以香蕉水通道蛋白基因啟動子SEQ IDN0. 1為模板進行PCR，PCR擴增條件如 下：
[0035] 94°C預變性 3min ;94°C變性 40s、55°C退火 40s、72°C延伸 40s，共 35 個循環；72°C 延伸8min ;獲得PCR產物；
[0036] 3)用ECORI、SPeI將PCR產物進行酶切，純化回收；同時，用ECORI、SPeI將 PCAMBIA1304載體進行雙酶切，去除CaMV35S啟動子，酶切產物跑瓊脂糖凝膠電泳檢測并回 收大片段；
[0037] 4)在IOul體系中，將回收的pCAMBIA1304載體大片段和回收的PCR產物用T4 連接酶4°C連接過夜，連接產物轉化大腸桿菌DH5a感受態細胞，將篩選得到的陽性克隆 用ECORI、SPeI進行酶切驗證，獲得得到表達Gus基因的植物重組表達載體pCAMBIA1304 : MaPIPl "-Promoter。
[0038] 本發明還提供了一種含有權利要求4和5所述重組表達載體的宿主細胞，所述宿 主細胞為農桿菌EHA105。
[0039] 本發明還提供了一種下述各項之一在培養干旱性和鹽害性植物中的應用，
[0040] (1)權利要求1所述的啟動子；
[0041] (2)權利要求4或5所述的重組表達載體；
[0042] (3)權利要求7所述的農桿菌EHA105。
[0043] 作為優選方案，所述的植物為擬南芥。
[0044] 本發明還提供了一種培育具有干旱性和鹽害性的轉基因植物的方法，包括以下步 驟：
[0045] 1)啟動子克隆；
[0046] 2)植物表達載體構建；
[0047] 3)受體的遺傳轉化；
[0048] 4)陽性轉基因植株的鑒定；
[0049] 5)抗旱性和耐鹽性表型及生理分析。
[0050] 本發明的有益效果在于：
[0051] 本發明利用啟動逆境相關基因的高效表達，應用于耐旱和耐鹽的轉基因植物中， 對于解決干旱和鹽害地區糧食危機、生態惡化等問題都有積極意義。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0052] 圖1為本發明的利用TAIL-PCR擴增啟動子三輪PCR產物鑒定電泳圖；
[0053] 圖2為本發明的MaPIPl ;1啟動子連接pCAMBIA1304質粒酶切鑒定電泳圖；
[0054] 圖3為本發明的植物表達載體構建示意圖；
[0055] 圖4為本發明pCAMBIA1304:MaPIPl ; I-Promoter轉化農桿菌PCR鑒定電泳圖；
[0056] 圖5為本發明的MaPIPl ;1啟動子序列中含有的順式作用元件的分析結果圖；
[0057] 圖6為本發明的35S啟動子和MaPIPl ;1啟動子轉基因擬南芥干旱和鹽脅迫處理 表型圖；
[0058] 圖7為本發明的35S啟動子和MaPIPl ;1啟動子轉基因擬南芥葉片中⑶S酶活定 量分析結果圖。

【具體實施方式】
[0059] 為了更好地解釋本發明，以下結合具體實施例進一步闡明本發明的主要內容，但 本發明的內容不僅僅局限于以下實施例。
[0060] 實施例1香蕉水通道蛋白基因 MaPIPl ;1啟動子的分離
[0061] 1、香蕉基因組DNA的制備
[0062] 取生長1個月的香蕉組培苗，采用CTAB法提取基因組DNA，經瓊脂糖凝膠電泳檢測 后于-20°C進行保存。
[0063] 2、MaPIPl ;1啟動子的克隆和序列分析
[0064] 以香蕉基因組DNA為模板，通過TAIL-PCR法設計三輪引物對，該引物對為：
[0065] 正向兼并引物：5' -NTCGASTWTSGWGTT-3'（5, -NTCGA(G/C)T(A/T)T(G/C)G(A/T) GTT-3，）；
[0066] 三輪反向引物：
[0067] 第一輪反向引物prl:
[0068] 5'-AAACAGTGTAGACGAGGATGAAGGTG-3' ；
[0069] 第二輪反向引物pr2:
[0070] 5'-GGTACAGTAGACCAAGGCAAAGAT-3' ；
