本發明涉及一種荔枝樹苗的培養方法。
背景技術：
荔枝(學名：Litchi chinensis Sonn.)無患子科，荔枝屬常綠喬木，高約10米。果皮有鱗斑狀突起，鮮紅，紫紅。成熟時至鮮紅色；種子全部被肉質假種皮包裹。花期春季，果期夏季。果肉產鮮時半透明凝脂狀，味香美，但不耐儲藏。分布于中國的西南部、南部和東南部，廣東和福建南部栽培最盛。亞洲東南部也有栽培，非洲、美洲和大洋洲有引種的記錄。荔枝與香蕉、菠蘿、龍眼一同號稱“南國四大果品”。荔枝味甘、酸、性溫，入心、脾、肝經；可止呃逆，止腹瀉，是頑固性呃逆及五更瀉者的食療佳品，同時有補腦健身，開胃益脾，有促進食欲之功效。因性熱，多食易上火。荔枝木材堅實，紋理雅致，耐腐，歷來為上等名材。
荔枝樹木的幼樹生長期長，遺傳組成高度雜合，傳統的育種技術來改良荔枝形狀及培育新品種費時、費力，難以滿足荔枝產業發展的需要。因此，亟需一種快速高效地培育荔枝幼苗的方法。
技術實現要素：
本發明的一個目的是解決至少上述問題和/或缺陷，并提供至少后面將說明的優點。
本發明還有一個目的是提供一種荔枝樹苗的培養方法。
本發明提供的技術方案為：
一種荔枝樹苗的培養方法，包括：
步驟一、荔枝外植體獲取：在荔枝花芽萌發期，取荔枝花芽作為外植體，首先將荔枝花芽使用體積百分比9％的酒精溶液浸泡5-15min，之后使用自來水沖洗10-20min，然后用質量體積分數0.1％的次氯酸鈉溶液消毒8-10min，最后用無菌水沖洗3-5次，除去表面水分得到荔枝外植體；
步驟二、分化培養：將步驟一中得到的荔枝外植體接種于MS分化培養基中培養25～35天直至荔枝外植體的側芽分化長出叢生芽，其中，分化培養中的培養溫度為23-27℃，光照強度為2000-2500lux，光照周期為10-15小時/天；
步驟三、壯苗培養：將步驟二中經過分化培養的荔枝外植體在MS壯苗培養基中培養35～45天得到荔枝健壯植株，其中，壯苗培養中的培養溫度為23-27℃，光照強度為2000-2500lux，光照周期為10-15小時/天；
步驟四、生根培養：將經步驟三中得到的荔枝健壯植株置于MS生根培養基中培養45～55天得到帶根的荔枝樹苗，其中，生根培養中的培養溫度為23-27℃，光照強度為2000-2500lux，光照周期為10-15小時/天。
優選的是，所述的荔枝樹苗的培養方法中，所述步驟二中，MS分化培養基包含：MS，椰子乳30～40mg/L，0.1-0.4mg/L ZT，0.2～1mg/L 6-BA，0.2-0.8mg/L NAA，納米活性炭顆粒1～2g/L，25-30g/L蔗糖和4.8-5.8g/L瓊脂，并調節初始pH值為5.8。
優選的是，所述的荔枝樹苗的培養方法中，所述步驟三中，MS壯苗培養基包含：MS，椰子乳40～50mg/L，0.3-1.0mg/L 6-BA、0.2-0.8mg/L IAA，納米活性炭顆粒1～2g/L，25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L瓊脂，并調節初始pH值為5.8。
優選的是，所述的荔枝樹苗的培養方法中，所述步驟三中，MS生根培養基包含：1/2MS，椰子乳50～60mg/L，1.0-2.0mg/L NAA，納米活性炭顆粒1～2g/L，25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L瓊脂，并調節初始pH值為5.8。
優選的是，所述的荔枝樹苗的培養方法中，在所述步驟四之后還進行步驟五，所述步驟五包括：煉苗和移栽：先將步驟四中得到的帶根的木鱉植株在溫度25℃下煉苗2-4天，之后再移栽到沙土壤中生長45天，然后再移栽至大田生長，其中，大田的生長條件為：溫度為20-28℃，相對濕度為75-80％，遮陽率為70％。
優選的是，所述的荔枝樹苗的培養方法中，所述椰子乳為椰子經100目紗布過濾之后得到的液體。
本發明至少包含如下優點：
本發明的培養基中含有大量的椰子乳，椰子乳中含有蛋白質、脂肪、維生素C及鈣、磷、鐵、鉀、鎂、鈉等礦物質，同時含有較多的水分和驅蟲物質，使得培養基的營養更加豐富，且能夠促進荔枝外植體的生長。本發明的培養基中含有的納米活性炭顆粒能夠通氣透風，同時不易滋生細菌，使得培養基的營養成分分布更加均勻，不易板結，通風透氣，利于荔枝外植體的生根發芽。
本發明通過組織培養技術對荔枝進行組織培養快速繁殖，在短時間內培育出大量可供大田栽培的荔枝幼苗，提高了荔枝種苗的繁殖系數和種苗質量，實現規模化生產，滿足生產上的需要。
采用本發明的方法，獲得的組培苗生根率在90％以上，每株平均帶3-4個根，根長為2-3厘米，移栽沙床成活率在95％以上；快速、便捷、高效地進行荔枝組織培養，實現荔枝組培種苗的規模化生產。
具體實施方式
下面對本發明做進一步的詳細說明，以令本領域技術人員參照說明書文字能夠據以實施。
本發明提供一種荔枝樹苗的培養方法，包括：
步驟一、荔枝外植體獲取：在荔枝花芽萌發期，取荔枝花芽作為外植體，首先將荔枝花芽使用體積百分比9％的酒精溶液浸泡5-15min，之后使用自來水沖洗10-20min，然后用質量體積分數0.1％的次氯酸鈉溶液消毒8-10min，最后用無菌水沖洗3-5次，除去表面水分得到荔枝外植體；
步驟二、分化培養：將步驟一中得到的荔枝外植體接種于MS分化培養基中培養25～35天直至荔枝外植體的側芽分化長出叢生芽，其中，分化培養中的培養溫度為23-27℃，光照強度為2000-2500lux，光照周期為10-15小時/天；
步驟三、壯苗培養：將步驟二中經過分化培養的荔枝外植體在MS壯苗培養基中培養35～45天得到荔枝健壯植株，其中，壯苗培養中的培養溫度為23-27℃，光照強度為2000-2500lux，光照周期為10-15小時/天；
步驟四、生根培養：將經步驟三中得到的荔枝健壯植株置于MS生根培養基中培養45～55天得到帶根的荔枝樹苗，其中，生根培養中的培養溫度為23-27℃，光照強度為2000-2500lux，光照周期為10-15小時/天。
在本發明的其中一個實施例中，作為優選，所述步驟二中，MS分化培養基包含：MS，椰子乳30～40mg/L，0.1-0.4mg/L ZT，0.2～1mg/L 6-BA，0.2-0.8mg/L NAA，納米活性炭顆粒1～2g/L，25-30g/L蔗糖和4.8-5.8g/L瓊脂，并調節初始pH值為5.8。
在本發明的其中一個實施例中，作為優選，所述步驟三中，MS壯苗培養基包含：MS，椰子乳40～50mg/L，0.3-1.0mg/L 6-BA、0.2-0.8mg/L IAA，納米活性炭顆粒1～2g/L，25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L瓊脂，并調節初始pH值為5.8。
在本發明的其中一個實施例中，作為優選，所述步驟三中，MS生根培養基包含：1/2MS，椰子乳50～60mg/L，1.0-2.0mg/L NAA，納米活性炭顆粒1～2g/L，25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L瓊脂，并調節初始pH值為5.8。