[0071] 第三輪反向引物pr3:
[0072] 5'-CCTGTAGAAGGACCAAGAGGTGAGC-3' 。
[0073] 第一輪PCR反應體系為：模板為香蕉基因組DNAl μ?，正向簡并引物 0· 5μ 1(10μΜ/μ 1)，第一輪反向引物 prio. 5μ 1(10μΜ/μ 1)，Ex Taq by ffer2. 5μ 1，Ex TaqO. 25μ 1，dNTP4y 1，（ΜΗ2017μ I 共 25μ 1。
[0074] 第一輪PCR反應條件為92°C預變性3min，95°C變性lmin，1個循環；94°C變性30s， 65°〇退火111^11，721：延伸21^11，5個循環 ；941：變性3〇8,251：退火21^11，721：延伸21^11，1 個循環；94°C變性 30s，65°C退火 lmin，72°C延伸 2min，94°C變性 30s，65°C退火 2min，72°C 延伸211^11，941：變性3〇8,441：退火11^11，721：延伸21^11，15個循環；721：延伸51^11，1個循 環。
[0075] 第二輪PCR反應體系為：模板為第一輪反應產物稀釋50倍取1 μ 1，正向簡并引物 0· 5μ 1(10μΜ/μ 1)，第二輪反向引物 pr20. 5μ 1(10μΜ/μ 1)，Ex Taq by ffer2. 5μ 1，Ex TaqO. 25 μ I，dNTP4 μ I，ddH2017 μ I 共 25 μ I。
[0076] 第二輪PCR反應條件為94°C變性30s，65°C退火lmin，72°C延伸2min，94°C變性 30s，65°C退火 lmin，72°C延伸 2min，94°C變性 30s，45°C退火 lmin，72°C延伸 2min，12 個循 環；72°C延伸5min，1個循環。
[0077] 第三輪PCR反應體系為：模板為第二輪反應產物取Ιμ?，正向簡并引物 0· 5μ 1(10μΜ/μ 1)，第三輪反向引物 pr30. 5μ 1(10μΜ/μ 1)，Ex Taq by ffer2. 5μ 1，Ex TaqO. 25μ 1，dNTP4y 1，（ΜΗ2017μ I 共 25μ 1。
[0078] 第三輪PCR反應條件為94°C變性40s，45°C退火lmin，72°C延伸2min，20個循環； 72°C延伸5min，l個循環。
[0079] 將第三輪PCR產物檢測并回收測序，獲得長度為841bp的MaPIPl ;1啟動子，其 序列為 SEQ ID NO :1，使用 PLACE 軟件(http://www. dna. affrc. go. jp/PLACE/),圖 5 為 MaPIPl ;1啟動子含有的順式作用元件的分析結果，香蕉水通道蛋白基因啟動子序列中的 順式作用元件進行預測分析，發現該啟動子含有真核生物啟動子的基本保守元件TATA-box 和 CAAT-box。
[0080] 實施例2表達載體的構建
[0081] 1)以實施例1中回收的第三輪PCR產物為模板設計引物，引物上加 EC0RI、SPeI酶 切位點和保護堿基：
[0082] 正向引物Pl:
[0083] 5'-CGGAATTCATCGAGTATGGTGTTCCTATGCT-3' ，
[0084] 反向引物P2:
[0085] 5'-GGACTAGTCTATCACTATCTATCTCCCCTGT-3' ；
[0086] 2)?0?擴增條件為：941：預變性31^11;941：變性4〇8、551：退火4〇8、721：延伸4〇8， 共35個循環；72°C延伸8min。
[0087] 3)用EC0RI、SPeI將PCR產物進行酶切，純化回收。同時，用EC0RI、SPeI將 PCAMBIA1304載體進行雙酶切，去除CaMV35S啟動子，酶切產物跑瓊脂糖凝膠電泳檢測并回 收大片段。在10 μ 1體系中，將回收的PCAMBIA1304載體大片段和回收的PCR產物用T4連 接酶4°C連接過夜，連接產物轉化大腸桿菌DH5 α感受態細胞，