在本發明的其中一個實施例中，作為優選，在所述步驟四之后還進行步驟五，所述步驟五包括：煉苗和移栽：先將步驟四中得到的帶根的木鱉植株在溫度25℃下煉苗2-4天，之后再移栽到沙土壤中生長45天，然后再移栽至大田生長，其中，大田的生長條件為：溫度為20-28℃，相對濕度為75-80％，遮陽率為70％。
在本發明的其中一個實施例中，作為優選，所述椰子乳為椰子經100目紗布過濾之后得到的液體。
實施例1
椰子乳為椰子經100目紗布過濾之后得到的液體。
本發明提供一種荔枝樹苗的培養方法，包括：
步驟一、荔枝外植體獲取：在荔枝花芽萌發期，取荔枝花芽作為外植體，首先將荔枝花芽使用體積百分比9％的酒精溶液浸泡5min，之后使用自來水沖洗10min，然后用質量體積分數0.1％的次氯酸鈉溶液消毒8min，最后用無菌水沖洗3次，除去表面水分得到荔枝外植體；
步驟二、分化培養：將步驟一中得到的荔枝外植體接種于MS分化培養基中培養25天直至荔枝外植體的側芽分化長出叢生芽，其中，分化培養中的培養溫度為23℃，光照強度為2000lux，光照周期為10小時/天；MS分化培養基包含：MS，椰子乳30mg/L，0.1mg/L ZT，0.2mg/L 6-BA，0.2mg/L NAA，納米活性炭顆粒1g/L，25g/L蔗糖和4.8g/L瓊脂，并調節初始pH值為5.8。
步驟三、壯苗培養：將步驟二中經過分化培養的荔枝外植體在MS壯苗培養基中培養35天得到荔枝健壯植株，其中，壯苗培養中的培養溫度為23℃，光照強度為2000lux，光照周期為10小時/天；MS壯苗培養基包含：MS，椰子乳40mg/L，0.3mg/L 6-BA、0.2mg/L IAA，納米活性炭顆粒1g/L，25g/L蔗糖和3.8g/L瓊脂，并調節初始pH值為5.8。
步驟四、生根培養：將經步驟三中得到的荔枝健壯植株置于MS生根培養基中培養45天得到帶根的荔枝樹苗，其中，生根培養中的培養溫度為23℃，光照強度為2000lux，光照周期為10小時/天。MS生根培養基包含：1/2MS，椰子乳50mg/L，1.0mg/L NAA，納米活性炭顆粒1g/L，25g/L蔗糖和3.8g/L瓊脂，并調節初始pH值為5.8。
步驟五：煉苗和移栽：先將步驟四中得到的帶根的木鱉植株在溫度25℃下煉苗2天，之后再移栽到沙土壤中生長45天，然后再移栽至大田生長，其中，大田的生長條件為：溫度為20℃，相對濕度為75％，遮陽率為70％。
實施例2
椰子乳為椰子經100目紗布過濾之后得到的液體。
本發明提供一種荔枝樹苗的培養方法，包括：
步驟一、荔枝外植體獲取：在荔枝花芽萌發期，取荔枝花芽作為外植體，首先將荔枝花芽使用體積百分比9％的酒精溶液浸泡15min，之后使用自來水沖洗20min，然后用質量體積分數0.1％的次氯酸鈉溶液消毒10min，最后用無菌水沖洗5次，除去表面水分得到荔枝外植體；
步驟二、分化培養：將步驟一中得到的荔枝外植體接種于MS分化培養基中培養35天直至荔枝外植體的側芽分化長出叢生芽，其中，分化培養中的培養溫度為27℃，光照強度為2500lux，光照周期為15小時/天；MS分化培養基包含：MS，椰子乳40mg/L，0.4mg/L ZT，1mg/L 6-BA，0.2-0.8mg/L NAA，納米活性炭顆粒2g/L，30g/L蔗糖和5.8g/L瓊脂，并調節初始pH值為5.8。