[0088] 4)將篩選得到的陽性克隆用EC0RI、SPeI進行酶切驗證（圖2)，獲得重組質粒，從 而使香蕉水通道蛋白基因啟動子取代載體PCAMBIA1304上的CaMV35S啟動子，與Gus基因 融合，得到表達Gus基因的植物重組表達載體pCAMBIA1304 :MaPIPl ; I-Promoter (圖3)。
[0089] 實施例3轉基因植株的獲得
[0090] 通過電擊轉化法，將在實施例2中構建的表達Gus基因的植物重組表達載體 PCAMBIA1304 :MaPIPl ;l-Promoter轉化到農桿菌中EHA105中，提取質粒并進行PCR鑒定 (圖4)，確定質粒真正的轉入到了農桿菌中。
[0091] 將擬南芥野生型種子撒播在花缽中，并在表面鋪一層細砂，將其放置在2?4°C， 濕潤、黑暗條件下春化處理1?3天，保濕待種子萌發。于人工氣候箱中培養，以蛭石為基 質，溫度控制在21?23°C，營養生長期每日光照時間為8h，生殖生長期每日為光照為16h， 光照強度為20001x，培養室相對濕度為70?90%。當幼苗長出真葉后，可進行移植。移栽 后保濕一星期左右，直至幼苗長出新葉。每隔4d澆適量的擬南芥營養液，待花苔長至5? IOcm及側苔抽出時，可用于轉化。
[0092] 將已轉化有pCAMBIA1304 :MaPIPl ;l-Promoter的農桿菌，加到含有Kan和Rif抗 生素的LB培養基中，28°C振蕩10h，加入擬南芥轉基因浸潤液（l/2MS，50g/L Sucrose)中， 將擬南芥倒置浸染到菌液中，采用花序浸染法進行轉化。
[0093] 將晾干的種子以75%乙醇+0. 02% Triton XlOO溶液浸泡lOmin，移除乙醇溶液， 重復2-3次，將種子吹打到無菌濾紙上，風干；將晾干的種子撒播在選擇培養基（1/2MS， L 5% Sucrose，0. 7%Agra，25y g/mL hygromycin B)上進行抗性篩選,收獲T3代種子進行 后續實驗分析。
[0094] 實施例4轉基因植株干旱和鹽脅迫處理表型分析
[0095] 將生長4周的轉基因擬南芥控水20天進行干旱脅迫，20天后，具有35S啟動子的 轉基因株系葉片大部分失綠，存活率已降至16%，而MaPIPl ; 1啟動子轉基因植株還保持較 強生命力，存活率為81 %，證明該轉基因植株具有更強的抗旱能力。同時，將生長4周的轉 基因擬南芥用350mM NaCl溶液澆灌15天進行鹽脅迫，15天后，具有35S啟動子的轉基因株 系葉片大部分萎蔫，存活率下降至12%，而MaPIPl ;1啟動子轉基因植株仍保持較高的存活 率為76%，證明該轉基因植株具有更強的耐鹽能力（圖6)。
[0096] 實施例5轉基因植株Gus表達活性分析
[0097] 取對照及進行干旱和鹽脅迫處理的轉基因擬南芥葉片，在液氮中研磨成粉末，力口 入⑶S蛋白提取緩沖液（50mM磷酸鈉緩沖液、Ph = 7. OlOmM Na. EDTA、0. 1% Triton X-100、 ΙΟΟπιΜβ-巰基乙醇）混勻。4°C 13000rpm離心10分鐘，取上清用于⑶S酶活分析。⑶S酶 活高低用GUS蛋白粗提液催化底物4-甲基傘形酮-β -D-葡糖醛酸苷（4-MUG)生成產物四 甲基傘形酮（4-MU)的量進行測定。用多功能酶標儀Varioskan Flash(Thermo公司）測定 熒光值，用酶標儀Model680 (Bio-Rad公司）以考馬斯亮藍法測定GUS蛋白粗提液中總蛋白 含量。測定結果顯示：香蕉MaPIPl ;1啟動子能夠增強基因的表達，同時該啟動子也受干旱 和高鹽脅迫誘導表達。
[0098] 其它未詳細說明的部分均為現有技術。盡管上述實施例對本發明做出了詳盡的描 述，但它僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部實施例，人們還可以根據本實施例在不經 創造性前提下獲得其他實施例，這些實施例都屬于本發明保護范圍。
【權利要求】
1. 一種香蕉水通道蛋白基因啟動子，其特征在于；其核苷酸序列如SEQ IDNO. 1所示。
2. 用于獲得權利要求1所述香蕉水通道蛋白基因啟動子的引物對，其特征在于；所述 引物對為： 正向兼并引物：5'-階11^5了'^56161'1'-3'； 三輪反向引物： 第一輪反向引物prl : 5' -AAACAGTGTAGACGAGGATGAAGGTG-3'； 第二輪反向引物pr2 : 5,-GGTACAGTAGACCAAGGCAAAGAT-3，； 第三輪反向引物pr3 : 5'-CCTGTAGAAGGACCAAGAGGTGAGC-3' 。
3. -種權利要求1或2所述香蕉水通道蛋白基因啟動子的獲得方法，其特征在于：以 具有香蕉水通道蛋白基因的香蕉基因組DNA為模板，采用以下引物對： 正向兼并引物：5'-階11^5了'^56161'1'-3'； 三輪反向引物： 第一輪反向引物prl : 5' -AAACAGTGTAGACGAGGATGAAGGTG-3'； 第二輪反向引物pr2 : 5,-GGTACAGTAGACCAAGGCAAAGAT-3，； 第三輪反向引物pr3 : 5'-CCTGTAGAAGGACCAAGAGGTGAGC-3' 。 進行三輪PCR擴增，其所獲得的香蕉水通道蛋白基因啟動子為SEQ IDNO. 1。
4. 一種重組表達載體，其特征在于：它含有權利要求1所述香蕉水通道蛋白基因啟動 子的植物表達載體。
5. 根據權利要求4所述的重組表達載體，所述植物表達載體為pCAMBIA1304。
6. -種權利要求4或5所述重組表達載體的構建方法，其特征在于：包括以下步驟： 1) 以香蕉水通道蛋白基因啟動子SEQ IDNO. 1為模板設計引物對，且引物對分別上加 ECORI、SPeI酶切位點和保護堿基，如下： 正向引物Pl : 5'-CGGAATTCATCGAGTATGGTGTTCCTATGCT-3' ， 反向引物P2 : 5'-GGACTAGTCTATCACTATCTATCTCCCCTGT-3' ； 2) 以香蕉水通道蛋白基因啟動子SEQ IDNO. 1為模板進行PCR，PCR擴增條件如下： 94°C預變性3min ;94°C變性40s、55°C退火40s、72°C延伸40s，共35個循環；72°C延伸 8min ;獲得PCR產物； 3) 用ECORI、SPe I將PCR產物進行酶切，純化回收；同時，用ECORI、SPe I將pCAMB IA1304 載體進行雙酶切，去除CaMV35S啟動子，酶切產物跑瓊脂糖凝膠電泳檢測并回收大片段； 4) 在10 ill體系中，將回收的pCAMBIA1304載體大片段和回收的PCR產物用T4連接酶 4°C連接過夜，連接產物轉化大腸桿菌DH5a感受態細胞，將篩選得到的陽性克隆用EC0RI、 SPeI進行酶切驗證，獲得得到表達Gus基因的植物重組表達載體pCAMBIA1304 :MaPIPl ; l-Promoter。
7. 含有權利要求4和5所述重組表達載體的宿主細胞，其特征在于：所述宿主細胞為 農桿菌EHA105。
8. 下述各項之一在培養干旱性和鹽害性植物中的應用，其特征在于： (1) 權利要求1所述的啟動子； (2) 權利要求4或5所述的重組表達載體； (3) 權利要求7所述的農桿菌EHA105。
9. 根據權利要求9所述的應用，其特征在于：所述的植物為擬南芥。
10. -種培育具有干旱性和鹽害性的轉基因植物的方法，其特征在于：包括以下步驟： 1) 啟動子克隆； 2) 植物表達載體構建； 3) 受體的遺傳轉化； 4) 陽性轉基因植株的鑒定； 5) 抗旱性和耐鹽性表型及生理分析。
【文檔編號】A01H5/00GK104313026SQ201410488543
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2014年9月23日 優先權日:2014年9月23日
【發明者】許奕, 金志強, 徐碧玉, 劉菊華, 賈彩紅, 張建斌, 胡偉, 苗紅霞, 王卓, 王甲水, 李羽佳, 王安邦, 宋順 申請人:中國熱帶農業科學院海口實驗站