步驟三、壯苗培養：將步驟二中經過分化培養的荔枝外植體在MS壯苗培養基中培養45天得到荔枝健壯植株，其中，壯苗培養中的培養溫度為27℃，光照強度為2500lux，光照周期為15小時/天；MS壯苗培養基包含：MS，椰子乳50mg/L，1.0mg/L 6-BA、0.8mg/L IAA，納米活性炭顆粒2g/L，30g/L蔗糖和4.8g/L瓊脂，并調節初始pH值為5.8。
步驟四、生根培養：將經步驟三中得到的荔枝健壯植株置于MS生根培養基中培養55天得到帶根的荔枝樹苗，其中，生根培養中的培養溫度為27℃，光照強度為2500lux，光照周期為15小時/天。MS生根培養基包含：1/2MS，椰子乳60mg/L，2.0mg/L NAA，納米活性炭顆粒2g/L，30g/L蔗糖和4.8g/L瓊脂，并調節初始pH值為5.8。
步驟五：煉苗和移栽：先將步驟四中得到的帶根的木鱉植株在溫度25℃下煉苗2-4天，之后再移栽到沙土壤中生長45天，然后再移栽至大田生長，其中，大田的生長條件為：溫度為28℃，相對濕度為80％，遮陽率為70％。
實施例3
椰子乳為椰子經100目紗布過濾之后得到的液體。
本發明提供一種荔枝樹苗的培養方法，包括：
步驟一、荔枝外植體獲取：在荔枝花芽萌發期，取荔枝花芽作為外植體，首先將荔枝花芽使用體積百分比9％的酒精溶液浸泡10min，之后使用自來水沖洗15min，然后用質量體積分數0.1％的次氯酸鈉溶液消毒9min，最后用無菌水沖洗4次，除去表面水分得到荔枝外植體；
步驟二、分化培養：將步驟一中得到的荔枝外植體接種于MS分化培養基中培養30天直至荔枝外植體的側芽分化長出叢生芽，其中，分化培養中的培養溫度為25℃，光照強度為2250lux，光照周期為12.5小時/天；MS分化培養基包含：MS，椰子乳35mg/L，0.25mg/L ZT，0.6mg/L 6-BA，0.5mg/L NAA，納米活性炭顆粒1.5g/L，27.5g/L蔗糖和5.3g/L瓊脂，并調節初始pH值為5.8。
步驟三、壯苗培養：將步驟二中經過分化培養的荔枝外植體在MS壯苗培養基中培養30天得到荔枝健壯植株，其中，壯苗培養中的培養溫度為25℃，光照強度為2250lux，光照周期為12.5小時/天；MS壯苗培養基包含：MS，椰子乳45mg/L，0.65mg/L 6-BA、0.5mg/L IAA，納米活性炭顆粒1.5g/L，27.5g/L蔗糖和4g/L瓊脂，并調節初始pH值為5.8。
步驟四、生根培養：將經步驟三中得到的荔枝健壯植株置于MS生根培養基中培養50天得到帶根的荔枝樹苗，其中，生根培養中的培養溫度為25℃，光照強度為2250lux，光照周期為12.5小時/天。MS生根培養基包含：1/2MS，椰子乳55mg/L，1.5mg/L NAA，納米活性炭顆粒1.5g/L，28g/L蔗糖和4g/L瓊脂，并調節初始pH值為5.8。
步驟五：煉苗和移栽：先將步驟四中得到的帶根的木鱉植株在溫度25℃下煉苗3天，之后再移栽到沙土壤中生長45天，然后再移栽至大田生長，其中，大田的生長條件為：溫度為24℃，相對濕度為80％，遮陽率為70％。
盡管本發明的實施方案已公開如上，但其并不僅僅限于說明書和實施方式中所列運用，它完全可以被適用于各種適合本發明的領域，對于熟悉本領域的人員而言，可容易地實現另外的修改，因此在不背離權利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發明并不限于特定的細節和這里示出的實施例。